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通用引物巢式PCR法对哈萨克族食管鳞癌HPV感染的检测
目的:应用通用引物巢式PCR技术检测新疆哈萨克族食管鳞癌人乳头瘤病毒(HPV)的感染率,并探讨HPV与新疆哈萨克族食管鳞癌的关系.方法:提取新疆哈萨克族食管鳞癌及正常食管组织的DNA,应用通用引物HPV MY09/11及H PV G5+/6+进行巢式PCR,检测新疆哈萨克族食管鳞癌中HPV的感染率.结果:巢式PCR法扩增后检测到食管鳞癌中HPV感染率为66.67％,正常对照组为12.12％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论:本实验结果表明HPV可能是新疆哈萨克族食管癌发生的一个重要病因学因素,结合通用引物巢式PCR法可以更加方便可靠的检测HPV-DNA.
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厦门市乙型肝炎患者病毒基因型的分析
目的:采用多对型特异性引物,通过巢式PCR法检测厦门市乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况.方法:收集250例HBV感染患者血清,提取血清中HBV DNA作为模板,设计HBV前S1基因和S基因中区域内设计出10条内外引物,并将其中8条型特异性内引物分成A,B两组,分别扩增A,B,C和D,E,F型HBV,然后将第2轮PCR产物以用30 g/L琼脂糖进行电泳,根据PCR产物电泳显示的产物长度判定HBV基因型,以了解厦门HBV基因型分布情况.结果:共120例确定了HBV基因型.患者群中慢性乙型肝炎90例,占75.0%,急性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原发性肝癌分别占5.8%(7/120)、6.7%(8/120)和12.5%(15/120).分型结果:B型58例(48.3%)、C型30例(25.0%),B/C混合型32例(26.7%).HBeAg阳性患者中B基因型占63.8%,B/C型混合感染21.9%;抗-HBe阳性患者中以B/C型混合感染68.8%,B型25.9%,HBeAg阳性组与抗-HBe组之间比较发现B型和B/C混合型之间(P＜0.05).结论:厦门乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,B/C混合感染是一个值得重视的问题.
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人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1的巢式PCR法克隆、测序及表达载体的构建
目的:克隆人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1 cDNA序列并构建其表达载体.方法:利用RT-nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约1 200 bp的DNA片段,与pUCm-T 载体连接,作全自动测序确证,并将其重组入pcDNA 3.1载体中,构建为表达质粒pcDNA- w P.结果:对PCR产物进行测序,序列基本正确.结论:利用RT-nested PCR法成功克隆了人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1 cDNA序列并构建了表达质粒pcDNA-wP.
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2种恙虫病东方体核酸检测方法的比较
目的 探讨巢式PCR法与实时荧光PCR法在恙虫病诊断中的作用.方法 采集2010年-2014年北京市404例恙虫病疑似患者的全血样本,分别以巢式PCR法与实时荧光PCR法检测恙虫病东方体的groEL基因与47 kD蛋白基因,以血清特异性IgM检测结果为诊断恙虫病的金标准,研究2种PCR方法的灵敏度.结果 以急性期血清IgM阳性或恢复期血清IgM转阳作为确诊标准,374例患者确诊为恙虫病.其中巢式PCR法检测groEL基因阳性者323例,灵敏度为86.36％;实时荧光PCR法检测47 kD蛋白基因阳性者328例,灵敏度为87.70％.而单份急性期血清IgM抗体检测的灵敏度为87.17％.结论 实时荧光PCR法的检测时间短,适合用于快速诊断,但对于检测阴性的样本应考虑进行血清IgM或多个基因的分子生物学检测以明确诊断.
