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PI3K/Akt信号通路抑制剂对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用及其机制
目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因pAkt、Skp2 及P2 7kip1表达的变化.方法:将不同浓度的渥曼青霉素(O、10、50、100、200 nmol/L)分别作用于对数生长期的人肝癌HepG2细胞3、10、24 h,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测pAkt、Skp2及P27kip1蛋白表达变化,RT-PCR检测Skp2及P27kip1mRNA表达变化.结果:渥曼青霉素可明显抑制HepG2细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.渥曼青霉素可导致G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P＜0.05).随着渥曼青霉素浓度的增加及作用时间的延长,HepG2细胞凋亡率逐渐升高(8.46％±1.17％至28.03％±2.67％)(P＜0.05).Western blot结果显示渥曼青霉素可下调pAkt和Skp2蛋白的表达,上调P27kip1蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR结果显示渥曼青霉素可明显下调Skp2 mRNA的表达,而P27kip1mRNA表达无明显变化.结论:PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,引发G0/G1期阻滞并诱导其凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路参与Skp2及P27kip1调控有关.
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LY294002和PD98059对结直肠癌相关血管内皮细胞增殖和凋亡的作用
目的 探讨 LY294002 和 PD98059 对结直肠癌相关血管内皮细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制.方法 用结直肠癌 LOVO 细胞培养上清诱导人脐静脉内皮细胞产生肿瘤相关内皮细胞,设置 LY294002 组和PD98059组,分别用含LY294002(10 μmol/L)和PD98059(10 μmol/L)的完全培养液处理肿瘤相关血管内皮细胞;设置空白对照组和二甲基亚砜(DMSO)对照组,分别用完全培养液及含0. 10% DMSO完全培养液培养细胞;采用细胞计数法检测各组细胞增殖,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,比较不同组别细胞增殖和凋亡情况.结果 第1天至第5天,空白组细胞数目呈"S"型曲线增长;随时间的延长,LY294002及PD98059对肿瘤相关内皮细胞的增殖的抑制作用趋于明显,各组间、不同时点间、组间和时点间交互作用比较差异均有统计学意义(P＜0.01). LY294002组、PD98059组凋亡率高于空白对照组[(13.2 ±2.8)%、(15.1 ±3.4)%比(3.3 ±1.7)%](P＜0. 05),LY294002组和PD98059组内皮细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P=0. 372).结论 LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和PD98059抑制丝裂原细胞外信号调节激酶/细胞外信号调节激酶信号通路均能抑制结直肠癌相关内皮细胞的增殖和促进结直肠癌相关内皮细胞的凋亡.
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硫化氢复合浅低温可选择性激活突触内NMDARs及其下游PI3K/Akt信号通路
目的 观察硫化氢( H2S)复合浅低温对大鼠全脑缺血-再灌注后海马N-甲基D-天冬氨酸受体( NMDARs)的亚单位NR2A、NR2B、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK 3β)的影响,旨在探讨其发挥脑复苏作用的潜在机制.方法 雄性SD大鼠100只,随机均分为五组:假手术组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、浅低温组(Ⅲ组)、硫氢化钠(NaHS)组(Ⅳ组)、浅低温+ NaHS组(Ⅴ组).采用Pulsinelli-Brierley四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型,缺血15 min再灌注即刻Ⅳ组和Ⅴ组腹腔注射14 μmol/kg NaHS,Ⅲ组和Ⅴ组行体表降温至肛温32～33℃.6h后断头取海马,分别采用分光光度计法测H2S的含量,western blot法测NR2A、NR2B、p-Akt及p-GSK 3β的表达,每组分别取4只于再灌注24 h取脑行Tunel染色观察CA1区锥体细胞凋亡情况.结果 与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组海马组织H2S含量均升高(P＜0.05)；与Ⅱ组相比,Ⅳ和Ⅴ组H2S含量显著升高(P＜0.05)；与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组NR2A、NR2B的表达、凋亡指数(AI)均增高(P＜0.05),且Ⅱ和Ⅲ组NR2A/NR2B＜1,Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ组NR2A/NR2B＞1；与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组海马p-Akt及p-GSK 3β的表达均上调(P＜0.05)；与Ⅱ组相比,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组海马p-Akt及p-GSK 3β的表达均上调,AI降低(P＜0.05)；与Ⅲ和Ⅳ组相比,Ⅴ组海马p-GSK 3β的表达上调(P＜0.05).与Ⅱ组相比,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组CA1区锥体细胞凋亡程度均明显减轻,尤以Ⅴ组效果明显.结论 H2S复合浅低温可能通过选择性作用于突触内的NMDARs,进而激活其下游促存活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路,抑制锥体细胞凋亡,从而发挥脑复苏的作用.
关键词： 硫化氢 低温 N-甲基-D-天冬氨酸受体 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B 脑缺血 再灌注损伤 凋亡 -
血管生成素-2在大鼠急性胰腺炎血清中的表达及其意义
目的 对血管生成素-2(Ang-2)在急性胰腺炎(AP)中的表达及其意义.方法 健康SD大鼠40只,随机分为5组:对照组、急性胰腺炎模型组(分为AP6h组、AP 12h组、AP 24 h组、AP 48 h组),每组8只.AP组分别于建模后6、12、24、48 h处死,对照组于第2次注射后24 h处死.酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Ang-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)水平;提取胰腺组织RNA,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定Ang-2、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB、Akt) mRNA表达水平.结果 同对照组比较,AP组血清Ang-2水平表达水平明显升高,6h即差异有统计学意义,24～48 h达到高峰(P=0.032);胰腺组织Ang-2、PI3K、Akt mRNA表达水平明显升高(P =0.028),与AP发生时间呈正相关;炎性相关因子TNF-α、IL-6水平明显升高(P =0.026、0.011).6～24 h AP组血清Ang-2水平与胰腺Ang-2 mRNA水平表达呈正相关(r=0.392,P=0.034);PI3K、Akt表达水平与Ang-2 mRNA水平呈正相关(r=0.432、0.451,P=0.029),血清TNF-α、IL-6表达水平与胰腺Ang-2 mRNA水平呈正相关(r=0.412、0.389,P=0.035).结论 血清Ang-2水平在AP发生早期即出现明显升高,持续48 h以上,是协助急性胰腺炎诊断的敏感指标;Ang-2可激活PI3K/Akt信号通路,也可能是AP过程中TNF-α及IL-6水平升高的原因之一.
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响
目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.
关键词： 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B 渥曼青霉素 胃癌 S期激酶相关蛋白2
