首页 > 文献资料
-
组蛋白甲基转移酶SMYD3在不同HBV表达水平肝癌细胞中的差异表达
目的:探讨HBV组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝癌细胞中的表达与HBV感染状态相关性.方法:选取HBV阴性和HBV阳性的肝癌细胞株HepG2、HepG2.2.15,利用实时逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)方法检测 SMYD3mRNA表达水平,Western blot检测细胞中SMYD3蛋白表达差异.结果:SMYD3 mRNA及蛋白在HepG2.2.15的表达水平显著高于HepG2(0.92±0.12 vs 0.18±0.05,0.28±0.03 VS 0.54±0.05,均P<0.01),有统计学差异.结论:HBV可能通过上调SMYD3途径促进肝癌的恶性生物学行为.
关键词： SMYD3 表观遗传学 肝肿瘤 乙肝病毒 实时逆转录聚合酶链反应 -
青年乳腺癌中同源异型盒基因A5表达的研究
目的:探讨青年乳腺癌组织中同源异型盒基因(HOX)A5mRNA及其蛋白表达,研究乳腺癌肿瘤组织临床病理参数与其关联性.方法:运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)技术检测120例青年乳腺癌(其中96例浸润性导管癌,原位癌16例、腺癌4例、硬癌4例)和96例青年乳腺良性病变中HOXA5mRNA表达,分析HOXA5基因表达强度与乳腺癌肿瘤原发灶组织临床病理参数间的相关性.结果:HOXA5 mRNA在乳腺癌肿瘤组织中相对表达量0.82 ～ 189.06,平均为20.69±29.15,乳腺良性病变中相对表达量5.84～80.72,平均为31.05±17.06;乳腺癌HOXA5mRNA表达显著低于乳腺良性病变(P＜0.01).乳腺癌伴腋窝淋巴结转移阳性患者HOXA5mRNA表达强度较淋巴结未转移者显著降低(P＜0.01).HOXA5mRNA表达与乳腺癌肿瘤原发灶大小、临床分期、组织学分型未见相关性(均P＞0.05).结论:青年乳腺癌肿瘤原发灶组织细胞中HOXA5mRNA表达强度较乳腺良性病变组织显著下降.HOXA5mRNA表达明显降低与乳腺癌腋窝淋巴结癌转移关联性较大.
关键词： 乳腺癌 免疫组化 实时逆转录聚合酶链反应 同源异型盒基因A5 -
实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达
目的建立实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的mRNA相对表达量.方法一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19和GAPDH扩增的标准曲线.实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量.结果在NAMALWA(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19 mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达.结论本研究中所建立的实时定量RT-PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19 mRNA表达水平进行定量,且适用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究.
关键词： 实时逆转录聚合酶链反应 PAX5 血液肿瘤细胞株 -
实时RT-PCR检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达
目的建立实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的定量方法,并分别从RNA水平与蛋白质水平检测二氢嘧啶脱氢酶在人体部分组织中的表达.方法采用基于TaqMan探针技术的实时RT-PCR方法检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其蛋白质表达水平.结果实时RT-PCR检测二氢嘧啶脱氢酶的线性范围可达102～109拷贝数/μl,批内误差＜5%.结论这一实时RT-PCR的方法可以从纳克级的总RNA中检出二氢嘧啶脱氢酶的表达,并且ELISA结果与实时RT-PCR 结果有较好的相关性.
关键词： 二氢嘧啶脱氢酶 实时逆转录聚合酶链反应 TaqMan -
实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞t-PA mRNA方法的建立
目的建立实时RT-PCR检测人微血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物(t-PA) mRNA的表达.方法提取人微血管内皮细胞总RNA,经RT-PCR获得靶基因(t-PA)及管家基因(β-actin)的PCR产物.纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线.方法学考核参数为特异性、线性范围、精密度和重复性.分析全反式维甲酸对内皮细胞表达t-PA mRNA的干预效果.结果定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为103～ 1010拷贝,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2》0.990),批内变异≤3.10%,批间变异≤4.93%.1.25～20.00 μmol·L-1的全反式维甲酸能明显上调内皮细胞t-PA mRNA的表达(P《0.01),且呈剂量依赖性.结论实时荧光定量RT-PCR的方法可对t-PA mRNA的表达进行准确定量,有助于溶栓药物药理学研究和新药筛选.
-
荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用
目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本.方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系.与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价.并将该体系用于临床腹泻样本.结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,低可检出1TCID50/ml.对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P＞0.5),可同样用于临床样本检测.结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测.
关键词： 实时逆转录聚合酶链反应 轮状病毒属 聚合酶链反应 -
石蜡包埋乳腺癌组织的RNA提取及基因表达研究
目的 探索从石蜡包埋乳腺癌样本中提取总RNA的质量和产量,并检测其基因的表达情况.方法 收集保存时间1～17 a不等的人乳腺癌石蜡组织样本153例,取5 μm厚切片1～15张,用Roche和Ambion两种试剂盒提取总RNA.采用随机引物将mRNA反转录为cDNA,SYBR Green Ⅰ染料法实时荧光定量PCR分析ACTB、GAPDH、RPLPO和GUSB管家基因mRNA的表达情况.结果 153例标本总RNA浓度在3～375 ng/μl范围,总产量0.18～18.5 μg,A260/280值在1.32～2.07范围,RNA琼脂糖凝胶电泳片段弥散在100～1 000 bp之间.81例样本的4个管家基因的平均Ct值在24～30范围,随着样本保存时间的延长,Ct值也逐渐增加.结论 从石蜡包埋样品标本中提取的RNA产量及质量可满足实验的要求,总RNA有所降解,但可以进行目的 基因mRNA的检测, 保存10 a以上的样本也能够进行基因表达研究,在基础研究和临床实践方面具有广阔的应用价值.
关键词： 石蜡包埋组织 RNA提取 实时逆转录聚合酶链反应 基因表达 -
术中实时 RT-PCR检测胃癌患者腹腔冲洗液癌胚抗原 mRNA的初步研究
目的探讨术中实时逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)定量检测胃癌腹腔冲洗液癌胚抗原信使核糖核酸( CEA mRNA)诊断腹腔游离癌细胞的可行性、可靠性及其临床意义.方法采用实时 RT-PCR技术检测 98例胃癌患者手术前后腹腔冲洗液 CEA mRNA水平,并与常规 RT-PCR、细胞学检查结果进行比较分析.结果全组腹腔冲洗液细胞学检查( PLC)阳性率为 38.8% (38/98),常规 RT-PCR CEA mRNA检测阳性率为 52.0%( 51/98),两者差异有显著性意义( P< 0.01).腹腔冲洗液 CEA mRNA浓度术前为 [172.11± 63.07(范围 0～ 5.623× 106) ]拷贝 (copies)/ml,术后为 [606.32± 76.21(范围 2.564× 102～ 4.677× 107) ]copies/ml,术后显著高于术前( P< 0.01).肿瘤侵犯浆膜,病期Ⅲ、Ⅳ期,细胞学检查及 RT-PCR CEA mRNA阳性者腹腔冲洗液 CEA mRNA水平显著升高(均 P< 0.01),而淋巴结转移与否及肿瘤细胞分化程度不同组之间的腹腔冲洗液 CEA mRNA水平比较,差异无显著性意义(均 P >0.05). PLC(- )PCR(- )组、 PLC(- )PCR(+ )组和 PLC(+ )PCR(+ )组 3组间腹腔冲洗液 CEA mRNA浓度比较,差异有显著性意义(均 P< 0.05).本研究将判断腹腔游离癌细胞的 CEA mRNA界值初步定为 21.73 copies/ml.结论实时 RT-PCR定量检测胃癌患者腹腔冲洗液 CEA mRNA,是诊断腹腔游离癌细胞快速、敏感、可行的方法,有望成为术中腹腔化疗个体化的指导依据.
关键词： 胃肿瘤 腹腔冲洗液 癌胚抗原信使核糖核酸 实时逆转录聚合酶链反应 -
胶体金法在甲型流行性感冒筛查中的应用价值
目的：探讨胶体金免疫层析法在甲型流行性感冒（流感）筛查中的应用价值。方法随机选择527例门诊就诊的流感样病例，采集咽拭子标本。采用实时逆转录聚合酶链反应和胶体金法同时检测甲型流感病毒的核酸或抗原。结果胶体金法检测甲型流感病毒的敏感度为26.67%，特异度为78.95%，阳性预测值为20.69%，阴性预测值为83.94%。两种方法的符合率为70.02%，其检测结果的一致性较差。胶体金法阳性标本的核酸检测Cp值明显低于其阴性标本的Cp值。结论采用胶体金法对大量流感样病例进行甲型流感的筛查有较高的漏诊风险。
关键词： 胶体金免疫层析法 流行性感冒 甲型流感病毒 实时逆转录聚合酶链反应
