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DD3和PSA基因在前列腺癌组织中的定量表达分析
目的 探讨DD3 mRNA和PSA mRNA在前列腺组织中表达的临床意义及诊断前列腺癌(PCa)的价值.方法 荧光定量RT-PCR法分析21例PCa组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织DD3 mRNA和PSA mRNA的表达,ROC曲线对DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA比值诊断PCa的价值进行分析.结果 PCa组织中DD3 mRNA、PSA mRNA表达量和DD3 mRNA/PSA mRNA比值均显著高于BPH组织,差异有统计学意义(P＜0.01).不同临床分期和分化程度之间DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA比值差异无统计学意义(P值均＞0.05).ROC曲线分析结果显示,DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA的曲线下面积分别为0.937、0.755和0.839.当DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA临界值分别为1.4×105拷贝/mg组织、3.0×107拷贝/mg组织和5.0×10-3时,敏感性分别为90.5%、81.0%和81.0%,特异性分别为85.0%、62.0%和66.7%.若将DD3 mRNA和PSA mRNA联合用于PCa的诊断,其特异性与DD3 mRNA相同,为85.0%,敏感性可达100.0%.结论 PCa组织中DD3 mRNA和PSA mRNA表达量均增加,但组织中DD3 mRNA的定量检测更具诊断价值,联合检测有利于提高诊断敏感性,对PCa的诊断具有一定临床应用价值.
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尿液PCA3基因检测在前列腺癌诊断中的意义
近年来临床上前列腺癌的患者明显增多,其诊断指标有血清PSA和前列腺穿刺活检,由于临床上影响PSA升高的因素很多,临床假阳性的概率高;其穿刺活检是一种有创性检查,感染和出血的机会大,所以有必要用一种更特异的检测方法来诊断前列腺癌.PCA3是近几年来所发现的一种佳的前列腺癌特异基因,其表达仅在前列腺上皮细胞,且具有肿瘤特异性.本实验建立在RT-PCR基础上检测尿液中PCA3基因表达情况,以探讨其在前列腺癌诊断中临床意义.
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荧光实时定量RT-PCR检测DD3 mRNA方法的建立
目的 建立荧光实时定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测前列腺癌(Pca)特异基因DD3 mRNA的方法.方法 在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条TaqMan-MGB探针,优化反应体系,建立DD3 mRNA的FQ-RT-PCR方法,并进行方法学评价.将PCR扩增产物经凝胶电泳纯化后与pBluescriptⅡSK载体连接,再将重组质粒转化感受态细胞进行克隆;提取重组质粒在紫外分光光度计上定量,作为定量检测的标准品.结果 重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pBluescriptⅡSK-DD3cDNA克隆成功.PCR扩增产物经测序分析证实为DD3 mRNA特异性片段.本法灵敏度为6拷贝/反应,线性范围为6～6×108拷贝/反应,相关系数为0.9985,批内、批间变异系数分别为1.0%～2.0%和1.3%～6.6%.结论 成功建立了FQ-RT-PCR检测DD3 mRNA的方法.为DD3 mRNA作为前列腺癌的诊断指标提供了方法学依据,也为其他肿瘤基因的检测提供了方法学启示.
关键词： DD3基因 mRNA 实时荧光定量RT-PCR 前列腺癌 -
DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析
目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义.方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析.结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达.DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104 拷贝/mg 组织.PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P＜0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P＞0.05).DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性.DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879～0.995).当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11.结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性.DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性.DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值.
关键词： 前列腺癌 DD3基因 实时荧光定量RT-PCR 前列腺组织 -
前列腺癌生物标志物的研究进展
前列腺癌(PCa)是一种发生于前列腺组织中的恶性肿瘤,是前列腺腺泡细胞异常无序生长的结果.PCa发病率具有明显的地理和种族差异,在欧美等发达国家和地区,是男性常见的恶性肿瘤,病死率居各种癌症第2位[1];在亚洲,其发病率低于西方国家,但近年来随着人口老龄化及生活条件的改善,发病率呈迅速上升趋势[2];在我国,PCa在男性泌尿、生殖系统恶性肿瘤中发病率已跃居第3位,患者主要是老年人,严重影响着我国老年男性的晚年生活质量[3,4].PCa的生存率有赖于早期的诊断和治疗,生物标志物往往能先于其他手段如直肠指检(DRE)、超声等检出癌症,故寻找有效的生物标志物一直是研究的热点.现就PCa生物标志物研究进展作一综述.
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前列腺癌患者DD3基因表达研究进展
前列腺癌的术前诊断方法主要包括血清前列腺特异性抗原(PSA)或前列腺膜抗原(PSMA)检测、直肠指检、直肠超声检查,但效果均不佳[1～3].文献[4,5]报道DD3基因仅在前列腺上皮细胞表达,且具有肿瘤特异性,在前列腺癌早期诊断和判断预后方面具有很好的临床应用前景.现将相关研究进展综述如下.
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DD3基因在前列腺癌中的研究进展
前列腺癌是男性泌尿系统常发且严重威胁男性健康的恶性肿瘤,且预后较差.由于其临床上缺乏明显的症状且影像学也缺乏特殊表现,等到发现时多已进展到晚期,唯一能避免此结果的方法就是通过有效、准确的检测从而早期诊断,并进行相应治疗.目前,关于以DD3作为前列腺癌的肿瘤标记物进行检测是为研究热点,研究者对样本的选取以及相关检测方法均进行了探索,本文将对这一新研究探索进行综述.
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DD3基因实时荧光定量RT-PCR检测前列腺癌特异性方法的建立
目的 建立DD3基因实时荧光定量PCR检测前列腺癌特异性方法,为前列腺癌的快速诊断提供分子诊断依据.方法 根据Genebank中的 DD3 mRNA全序列,设计DD3基因的特异引物和探针,采用基因重组技术构建用于DD3基因检测的定量标准品;建立DD3基因的实时荧光定量方法.结果 成功构建了用于DD3基因荧光定量PCR检测的标准重组质粒和DD3基因实时荧光定量PCR方法;经稳定性、特异度、重复性和敏感度实验方法学评价,DD3基因实时荧光定量PCR方法的低检测限为1.64 copy/ml,线性范围为1.64～1.64×1012copy/ml.结论 DD3基因实时荧光定量PCR检测前列腺癌特异性方法的建立,将为前列腺癌特异性诊断及其临床应用奠定方法学基础.
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前列腺癌特异DD3基因实时荧光定量PCR检测方法建立及初步应用
目的:建立实时荧光定量PCR检测特异DD3基因方法,探讨其在前列腺癌早期诊断中的应用价值.方法:根据Genebank中的DD3 mRNA全序列,设计DD3基因的特异引物和探针,构建用于制备DD3基因检测的定量标准品的克隆载体;建立DD3基因的实时荧光定量方法,分别用于前列腺癌患者全血、尿液、前列腺液标本的检测.结果:经稳定性、特异性、重复性和敏感性实验评价,DD3基因实时荧光定量PCR方法的低检测限为1.64×103拷贝/L,线性范围为1.64×103～1.64×1015拷贝/L.对临床收集的19份前列腺癌患者,20份非前列腺癌患者、30份健康者的全血、尿液及前列腺液标本进行检测.19份前列腺癌患者标本中阳性率分别为100%(全血)、80%(尿液)、100%(前列腺液);20份非前列腺癌患者标本中只有1份前列腺液出现低拷贝值(1×105拷贝/L);30份健康者标本均为阴性.在全血、尿液、前列腺液标本中,前列腺癌患者DD3 mRNA含量明显高于非前列腺癌患者和健康者(P<0.05).结论:DD3基因是一种用于前列腺癌早期诊断的特异性指标,可用于生物体液中少量癌细胞的检测,在前列腺癌早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面均具有潜在的应用价值.
关键词： DD3基因 mRNA 实时荧光定量RT-PCR 前列腺肿瘤 -
DD3基因在前列腺癌诊断中的应用
前列腺癌(Prostatic cancer,PCa)是男性泌尿系统常见的恶性肿瘤.据欧美国家男性泌尿外科文献报道,PCa的发病率居恶性肿瘤第二位,2005年新发现PCa患者232 090例,死于PCa患者30 350例.因此,PCa是50岁以上男性的第三位癌症死因[1].据统计,中国现在PCa的发病率比20世纪60年代增加50%以上.顾方六等[2]统计前列腺癌在泌尿系肿瘤中发病率由3.3%上升至13.4%.我国PCa的发病率虽低于欧美国家,但随着我国人口老龄化和饮食结构的改变,近年来PCa发病率日趋增高.
