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甾体类激素受体AR、ER对前列腺癌中L-plastin表达的调控
目的研究甾体类激素受体AR、ER对前列腺癌L-Plastin基因的调控作用,确定甾体类激素对前列腺癌的调节作用.方法构建L-plastin启动子于含荧光素酶的pGL3质粒,利用PCR定点突变法依次构建切除ARE1、ARE2、ARE3、ERE序列的pGL3重组子,将重组子转染到前列腺癌细胞系LNCaP,检测荧光素酶强度,以了解ARE1、ARE2、ARE3、ER调控L-plastin表达能力.结果成功构建了L-plastin启动子的荧光素酶pGL3重组子以及切除ARE1、ARE2、ARE3、ERE位点的重组子,将这些重组子转染细胞后其荧光素酶强度有明显改变,切除ARE1位点后,荧光素酶活性下降1/3;切除ARE2后,荧光素酶活性与单纯切除ARE1相比下降1/2;切除ARE3后荧光素酶活性升高1倍;切除ERE后,荧光素酶活性下降约4/5.结论在L-plastin启动子转录活性中ARE1、ARE2、ARE3、ERE在前列腺癌中对其下游基因L-plastin起到调控作用,ARE1、ARE2、ERE起促进作用,ARE3起抑制作用.而且,L-plastin启动子上存在其他受甾体类激素调控的位点.
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CCL25介导急性T淋巴细胞性白血病Jurkat细胞L-plastin的迁移
目的：研究CCL25对T-ALL细胞系Jurkat上L-plastin（LPL）迁移作用的影响，为临床治疗提供理论依据。方法：用激光共聚焦显微镜检测CCL25处理前后，LPL的形态变化。结果：静息状态下，LPL均匀分布在胞浆内，与F-actin不共定位。CCL25处理后，LPL发生迁移，与F-actin发生共定位。结论：CCL25介导Jurkat细胞LPL的迁移。
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网素（L－plastin）在子宫内膜癌中的表达及意义
目的：探讨L－plastin在子宫内膜癌组织中的表达及其在癌变发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法（ S－P法），检测45例子宫内膜癌、20例子宫内膜不典型增生，16例正常子宫内膜中的L－plastin的表达。观察其在子宫内膜癌临床病理学参数的关系，分析其在肿瘤发生发展中的作用。结果在子宫内膜癌中L－plastin蛋白的表达明显低于非典型增生内膜及正常增生期内膜组织（ P＜0.01）。在不同手术病理分期子宫内膜癌组织中有显著性差异（ P＜0.05），在不同病理分级的子宫内膜癌组织中无显著性差异（P＞0.05），在不同肌层浸润深度中有显著性差异（P＜0.05），在有无淋巴结转移子宫内膜癌组织中无显著差异（P＞0.05）。结论L－plastin蛋白参与了子宫内膜癌癌变的病理过程.L－plastin蛋白在子宫内膜癌中存在过度表达，L－plastin的过度表达与手术病理分期和肌层浸润深度有关。
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前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件的鉴定
目的:寻找前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件序列,并鉴定其相应的转录因子与调控途径.方法:在切除L-plastin启动子中甾体类激素受体位点并建立相应的荧光素酶重组子的基础上,利用外切酶行巢式切除法分段切除L-plastin启动子基因序列,并建立相应的荧光素酶重组子,检测切除各启动子序列片段后有雄激素刺激组和无雄激素刺激组的荧光素酶活性,寻找调控L-plastin表达的非甾体激素类启动子基因序列所在位置,通过Transfect软件分析寻找对应的转录因子,再通过定点突变技术切除转录因子的结合位点并进一步进行荧光素酶活性测定,从而获得调控L-plastin表达的非甾体激素类途径.结果:成功分段切除了L-plastin启动子,并建立了相应的荧光素酶重组子,转染细胞后在有及无双氢睾酮刺激下检测荧光素酶活性,发现在-206～1片段存在明显的非甾体激素受体类的调控途径,通过软件分析发现AP-4和SP-1可以与该片段结合.切除AP-4和SP-1位点后,荧光素酶活性下降,以AP-4尤为明显.结论:在L-plastin启动子中,除了甾体类激素受体途径,仍然存在其他非甾体类调控途径,该调控途径的结合位点主要在-206～1之间,可能是通过AP-4和SP-1与该片段的启动子基因序列结合来上调L-plastin基因表达的.
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鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子
[目的]鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子,进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制.[方法]在鉴定L-plastin启动子近3'端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上,利用TFSEARCH软件分析该片段的序列,寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,并检测切除该片段序列后荧光素酶活性,研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用.[结果]TF SEARCH软件分析表明在距转录起始点-199～-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG,凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3'端序列CAGCTG的转录因子,删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降.[结论]AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子.
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子宫内膜异位症患者异位及在位内膜的L-plastin与雌激素受体的表达及相关性研究
目的:探讨子宫内膜异位症(内异症)患者L-plastin与雌激素受体的表达及二者的相关性在内异症发生、发展中的意义.方法:采用RT-PCR方法及免疫组化S-P法检测L-plastin及雌激素受体在内异症患者的在位和异位内膜及正常子宫内膜中的表达,并对二者表达的相关性进行分析.结果:L-plastin在内异症患者在位及异位内膜中的表达水平均高于正常子宫内膜(P＜0.05),且其在异位内膜中的表达水平高于在位内膜(P＜0.05)；雌激素受体在内异症患者在位及异位子宫内膜中的表达强于正常子宫内膜(P＜0.05),且其在在位内膜中的表达强于异位内膜(P＜0.05).结论:L-plastin和雌激素受体在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜中均表达增高,且呈正相关.L-plastin可能通过与ER结合在子宫内膜异位症发生、发展中发挥作用.L-plastin可能是与雌激素代谢相关的子宫内膜异位症特异性靶基因.
