首页 > 文献资料
-
原位杂交和免疫组化研究人类胰腺癌的Ki-67基因表达
目的应用地高辛标记的Ki-67 cRNA(against exon 13 of the gene)进行mRNA原位杂交和免疫组化分析胰腺癌中Ki-67基因的mRNA转录和蛋白翻译,研究Ki-67基因结构和功能表达的关系.方法 40例胰腺癌(20例高分化腺癌,20例低分化腺癌),9例非胰腺肿瘤(5例正常胰腺,4例慢性胰腺炎),Ki-67基因第13外显子cDNA片段(435 bp)由PCR扩增,然后PCR产物克隆到质粒(3.9kb PCRTMⅡ vector)进行扩增,以此模板合成地高辛标记的cDNA探针,应用mRNA原位杂交结合免疫组化研究Ki-67基因在胰腺癌的转录和蛋白翻译.结果应用地高辛标记的Ki-67 mRNA原位杂交和MIB-1免疫组化成功地检测胰腺癌巢中明显高于正常的Ki-67 mRNA转录和蛋白翻译,胰腺癌Ki-67表达明显高于非胰腺癌,并与胰腺癌组织学分级密切相关.结论本研究首次证明:人类胰腺癌存在Ki-67基因的过度转录和翻译;且此基因的表达强度与胰腺癌的组织学分级亦密切相关,此基因的exon 13的转录在终Ki-67蛋白的过度表达中起极重要的作用.
-
人类细胞和组织Ki-67基因exon 13的转录和表达
目的研究Ki-67基因在人类正常和异常细胞的mRNA 转录和翻译，了解其在肿瘤细胞增殖中的作用。方法以PCR扩增Ki-67基因的exon 13、codon 2的cDNA片断 (435?bp)，地高辛标计转录合成mRNA探针，原位杂交结合MIB-1免疫组化分析Ki-67基因的第13外显子（exon 13)在Hela细胞、结肠癌细胞、扁桃体和胰腺癌石蜡切片中的转录及翻译。结果应用地高辛标记的mRNA原位杂交技术可成功地在Hela 细胞、结肠癌细胞、扁桃体和胰腺癌的石腊切片检测到Ki-67 mRNA信号，结肠癌和胰腺癌细胞均存在Ki-67基因的exon 13 mRNA的过度转录，并且exon 13的转录与MIB-1所测Ki-67蛋白相一致。结论本研究首次在人类组织和细胞中，应用原位杂交和免疫组化研究Ki-67基因外旋子13的转录和翻译，研究发现结肠癌和胰腺癌Ki-67基因的exon 13的过度转录，并与其蛋白水平高度相关，提示该此基因表达异常，尤其是exon 13,在恶性肿瘤的发生和发展可能起一定作用。
-
反义Ki-67肽核酸对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的治疗作用
目的:探讨Ki-67基因反义肽核酸(AS-PNAs)在体内对小鼠人肾癌移植瘤Ki-67表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤裸鼠模型,瘤体内注射反义肽核酸(AS-PNAs),定期测量肿瘤体积,处死小鼠后采用免疫组化、Western blot检测肿瘤Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡,并与反义寡核苷酸(AS-ODN)处理组对照.结果:AS-PNAs处理组肿瘤生长受押(513.2±64.2)mm3,Ki-67表达下降(23.0±2.4)%、(59.7±2.3)%,细胞凋亡增加(31.1±2.0)%,与AS-ODN处理组(868.9±128.2)mm3、(33.6±2.6)%、(85.7±4.4)%、(18.3±2.3)%比较差异有显著性(P＜0.01).结论:反义Ki-67肽核酸能抑制小鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,且优于反义寡核苷酸.
-
基因放射性核素反义治疗肾癌的体内外实验
目的:探讨Ki-67基因放射性核素反义治疗对人肾癌细胞生长及凋亡的影响.方法:125I标记的反义核酸(125I-ASODNs)处理人肾癌786-0细胞及荷瘤小鼠,采用免疫组化、Western blot检测Ki-67表达;TUNEL法检测细胞凋亡.结果:肾癌细胞Ki-67抗原表达降低、Ki-67蛋白降低、凋亡细胞阳性率升高、小鼠肿瘤体积减小.结论:Ki-67基因放射性核素反义治疗能抑制肾癌细胞Ki-67基因表达及细胞增殖、促进凋亡.
-
Bcl-2、ki-67、Bax、VEGF在翼状胬肉中的表达
[目的]研究翼状胬肉中ki-67、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x (Bcl-associated x pmtein,Bax)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fact,VEGF)的表达特点.[方法]选择2010年6月至2012年1月我院眼科送检的20例眼结膜翼状胬肉标本,设为观察组;同时选择正常健康眼结膜标本20例设为对照组,应用免疫组化检测,比较两组眼结膜标本中Bcl-2、ki-67、Bax、VEGF表达特点.[结果]观察组阳性表达率Bcl-2 100.0％、ki-67 70.0％、VEGF 95.0％、Bax 85.0％,均明显高于对照组(65.0％、25.0％、70.0％、55.0％)(P＜0.05).[结论]在眼结膜翼状胬肉组织中Bcl-2、ki-67、Bax、VEGF的表达与正常眼结膜组织比较明显失衡.
-
凋亡基因Survivin在子宫内膜癌中的表达及与Ki-67、P53基因表达相关性研究
目的 探讨凋亡抑制基因Survivin在子宫内膜癌中的表达及其与P53,Ki-67基因表达的相关性.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)检测Survivin、P53、Ki-67基因在10例正常子宫内膜组织,及60例子宫内膜癌组织中的表达.结果 Survivin基因在正常子宫内膜组织分泌期中见微弱表达,60例子宫内膜癌组织中,42例表达阳性,占70%.病理分级G1～G2级的子宫内膜癌的Survivin基因表达阳性率为58.1%(18/31),G3级为82.75%(24/29),两者比较,差异有显著性(P＜0.05).临床分期Ⅰ期的子宫内膜癌的Survivin基因表达阳性率为3例中有1例,Ⅱ期者8例中有4例,Ⅲ期者为75.51%(37/49),3者比较,差异有显著性(P＜0.05).子宫肌层浸润深度＜1/2的Survivin基因表达阳性率65.1%(28/43),＞1/2的Survivin阳性率为76.5%(13/17),两者比较,差异有显著性(P＜0.05).子宫内膜癌中P53蛋白表达阳性、阴性中,Survivin基因表达阳性率分别为77.3%(34/44)、16例中有8例,两者比较,差异有显著性(P＜0.05).Ki-67蛋白表达阳性、阴性者中,Survivin基因表达阳性率分别为80.4%(37/46)、14例中有5例,两者比较,差异有显著性(P＜0.005).Survivin基因表达阳性率与子宫内膜癌组织中P53、Ki-67蛋白表达密切相关.结论 Survivin基因可以作为评价子宫内膜癌的一项诊断指标,它的过度表达提示子宫内膜癌预后不良.Survivin基因过度表达抑制了细胞凋亡,促进细胞增殖,使Ki-67基因过度表达,而Ki-67又可作为子宫内膜癌5年生存率的一项评价指标.凋亡抑制基因Survivin的表达在子宫内膜癌中与P53、Ki-67蛋白的表达存在相关性.
关键词： Survivin基因 Ki-67基因 p53基因 子宫内膜癌 免疫组织化学 -
反义寡核苷酸抑制人肾癌细胞系生长及Ki-67表达
目的探讨Ki-67基因翻译起始区反义寡核苷酸对人肾癌细胞生长及其对Ki-67基因表达的影响.方法人工合成反义寡核苷酸,脂质体转染肾癌786-0细胞系,采用免疫组化法、3H-TdR掺入试验和原位末端标记(TUNEL)法检测786-0肾癌细胞Ki-67抗原的表达、细胞增殖和凋亡情况.结果在反义寡核苷酸浓度大于10 μmol/L时,TUNEL法显示细胞凋亡增加,3H-TdB掺入试验表明掺入率下降,免疫组化实验发现Ki-67抗原表达下降.结论Ki-67基因翻译起始区反义寡核苷酸能阻遏人肾癌786-0细胞系Ki-67抗原的表达,抑制肿瘤细胞增殖和生长,加快其凋亡,并且有明显的剂量依赖性.
关键词： Ki-67基因 反义寡核苷酸 肾癌786-0细胞系 细胞增殖 -
125I偶联反义寡核苷酸抑制人肾癌细胞系生长及Ki-67基因表达
目的探讨Ki-67基因翻译起始区反义寡核苷酸偶联125I对人肾癌细胞Ki-67基因表达和细胞生长的影响.方法人工合成反义寡核苷酸,氯胺-T法偶联125I,脂质体包装后转染肾癌786-0系细胞,采用免疫组化法、MTT法和原位末端标记法(TUNEL)研究肾癌细胞Ki-67抗原的表达、细胞增殖抑制和凋亡情况.结果经免疫组化检测发现Ki-67抗原表达下降至(19.3±1.0)%,MTT法表明细胞抑制率达(33.3±3.5)%,TUNEL法显示细胞凋亡达(29.1±0.6)%.结论125I偶联反义寡核苷酸能阻止人肾癌Ki-67基因的表达,抑制细胞生长,并诱导细胞凋亡.
关键词： Ki-67基因 反义寡核苷酸 放射性核素 肾癌786-0细胞系 -
抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达的影响及相互关系
目的 研究抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达的影响及相互关系。方法 取病理诊断为乳腺癌的手术切除标本，体外分离细胞作培养，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析多柔比星(ADM)、丝裂霉素(MMC)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)5种化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率，通过免疫细胞化学染色法和图像定量法分析乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67的表达改变。结果 乳腺癌细胞在0.1 XPPC药物浓度体外处理24h后出现形态改变，化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率依次为VCR＞5-FU＞ADM＞MMC＞DDP，各用药组乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达均有不同程度改变，与未用药组比较P＜0.001，等级相关分析P＜0.01和P＜0．05。结论 化疗药物主要通过诱导乳腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖等作用，而选择性地抑制和调控过度激活表达的癌基因。
-
C-erbB-2及突变型P53基因均为阴性乳腺癌Ki-67表达状况分析
目的 探讨C-erbB-2、突变型P53基因表达均为阴性乳腺浸润性癌Ki-67表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR、月经状态的关系.方法 选取2002年1月至2011年12月行行根治术的乳腺浸润性癌病例,其中C-erbB-2、突变型P53基因均为阴性乳腺癌共61例,回顾性分析了Ki-67表达状况,以及Ki-67的表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR、月经状态的关系.结果 Ki-67阳性表达率为45.90％,Ki-67的表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR无显著相关(P＞0.05),与月经状态相关(P＜0.05).结论 C-erbB-2、突变型P53基因表达均为阴性乳腺浸润性癌Ki-67可作为绝经前乳腺癌判断预后的指标.
-
C/EBPα基因对维吾尔族宫颈鳞癌组织细胞增殖的影响
目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)在宫颈癌组织中的表达水平及其对子宫颈鳞癌组织细胞增殖的影响.方法 7例宫颈鳞癌患者的新鲜标本(宫颈鳞癌1组)与5例正常妇女的新鲜标本(对照组),采用RT-PCR检测C/EBPα mRNA与Ki-67 mRNA表达情况；35例宫颈鳞癌患者的石蜡标本(宫颈鳞癌2组)与35例慢性宫颈炎患者石蜡标本(宫颈炎组),采用免疫组织化学方法检测C/EBPα与Ki-67蛋白表达情况.结果 对照组C/EBPα mRNA表达水平高于宫颈鳞癌1组；Ki-67 mRNA低于宫颈鳞癌1组；宫颈炎组C/EBPα蛋白表达水平高于宫颈鳞癌2组(P＜0.01),Ki-67蛋白表达水平低于宫颈鳞癌2组(P＜0.05)；宫颈鳞癌2组C/EBPα蛋白与Ki-67蛋白表达呈负相关(r=-0.259,P＜0.05).结论 宫颈鳞癌组织中C/EBPα基因mRNA和蛋白表达均降低；C/EBPα基因对子宫颈鳞癌组织细胞的增殖起抑制作用.
-
天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖机制研究
目的:探讨天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖的作用,并对其增殖抑制作用机制进行初步探讨.方法:采用不同质量浓度的天马颗粒剂(10 -1g·mL-1、10 -2g·mL-1、10 -3g·mL-1及10 -4g·mL-1) 处理人结肠癌细胞株SW480,同时设立空白对照组(RPMI 1640培养液处理)及阳性对照组 (以5-氟尿嘧啶处理).观察SW480细胞的形态学动态变化,以MTT法检测各组SW480细胞的增殖情况,另以速率法检测各组SW480细胞中碱性磷酸酶(alkaline phos-phatase,AKP)比活性的变化情况.建立人结肠癌细胞株SW480免疫抑制小鼠肾包膜下移植瘤模型,同时设立天马颗粒剂组(天马颗粒剂灌胃),空白对照组(生理盐水灌胃)及阳性对照组(5-氟尿嘧啶腹腔注射),8 d后采集肿瘤组织,以免疫组织化学法及图像分析技术定量检测各组移植瘤SW480细胞中Ki-67及PCNA基因的表达情况.结果:随着天马颗粒剂质量浓度的增加,SW480细胞逐渐稀疏,散在生长,细胞变大,透明度差,颗粒增多;当天马颗粒剂质量浓度为10 -4 g·mL- 1时,SW480细胞颜色加深,且部分细胞从瓶壁脱落,甚至部分细胞可见坏死崩解的碎片;实验组10 -1g·mL-1、10 -2g·mL-1、10 -3g·mL-1及10 - 4g·mL-1的天马颗粒剂均可显著抑制SW480细胞增殖,且随天马颗粒剂作用时间延长及质量浓度增大,SW480活细胞计数逐渐降低(P＜0.05);随着质量浓度的增加OD值逐渐降低,增殖抑制率逐渐升高(P＜0.05); 10 -1g·mL-1、10 -2g·mL-1、10 -3g·mL-1及10 -4g·mL-1的天马颗粒剂均会使SW480细胞的 AKP比活性升高,且以10 -2g·mL-1时的AKP比活性高,且显著高于其他各组(P＜0.05或P＜0.01).阳性对照组AKP比活性与空白对照组比较,差异无统计 学意义(P＞0.05); Ki-67及PCNA基因主要表达于SW480细胞的细胞核,天马颗粒剂组及阳性对照组Ki-67及PCNA基因阳性着色较空白对照组明显减少,其表达的 面积均值及积分光密度均显著降低(P＜0.01).结论:天马颗粒剂可显著抑制人结肠癌细胞株 SW480 增殖,原因可能与其诱导 SW480 细胞成熟分化或抑制 SW480细胞Ki-67及PCNA基因表达相关.
-
Ki-67启动子的克隆及其转录活性
目的 克隆肿瘤特异Ki-67启动子,观察其在人肿瘤细胞中的转录活性.方法 提取肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)获取1.6 kb的Ki-67启动子DNA片段.克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67.将pGLB-Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性.结果 电泳与测序结果 显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致,pGLB-Ki-67质粒构建成功.其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A549 4种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在Huvec细胞内仅为0.5%.结论 克隆出I(5-67基因启动子(-820～+771),并证明其具有良好转录活性.
-
DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响
目的 观察DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响.方法 使用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,使用甲基化酶(M.SssI、M.HpaII、M.HhaI)诱导Ki-67启动子DNA片段发生不同程度的甲基化,将甲基化的启动子片段插入pGL3-Basic载体得到甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒,并以非甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒作为对照,分别转染正常细胞(HL-7702、HUVEC)和肿瘤细胞(A549、EJ、Kert-3、Hela和SGC-7901),使用双荧光素酶报告基因检测系统测定甲基化的Ki-67启动子在这些细胞中的转录活性.结果 甲基化Ki-67启动子的转录活性均有不同程度的下降,其下降幅度依次为M.SssI处理组＞M.HhaI处理组＞M.HpsII处理组,其中M.SssI处理组启动子的转录活性几乎完全消失.结论 Ki-67启动子的甲基化抑制了其转录活性,抑制程度与DNA甲基化程度和甲基化位置有关.
-
Ki-67核心启动子在胃癌SCG-991细胞中的转录活性
目的 观察Ki-67核心启动子在人胃癌细胞中的转录活性.方法 使用缺失分析法分别从5'端和3'端对Ki-67基因启动子逐段缺失,得到不同长度的8个和3个截短DNA片段.分别插入pGL3-Basic载体后转染人胃癌SCG-991细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定转录活性,确定Ki-67基因核心启动子.比较Ki-67核心启动子与另2种肿瘤启动子hTERT和Survivin的转录活性.结果 自5'端缺失得到的-223～+771截短片段在SCG-991细胞内转录活性达到病毒SV40启动子活性的56.5%;自3'端缺失的-223～+30截短片段转录活性更强,为-223～+771片段活性的2.1倍,是hTERT启动子的1.7及Survivin启动子和15.3倍.结论 Ki-67核心启动子区域为-223～+30,在胃癌SCG-991细胞中的转录活性超过SV40启动子,以及hTERT启动子及Survivin启动子.
-
脑膜瘤bcl-2,baX,Ki-67的表达及意义
采用免疫组化方法检测67例脑膜瘤组织中bcl-2,bax,Ki-67的表达,探讨其表达与脑膜瘤组织学分级、复发及预后的关系.结果发现:良性复发组bcl-2表达显著高于良性无复发组、不典型组、恶性组(P＜0.01);恶性脑膜瘤bax的表达高于良性无复发组(P＜0.05);Ki-67表达在良性有无复发组间未见显著差异(P＞0.05),不典型组与良性组间差异有显著性(P＜0.05),恶性组与良性组差异有极显著性(P＜0.01).提示:过表达bcl-2的脑膜瘤患者预后差、有潜在复发的可能;bax在诱发恶性脑膜瘤细胞的凋亡及加速其坏死等方面具有重要作用;Ki-67标记指数(Ki-67LI)不仅可作为评价脑膜瘤组织学分级的客观量化指标,也可作为评估其术后复发及恶变指标之一.
-
Ki-67基因在非小细胞肺癌中的表达及意义
为了探讨Ki-67基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义,采用兔疫组化二步法检测40例NSCLC、9例淋巴结转移癌、11例正常肺组织中Ki-67基因的表达.结果显示,Ki-67基因表达异常与NSCLC的发生有关,可反映肺癌的演进状态,在肺癌的进展中具有重要意义.
-
反义肽核酸抑制人肾癌细胞系Ki-67基因的研究
目的 探讨Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸对人肾癌细胞Ki-67基因表达及生长的影响.方法 人工合成反义肽核酸,脂质体转染肾癌细胞系786-0,采用免疫印迹法(Western blot)、3H-TdR掺入试验和原位末端标记(TUNEL)法检测肾癌细胞Ki-67抗原的表达、细胞增殖和凋亡情况.结果 在反义肽核酸浓度大于1.0 μmol/L情况下,western blot 实验发现Ki-67抗原表达下降,3H-TdR掺入试验表明掺入率减低,TUNEL法显示细胞凋亡增加.结论 Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸能阻遏人肾癌786-0细胞系Ki-67抗原的表达,抑制肿瘤细胞增殖和生长,加快其凋亡,并且有明显的剂量依赖性.
关键词： Ki-67基因 反义肽核酸 肾癌786-0细胞系 细胞增殖 -
神经胶质瘤Ki-67、PTEN和survivin表达的临床研究
目的 研究神经胶质瘤组织中Ki-67基因、PTEN和survivin表达及其临床意义.方法 收集神经胶质瘤组织和神经胶质瘤旁正常脑组织,采用免疫组化检测Ki-67,PTEN和survivin的表达,并分析它们的表达与患者性别、临床分级、肿瘤部位和Kernohan分类之间的关系.结果 在正常脑组织中,Ki-67和survivin表达均为阴性,PTEN表达均为阳性.在神经胶质瘤中,PTEN表达明显降低(P<0.05),Ki-67(P<0.01)和survivin (P<0.01)表达明显增高.神经胶质瘤中,Ki-67,PTEN和survivin阳性表达在性别、临床分级、肿瘤部位和Kernohan分类间均无统计学差异(P>0.05),但Ki-67阳性表达与survivin (r= -0.398,P＜0.05)和PTEN阳性表达(r= -0.388,P＜0.05)呈负相关.结论 在神经胶质瘤组织中PTEN的阳性表达率显著降低,而Ki-67和survivin阳性表达率显著高于正常脑组织,提示测定Ki-67,PTEN和survivin表达情况对研究神经胶质瘤的发生发展有一定参考价值.
