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PIRES-EGR-1-endostatin基因放疗抗肿瘤效应的实验性研究
肿瘤基因-放疗(gene-radiotherapy,GR)是目前研究热点,电离辐射可启动重组表达载体中早期生长反应因子1(early growth response-1,EGR-1)同时诱导下游基因的超强表达.
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辐射与化疗诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达的实验研究
目的 探讨辐照与阿霉素诱导早期生长反应因子(Egr-1)启动子调控造血生长因子基因表达对造血损伤的恢复作用.方法 构建携带Egr-1启动子且下游连接GM-CSF和EGFP基因的真核表达载体(Egr-EG);脂质体介导转染人骨髓基质细胞系HFCL;经60Co γ源辐照2.5 Gy或3μmol/L的阿霉素处理后,采用FACS检测转染细胞绿色荧光蛋白的表达,N-乙酰半胱氨酸(活性氧抑制剂)鉴定辐照及阿霉素处理诱导Egr-1调控下游基因表达的特异性;采用ELISA和RT-PCR检测辐照或阿霉素对HFCL/EG细胞GM-CSF蛋白及mRNA表达的影响;观察辐照及阿霉素处理后的细胞上清对CFU-GM形成的影响.结果 在辐照和阿霉素处理的HFCL/EG细胞中均显示EGFP和GM-CSF表达较未处理组明显增强(t=5.11,P<0.01),未处理组EGFP+细胞占1.2%,阿霉素组EGFP+细胞占15.2%,辐照组EGFP+细胞占18.2%;N-乙酰半胱氨酸明显减少辐照和阿霉素处理后细胞的绿色荧光蛋白表达强度,两组间差异无统计学意义(P0.05);辐照和阿霉素处理组细胞上清促进CFU-GM增殖作用较未处理组明显增强(t=4.37,P<0.01).结论 辐照和阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达可能对其所致的造血损伤具有一定的恢复作用.
关键词： 早期生长反应因子 电离辐射 阿霉素 粒-巨噬细胞集落刺激因子 活性氧 -
早期生长反应因子1过表达促进肾小管上皮细胞转分化
目的:探讨早期生长反应因子1(Egr-1)在肾小管上皮细胞转分化中的作用. 方法:(1)体外实验:用pcDNA 3.1,pcDNA 3.1/Egr-1转染肾小管上皮细胞株HK-2,qRT-PCR法、Westem免疫印迹法检测Egr-1及转分化标志物E-cadherin、成纤维细胞特异性蛋白(Fsp-1)mRNA及蛋白水平的表达变化;用pcDNA 3.1/Egr-1和siEgr-1或psilencer 3.1共转染HK-2,Western免疫印迹法检测Egr-1、E-cadherin、Fsp-1蛋白水平的表达变化.(2)体内实验:建立大鼠慢性肾纤维化模型--5/6肾脏次全切除,造模成功后免疫组化法检测大鼠肾组织中Egr-1、E-cadherin、Fap-1的表达. 结果:(1)与转染空载体相比,HK-2细胞过表达Egr-1后,上皮细胞标志性蛋白E-cad-herin表达减弱,成纤维细胞标志性蛋白Fsp-1表达增强(P<0.05),提示出现肾小管上皮细胞转分化表型.而用小干扰RNA干扰掉Egr-1后,与空载体组及亲本细胞组相比,转分化表型得到逆转.(2)体内实验证实,与假手术组(SOR)相比,5/6肾脏次全切除肾组织中,转分化标志蛋白E-cadherin表达减弱、Fsp-1表达增加,同时肾小管上皮细胞Egr-1的表达明显升高,提示肾小管上皮细胞发生转分化,且其与Egr-1过表达密切相关. 结论:Egr-1的过表达促进了肾小管上皮细胞转分化,参与肾间质纤维化的发生发展.
关键词： 上皮细胞向间质转分化 早期生长反应因子 E钙粘素 成纤维细胞特异性蛋白 -
吡咯喹啉醌对大鼠雪旺细胞增殖及其EGR1、EGR2基因表达的影响
目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对大鼠雪旺细胞的促进增殖作用及其EGR1、EGR2基因表达的影响.方法 体外原代培养大鼠雪旺细胞,纯化及S-100免疫荧光鉴定;加入PQQ进行培养,使PQQ终浓度分别为0、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L,持续作用72 h,提取总RNA进行RT-PCR,检测EGR1及ECR2基因的表达变化.结果 PQQ可促进雪旺细胞增殖并改变其形态,1～1 000 nmol/L的PQQ可使EGR1、EGR2基因表达增高,10 000 nmol/L时抑制EGR1及EGR2基因的表达.结论 PQQ可促进大鼠雪旺细胞增殖并改变其形态,使雪旺细胞ERG1及EGR2基因表达上调.
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早期生长反应因子1在正常卵巢及卵巢良、恶性肿瘤组织中的表达及意义
目的：观察早期生长反应因子1（ EGR－1）在正常卵巢组织和卵巢良、恶性肿瘤组织中的表达，探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及临床意义。方法收集正常卵巢组织20例、良性肿瘤20例、恶性肿瘤60例，应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色，检测EGR－1在正常卵巢组织和卵巢良、恶性肿瘤组织中mRNA和蛋白的表达；分析卵巢恶性肿瘤组织中EGR－1的表达与临床指标及预后的相关性。结果（1）正常卵巢组织及良性肿瘤中EGR－1 mRNA和蛋白水平表达明显高于卵巢恶性肿瘤（均P＜0.05），正常卵巢组织与良性肿瘤中EGR－1表达差异无统计学意义（P＞0.05）；（2）卵巢恶性肿瘤中EGR－1低表达与患者年龄、病理类型无关（P＞0.05），但与手术病理分期、分级和淋巴结转移显著相关（P＜0.05）；（3）卵巢恶性肿瘤患者EGR－1相对低表达者5年累积生存率显著低于EGR－1相对高表达者（礸2＝4.545，P＜0.05）。结论 EGR－1在卵巢恶性肿瘤中表达下调，可能在卵巢恶性肿瘤的发生、发展中起重要的作用，有望作为卵巢恶性肿瘤分级、分期及预后判断的指标。
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转录因子BTEB2与血管平滑肌细胞增殖
转录因子是一类脱氧核糖核酸(DNA)结合蛋白,它们与基因启动子中特定序列结合,从而调节基因的表达.血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是血管成形术,特别是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄(RS)的主要病理特征.近年来,许多研究表明某些转录因子在VSMC增殖及RS形成的过程中起重要调控作用.在各种外界剌激的作用下,细胞外信号经过细胞内信号传递系统到达核内,诱导一系列VSMC增殖相关基因的表达,启动细胞周期,从而推动VSMC分裂、增殖.而这些基因表达又受某些核内转录因子的调控.对早期生长反应因子-1(Egr-1)、生长停止特异性同源框蛋白(Gax)和GATA结合蛋白-6(GATA-6)等转录因子的干预实验成功地抑制了VSMC的增殖和血管新生内膜形成.这些研究为制定新的RS防治策略提供了有用的线索.本文对新发现的转录因子BTEB2(基本转录元件结合蛋白2)的研究进展及其与VSMC增殖的关系作一综述.
