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胸腺活化调节趋化因子及其受体在早孕绒毛组织中的表达特征及生物学功能
目的 探讨早孕绒毛组织中胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其特异性受体4(CCR4)的表达特征及生物学功能.方法 收集正常早孕(孕6～8周)妇女人工流产术后的绒毛组织,采用逆转录(RT) PCR技术检测TARC、CCR4的mRNA表达水平；免疫组化法检测TARC、CCR4的蛋白表达水平.原代分离、培养绒毛外细胞滋养细胞,免疫荧光法检测TARC、CCR4蛋白在细胞水平的表达；体外侵袭实验检测不同浓度(10、25、50、100 ng/ml)的重组蛋白TARC(rhTARC)与无血清RPMI 1640培养基(对照组)对绒毛外细胞滋养细胞系HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响；阻断试验检测TARC对细胞侵袭能力影响的特异性,实验分4组:对照组、100 ng/ml rhTARC组、100 ng/mlrhTARC+ 20 μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rhTARC+ 20 μg/ml IgG组,检测各组HTR8/SVneo细胞的侵袭能力变化；蛋白印迹法检测100 ng/ml rhTARC组整合素α5及整合素β1蛋白表达水平.结果 (1)体内试验:人早孕绒毛组织中均有TARC及CCR4 mRNA的表达；TARC蛋白主要表达于细胞滋养细胞、合体滋养细胞及滋养层柱的远端,CCR4蛋白特异性地表达于绒毛外间质细胞滋养细胞.(2)体外试验:①免疫荧光法检测显示,TARC、CCR4蛋白在绒毛外细胞滋养细胞中的表达均呈阳性；②体外侵袭实验显示,HTR8/SVneo细胞经10、25、50、100 ng/ml浓度的rhTARC处理后,细胞的侵袭能力逐渐增加,穿膜细胞数分别为(142±31)、(161 ±46)、(201 ±30)、(312 ±48)个,对照组为(117±33)个,与25 ng/ml rhTARC处理时的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(P ＜0.05)；100 ng/ml的rhTARC处理时,侵袭能力达高峰(P＜0.01)；③阻断试验结果显示,100 ng/ml rhTARC组、100 ng/mlrhTARC+ 20 μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rhTARC+ 20 μg/ml IgG组和对照组侵袭到小室对侧的细胞数分别为(313±47)、(113 ±41)、(287±75)、(128 ±23)个；④免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,100 ng/ml rhTARC组整合素α5的蛋白表达水平明显升高,整合素β1的蛋白表达水平也有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.01,JP＜0.05).结论 TARC特异性地表达于人早孕绒毛,并通过上调整合素α5及整合素β1的蛋白表达增加滋养细胞的侵袭能力,可能在滋养细胞分化及胎盘形成过程中发挥重要作用.
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CD4+CD25+ T regs与CCL17和CCL22在头颈鳞状细胞癌发病机制中的初步研究
目的:探讨CD4+CD25+ T regs与CCL17、CCL22在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)发病分子机制中的关系.方法:选取HNSCC手术患者20例,均为初发或治疗后(放化疗、手术)复发的患者.取术后大体标本的部分肿瘤原发灶作为试验组,同时取距肿瘤原发灶1～3 cm的部分癌旁正常组织作为对照组.利用免疫荧光检测CD4+/Foxp3及CD25+/Foxp3,利用ELISA检测CCL17、CCL22.比较两组之间CD4+、CD25+以及CCL17、CCL22的差别,分析CD4+、CD25+与CCL17、CCL22之间的相关性.结果:试验组与对照组之间CD4+/Foxp3、CD25+/Foxp3平均光密度值差异有统计学意义(均P＜0.05).试验组与对照组之间CCL17、CCL22检测浓度值差异有统计学意义(均P＜0.01).试验组中CD25+与CCL17、CCL22之间具有明显正相关(r=0.595、0.720,P＜0.01).结论:CD4+CD25+ T regs与CCL17、CCL22在HNSCC发病的免疫机制中具有重要作用,两者相互影响,共同促进了HNSCC的复发和转移.
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健脾养血祛风方对慢性湿疹小鼠模型趋化因子CCL17和CCL18的影响
目的 观察健脾养血祛风方对慢性湿疹小鼠模型血清及皮肤组织中趋化因子CCL17和CCL18的作用.方法 取健康雄性小鼠50只,随机分为5组,即空白对照组、慢性湿疹模型组、慢性湿疹西药治疗组、慢性湿疹中药治疗高剂量组及低剂量组.中药组以健脾养血祛风方进行治疗,西药组以盐酸左西替利嗪治疗;采用流式细胞仪检测小鼠脾细胞CD4+和CD8+水平并计算其比值;采用ELISA法检测小鼠血清嗜酸性粒细胞活化趋化因子CCL17和CCL18水平;采用RT-PCR法检测小鼠背部皮肤组织中CCL17和CCL18的表达.结果 治疗组干预后,小鼠脾细胞CD4+水平、CD4+/CD8+显著升高,血清中CCL17和CCL18水平显著下降,小鼠皮损中CCL17和CCL18的表达明显减弱.以上与模型组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05).中药高剂量组各指标与西药组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 健脾养血祛风方能够显著上调慢性湿疹小鼠模型CD4+水平及CD4+/CD8+比值;下调慢性湿疹小鼠模型趋化因子CCL17及CCL18血清水平、抑制CCL17及CCL18在病变组织中的表达,对失衡状态下的细胞免疫具有较好的调节作用.
