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Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制效应及与凋亡信号转导的关系
目的:探讨Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其参与胞内细胞信号转导的机制.方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin体外转染BGC-823细胞,运用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分析法检测重组质粒对BGC-823肿瘤细胞的抑制作用;通过AO/EB染色法对pVAX1-Apoptin转染的肿瘤细胞进行形态学观察;运用流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm);通过免疫印迹检测细胞色素c(cytochrome c,Cyto c)释放;应用底物显色法检测Caspase-3/9活性.结果:pVAX1-Apoptin转染比pVAX1具有更强的抑瘤效应(10 μg质粒转染72 h后,23.37%vs99.61%,P＜0.01),并且肿瘤细胞的死亡方式以凋亡为主.实验结果显示,pVAX1-Apoptin转染导致细胞线粒体跨膜电位下降,与pVAX1转染BGC-823细胞相比有显著差异(46.7%±7.26% vs 70.66%±5.98%,P＜0.01);同时伴随细胞色素c的释放.另外,pVAX1-Apoptin和pVAX1转染细胞的Caspase-3/9活性具有显著差异(Caspase-9:0.181±0.032 vs 0.079±0.013,P＜0.01;Caspase-3:0.242±0.041 vs 0.058±0.023,P＜0.01).结论:pVAX1-Apoptin转染BGC-823肿瘤细胞导致线粒体跨膜电位下降,并刺激释放细胞色素c,从而激活Caspase-9.经细胞色素c激活的Caspase-9进而活化凋亡通路下游关键作用因子,并对BGC-823肿瘤细胞产生抑制效应.
关键词： Apoptin基因 胃癌 BGC-823细胞系 细胞凋亡 抗肿瘤效应 -
TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用
目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418(浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2 的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.
关键词： 胃癌 RNA干扰 TROP2 BGC-823细胞系 -
选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响
目的:观察塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,寻找安全有效的治疗胃癌的化疗药物.方法:常规培养胃癌细胞株BGC-823至80%融合,加入不同浓度塞来昔布继续培养,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察其对胃癌BGC-823细胞生长的影响.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况.RT-PCR技术检测p21和Fas的表达.结果:MTT比色法显示体外不同浓度塞来昔布均能抑制胃癌BGC-823细胞生长,呈浓度和时间依赖性,各浓度组间比较有显著差异(P<0.05).流式细胞仪检测发现在0～100 μmol/L内,随浓度增加G1期细胞数增加,S期细胞数减沙;RT-PCR显示塞来昔布干预后胃癌BGC-823细胞p21和Fas的表达增强且呈浓度依赖性,各浓度组间比较,差异有统计学意叉(P<0.05).结论:体外塞来昔布抑制胃癌BGC-823细胞增殖和促进其凋亡,可能与p21上调阻止细胞周期进展和促进Fas表达诱导细胞凋亡有关.
关键词： 选择性环氧化酶-2 塞来昔布 细胞增殖 细胞凋亡 BGC-823细胞系 -
康复新体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的实验研究
目的探讨康复新体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及其机制.方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间康复新对BGC-823细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术进行DNA倍体分析和TUNEL分析,检测康复新对BGC-823细胞增殖和细胞周期的影响以及早期凋亡的情况.结果不同浓度康复新对胃癌BGC-823细胞分别作用24、48、72 h其 IC50分别为(17.85±1.06)、(13.76±0.57)和(11.32±0.14)mg/mL(P《0.01),对胃癌BGC-823细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖关系;流式细胞术显示胃癌BGC-823细胞出现明显的凋亡峰,随着作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,细胞周期阻滞在G2/M期,S期细胞数大量减少;流式细胞术TUNEL检测结果显示,其作用细胞凋亡和坏死同时存在.结论康复新具有诱导胃癌 BGC-823细胞凋亡的作用.
关键词： 康复新 BGC-823细胞系 凋亡 机制
