内源性一氧化氮介导脂质胞壁酸预适应对人冠脉内皮细胞再复氧损伤的作用

内源性一氧化氮介导脂质胞壁酸预适应对人冠脉内皮细胞再复氧损伤的作用

目的探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对内皮细胞再复氧(H/R)损伤的作用,以及内源性一氧化氮(NO)参与保护机制作用.方法采用培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAEs)在缺氧条件下培养2h,然后在常氧条件下复氧培养4h,模拟缺血/再灌注损伤的模型.HCAEs在缺氧前24h预先在含LTA(30或300μg·L-1)的培养中培养4h.用台盼蓝排斥法和培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量来评价内皮细胞损伤程度,比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量.并用RT-PCR检测LTA预适应后(2-24)h HCAECs eNOS mRNA的表达.结果LTA预适应能显著减少台盼蓝排斥实验中的细胞死亡百分比,降低复氧末细胞培养液中LDH的含量.LTA预适应亦能显著增加HCAECs复氧末培养液中NO含量.LTA预适应的效应可被非选择性NOS抑制剂--L-单甲基精氨酸(L-NMMA,100μmol·L-1)所取消.在LTA预适应后2和4 h,HCAECs的eNOS mRNA表达明显增加.结论LTA诱导的延迟预适应能显著减少HCAECs再复氧所致的细胞损伤和功能紊乱,eNOS产生的NO启动并介导了LTA保护内皮细胞的作用.

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的作用

目的探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损(I/R)后神经细胞凋亡的作用.方法采用改良Longa法制作大鼠右大脑中动脉(MCA)闭塞2 h造成局灶性脑缺血模型,恢复血液灌流12 h.大鼠在脑缺血前24 h腹腔注射LTA(1 mg/kg)诱导延迟预适应,检测脑组织再灌注12 h后大鼠神经症状、组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,以及组织中一氧化氮(NO)的含量,同时用TUNEL染色法检测神经细胞的凋亡,用免疫组织化学的方法检测神经组织Bcl-2蛋白的表达.结果 LTA诱导的延迟预适应能明显改善脑I/R后的神经功能,减少神经缺欠评分值(P<0.01),脑I/R后组织中MDA的含量明显减少(P<0.01), SOD活性显著提高(P<0.01),同时LTA预适应能明显降低I/R导致脑组织中NO含量的升高(P<0.01).LTA预适应还显著减少神经细胞的凋亡百分率(P<0.01),明显增加脑组织中Bcl-2蛋白的表达(P<0.01).结论 LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤,减少组织坏死和细胞凋亡.其作用机制与减少脑I/R后自由基和NO毒性作用,增加Bcl-2蛋白的表达有关.

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨LTA诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损(I/R)损伤的作用.方法采用改良Longa法制作大鼠右大脑中动脉(MCA)闭塞2 h造成局灶性脑缺血模型,恢复血液灌流24h.大鼠在施行脑缺血前24 h腹腔注射脂质胞壁酸(LTA,1 mg/kg)诱导延迟预适应,检测脑组织再灌注24 h后组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量以及大鼠神经症状,并用透射电镜观测大鼠大脑皮层神经细胞的超微结构改变.结果LTA预适应能明显减少脑I/R后组织中MDA的含量(P＜0.01),提高SOD的水平(P＜0.01),减轻神经细胞的超微结构损伤和保护细胞膜结构完整性,LTA预适应还能明显改善脑I/R后的神经功能,减少神经缺欠评分值(P＜0.01).LTA预适应亦能明显降低I/R导致脑组织中NO含量的升高(P＜0.01).结论LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤,减少脑组织坏死,其作用机制与减少脑I/R后自由基和NO毒性作用有关.

脂质胞壁酸诱导的预适应对自发性高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对自发性高血压大鼠(SHR)心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及诱导型一氧化氮合酶(iNOs)是否参与其作用.方法:采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注复制大鼠心肌I/R模型,结扎前24 h注射LTA,检测心肌再灌注60 min后血清心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH),并用dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,用Western Blot方法检测凋亡蛋白Bel-2和Bax的蛋白表达.同时采用实时RT-PCR技术和Western Blot方法分别检测心肌再灌注末iNOSmRNA和蛋白的表达.结果:与I/R组比较,LTA预适应组能显著减少室性心律失常(VA)评分值(P＜0.01);LTA预适应还能明显减少I/R后血清CK-MB和LDH的漏出(P＜0.01,P＜0.05),减少心肌细胞凋亡(P＜0.01),凋亡相关蛋白Bel-2表达明显上调(P＜0.01),而Bax蛋白表达则下调(P＜0.01).再灌注末,预适应组iNOs mRNA的平均相对表达量较I/R组增加了0.71倍(P＜0.01),LTA预适应组iNOS蛋白的表达量较I/R组增加了0.96倍(P＜0.05).不论在LTA预适应前或缺血前期给予iNOS抑制剂氨基胍或是单独给予氨基胍,上述观测指标均与I/R组比较差异无统计学意义.结论:LTA预适应能显著减轻SHR I/R导致肥厚心肌的坏死和细胞凋亡,iNOS/NO作为触发和效应环节在介导LTA预适应中发挥关键作用.

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤的作用.方法采用局灶性脑缺血2 h,再灌注12 h或24 h的方法,预适应组大鼠缺血前24 h腹腔注射LTA 1 mg/kg),检测脑组织再灌注24 h后组织含水量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),再灌注12 h后大鼠神经症状、组织中一氧化氮(NO)的含量,同时用TUNEL染色法检测神经细胞的凋亡.结果 I/R组脑组织中SOD和MDA的含量分别为(2.72±0.38) kU/g蛋白和(1.83±0.33) μmol/g蛋白,LTA预适应组SOD活性和MDA的含量分别为(3.68±0.40) kU/g.蛋白和(1.27±0.21) μmol/g蛋白,与I/R组比较差异有统计学意义(P均<0.01);I/R组NO含量和凋亡百分率为(34.4±6.3)%、(0.852±0.090) μmol/g蛋白,而LTA预适应组神经细胞的凋亡百分率和脑组织中NO含量为(7.2±3.2)%、(0.594±0.078) μmol/g.蛋白均较I/R有显著降低(P均<0.01).结论 LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤,减少组织坏死和细胞凋亡.其作用机制与减少脑I/R后自由基和NO毒性作用有关.

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠离体心脏缺血/再灌注后心功能的作用

目的探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对大鼠离体心脏缺血/再灌注(I/R)后心功能的作用.方法采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,腹腔注射LTA(1mg/kg)后24h,观察其对离体心脏停搏4h后和心脏停灌30min后再灌注30min及60min时左室发展压(LVDP)、左室压大上升速率(+dp/dtmax)、左室压大下降速率(-dp/dtmax)及冠脉流量(CF)的影响.结果LTA预适应能显著改善再灌注后心功能,而同时给予LTA和非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-NG-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)能取消预适应对心功能的改善效应.结论LTA预适应能显著改善心脏I/R所致的心功能障碍,而内源性NO在介导LTA预适应中发挥必不可少的作用.