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肾癌G250抗原基因真核表达载体的构建和序列测定
目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定.方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定. 结果肾癌组织RT-PCR扩增后,均产生特异性条带,位置在1000 bp和1600 bp之间,与预定相符.pcDNA3.0-G250分别用HindⅢ、Xho I双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;抗原基因编码区序列与Genbank登录号BC014950文献报道的序列同源性为100%,目的基因与载体正确连接.结论成功克隆了肾癌G250抗原的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.0-G250,为核素标记的G250单克隆抗体在诊断和治疗的应用及G250基因修饰的树突状细胞疫苗的肾癌生物治疗提供了依据.
关键词： 肾肿瘤 癌 G250/MN/CAIX抗原 逆转录-聚合酶链式反应 克隆 序列分析 -
肾癌G250 MN/CAIX重组质粒DNA免疫效应的初步研究
[目的]观察PCDNA3.0-G250重组质粒在小鼠中诱导产生DNA免疫应答的特点及抑瘤效应.[方法]PCDNA3.0-G250质粒每隔2周肌注射Balb/c小鼠共3次,对照组同法肌注PCDNA3.0质粒.每次免疫10 d后眶后取血,间接免疫荧光法检测血清抗体.6周后取脾细胞观察体外细胞毒效应.同法免疫Balb/c小鼠,第3次免疫时皮下种植sp2/0-PCDNA3.0-G250细胞,观察肿瘤大小及小鼠生存期.[结果]DNA免疫后可检测到特异性抗体,抗体滴度随免疫次数增加逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01).体外CTL杀伤率与对照组差别有统计学意义.体内实验发现治疗组与对照组抑瘤效应无明显差异(P＞0.05).[结论]G250重组质粒DNA免疫能在小鼠中诱导产生特异性细胞免疫及体液免疫,无明显体内抑瘤效应.
关键词： 肾肿瘤 癌 肾细胞癌 G250/MN/CAIX抗原 DNA免疫
