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XAF1基因对顺铂诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用的研究
目的:通过顺铂诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡,研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1,XAF1)基因在A549细胞中的表达情况,初步探讨该基因在凋亡中的作用.方法:采用4 μg/mL浓度的顺铂处理A549细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率；AnnexinV/7-AAD检测A549细胞凋亡情况；RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测A549凋亡后XAF1 mRNA和蛋白的表达；Caspase-3试剂盒检测A549细胞凋亡后Caspase-3的活性.结果:用4μg/mL浓度顺铂处理A549细胞2、12和24 h后,A549细胞增殖抑制率分别为(3.40±0.65)％、(8.31±0.73)％和(14.72±0.24)％,与对照组(1.03±0.28)％相比均明显增高,P值分别为0.004、0.000和0.000,细胞增殖抑制率随时间增加而增强；A549细胞凋亡率分别为(4.35±0.95)％、(9.69±2.60)％和(22.35±1.24)％,与对照组(1.39±0.21)％相比均明显增加,P值分别为0.006、0.005和0.000,细胞凋亡率随顺铂作用时间延长而增加；实验组XAF1 mRNA表达水平分别为(0.199±0.029)、(0.654±0.093)和(1.216±0.101),对照组为(0.091±0.020),XAF1 mRNA表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.006、0.001和0.000；实验组XAF1蛋白表达水平分别为(0.322±0.041)、(0.508±0.014)和(0.901±0.014),对照组为(0.124±0.007),XAF1蛋白表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.001、0.000和0.000；Caspase-3活性(A405 nm)分别为(34.745±3.781)、(69.524±3.096)和(94.787±5.429),对照组为(21.914±1.962),Caspase-3活性随顺铂作用时间的延长而增加.结论:顺铂诱导A549细胞凋亡可以引起XAF1表达增加,且随细胞凋亡水平的提高而增加,提示XAF1可能参与顺铂诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡过程.
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XAF1增强TRAIL诱导人结肠癌细胞株HCT116凋亡的实验研究
背景:肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)可特异性诱导肿瘤细胞凋亡.X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是新型抑癌基因,在肿瘤细胞中呈低表达.目的:研究XAF1联合TRAIL诱导人结肠癌细胞株HCT116凋亡的作用.方法:构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null,分别以相同感染复数(M01)感染人结肠癌细胞株HCT116,并设立空白对照组,感染4h后加入重组入TRAIL (rhTRAIL).以RTPCR法检测XAF1 mRNA表达；以蛋白质印迹法检测XAF1、PARP、caspase-3、-8、-9蛋白表达；以Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率；以MTT法检测细胞增殖抑制率.结果:Ad5/F35-XAF1组和TRAIL+ Ad5/F35-XAF1组XAF1 mRNA和蛋白表达显著高于其余各组.TRAIL+ Ad5/F35-XAF1组PARP、caspase-3、-8、-9蛋白可见明显凋亡裂解带,其余各组未见明显裂解带.Ad5/F35-XAF1组、TRAIL组、TRAIL+ Ad5/F35-Null组、TRAIL+ Ad5/F35-XAF1组细胞凋亡率较空白对照组和Ad5/F35-Null组显著增加(P＜0.05),以TRAIL+ Ad5/F35-XAF1组增加为显著.TRAIL+ AdS/F35-XAF1组HCT116细胞增殖抑制率显著高于TRAIL组和TRAIL+ Ad5/F35-Null组(P＜0.05),并呈浓度和时间依赖性.结论:XAF1可增强TRAIL诱导的HCT116细胞凋亡和抑制增殖的作用.
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XAF1基因对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响
目的 探讨Ad5/F35腺病毒介导的X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)基因对胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响.方法 构建和包装Ad5/F35- XAF1重组腺病毒并感染胰腺癌细胞SW1990(Ad5/F35-XAF1组),设立对照病毒感染组(Ad5/F35-Null组)和空白组.运用RT-PCR技术和Western blotting分析对感染细胞进行鉴定.流式细胞仪检测细胞凋亡并分析细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡率;MTT法检测细胞增殖.结果 Ad5/F35-XAF1组SW1990细胞XAF1mRNA和蛋白表达水平均明显上调.与空白对照组和Ad5/F35-Null组比较,Ad5/F35-XAF1组细胞凋亡率明显增加,增殖活性明显降低,G2/M期细胞比例显著增加,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞SW1990后,能促进细胞凋亡并抑制细胞增殖.
关键词： X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 胰腺癌 细胞凋亡 细胞周期 -
Ad/F35-XAF1对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨腺病毒Ad/F35介导的X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)形成的重组腺病毒(Ad5/F35 XAF1)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 将非小细胞肺癌细胞(SK MES-1、A549)分为重组腺病毒Ad5/F35-XAF1转染组(A组)、Ad5/F35-EGFP 转染组(B组)和未转染空白对照组(C组).采用MTT法和流式细胞术分别检测转染后肺癌细胞的增殖和凋亡.结果 与B、C组比较,A组肺癌细胞生长和增殖明显抑制,凋亡率显著升高,且与滴度呈正相关(P＜0.05).结论 XAF1可抑制非小细胞肺癌细胞增殖,并诱导肺癌细胞凋亡.
关键词： 非小细胞肺癌 X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 重组腺病毒 -
XAF1基因在兔肺挫伤细胞凋亡中的作用
目的 探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 (XAF1)基因在肺挫伤后细胞凋亡中的作用.方法 25只新西兰白兔随机均分为五组:肺挫伤后6h组(A1组)、24 h组(A2组)、48 h组(A3组)、72 h组(A4组)及正常对照组(C组);A1、A2、A3和A4组采用自由落体撞击装置建立兔肺挫伤模型.TUNEL法检测肺挫伤后细胞凋亡,RT-PCR和免疫组化方法检测XAF1 mRNA及蛋白在肺组织中的表达.结果 与C组相比,A1、A2、A3、A4组肺组织细胞凋亡显著增多,XAF1mRNA及其蛋白表达明显升高,48 h达峰值(P＜0.05).结论 肺挫伤诱导XAF1 mRNA和蛋白表达增加,调控细胞凋亡.
关键词： 肺挫伤 X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1
