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高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠骨骼肌组织内微量三甲基组氨酸
目的:建立快速检测肌肉组织内微量三甲基组氨酸(3-MH)含量的方法.方法:利用荧光胺与3-MH在酸性和高温条件下发生柱前衍生反应,在ZORBAX SB-C18(4.6×150mmol/L,5μm)柱上,用10mmol/L磷酸钠缓冲液(含30%乙腈,pH7.50)作流动相,以1.0ml/min的流速进行等度洗脱后,荧光(激发波长365nm/发射波长460nm)检测3-MH含量.结果:应用此方法检测骨骼肌组织内的氨基酸,仅见到3-MH和组氨酸的色谱峰,色谱保留时间分别约为(4.45±0.02)min和(6.92±0.05)min,分离度＞16;线性检测范围是0.005～10.0nmol/ml(r=0.9999,P=0.00);衍生回收率为92.6%～96.8%;3-MH荧光衍生后15d分析与衍生后立即检测相比结果无显著差异(P=0.9095,n=24).结论:本方法测定骨骼肌组织内3-MH,衍生步骤简单,重复性好,检测灵敏度高,适合快速、准确地大批量检测肌组织内的微量3-MH,为开展骨骼肌肌纤维蛋白分解代谢研究提供了可行的方法.
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蛋白酶体-C2亚基基因在烫伤脓毒症大鼠心肌内的表达及意义
目的探讨烧伤脓毒症时动物心肌内蛋白酶体核心亚基-C2亚基mRNA表达及蛋白降解的变化及意义.方法雄性Wistar大鼠45只,随机分为烫伤组、脓毒症组及对照组.烫伤组大鼠使用沸水致背部30%总体表面积Ⅲ度烫伤;脓毒症组大鼠用同样方法烫伤后,立即腹腔注射内毒素(6 mg/kg)制成烫伤脓毒症大鼠模型.通过高效液相荧光法检测心肌内三甲基组氨酸(3MH)的含量,用核糖核酸印迹杂交(Northern杂交)检测心肌内蛋白酶体-C2亚基mRNA表达的变化.结果脓毒症大鼠烫伤后2 h和6 h,单位心肌内3MH含量较对照组和烫伤组均显著升高(P均<0.01);烫伤组大鼠伤后2 h与对照组比较差异无显著性(P>0.05),而伤后6 h较对照组显著升高(P<0.01).脓毒症大鼠伤后2 h和6 h心肌内蛋白酶体-C2亚基mRNA表达较对照组和烫伤组均显著升高(P均<0.01),烫伤组大鼠伤后2 h和6 h较对照组也均显著升高(P均<0.01).结论严重烫伤特别是合并内毒素攻击后,早期动物心肌细胞内泛素蛋白酶体途径活性呈持续增强现象,蛋白降解率显著增加.这可能是烧伤脓毒症时心功能异常的蛋白代谢机制.
