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应用重组抗原诊断弓形虫病的研究进展
随着分子生物学的发展,对弓形虫重组抗原的研究取得了一系列的进展,多种弓形虫抗原基因通过基因工程手段得以表达并应用于弓形虫防治研究,这些抗原包括膜表面抗原(surface antigen,SAGs)、致密颗粒蛋白(dense granule proteins, GRAs)、棒状颗粒蛋白(rhoptry proteins,ROPs)、微线体蛋白(microneme proteins,MICs)以及基质抗原等[1]。重组抗原在弓形虫病诊断方面的研究一直存在两个方面,一方面是针对每一种抗原进行单独研究以确定其免疫特性,是筛选高效诊断抗原的主要途径,同时对于弓形虫感染机制等方面的研究也有重要意义;另一方面是针对复合抗原的研究以期望克服单一抗原在免疫诊断中的不足,优化得到佳的抗原组合,达到佳的诊断结果。当前人们对于弓形虫重组抗原的研究主要集中于两个方向,一是利用抗原性进行弓形虫免疫学检测,二是利用免疫原性用作疫苗进行免疫保护,本文就弓形虫重组抗原在弓形虫免疫诊断中的新研究进展做一综述。
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弓形虫主要表面抗原的研究进展
弓形虫生活史有无性繁殖与有性生殖两个世代.存在形式有滋养体、包囊、卵囊、配子体、裂殖体,滋养体包括速殖子、缓殖子,它们在分子学上有一些共同成份:表面抗原(surface antigen,SAG),微线体蛋白(microneme protein,MIC)、棒状体蛋白(rhoptryprotein,ROP),致密颗粒抗原(densegranulesantigen,GRA)等,但两者的部分成分存在着期特异性.缓殖子除了和速殖子共享些抗原外,尚发现一些其本身特异性抗原.
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刚地弓形虫菱形体蛋白的研究进展
菱形体蛋白(rhomboid)为一类跨膜丝氨酸蛋白酶,在胞膜的脂质双分子层内发挥酶解作用.刚地弓形虫的菱形体蛋白可识别微线体蛋白的跨膜区,并对其进行蛋白水解,使微线体蛋白的N端片段释放入介质中.微线体蛋白的蛋白水解过程对于刚地弓形虫入侵宿主细胞非常重要.深入研究刚地弓形虫菱形体蛋白,将有助于理解生物体菱形体蛋白的功能及研制新的药物以防治弓形虫感染.
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弓形虫微线体蛋白的研究进展
弓形虫入侵宿主细胞是多步骤的过程.首先是虫体识别、黏附宿主细胞,然后虫体穿透入细胞完成入侵过程.当虫体与细胞接触时,微线体蛋白释放到虫体外,一部分微线体蛋白具有与真核细胞黏附分子相似的结构域--黏附区域,通过不同的黏附区域,微线体蛋白发挥其识别、黏附宿主细胞的作用;另一部分微线体蛋白不含黏附区域,但在虫体不同阶段表达量存在差异,可作为诊断抗原来鉴定急性和隐性弓形虫病.该文对已发现的微线体蛋白的基因序列、蛋白结构及特性作一综述.
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荧光蛋白报告载体观察刚地弓形虫SAGl、MIC3、ROP2鸡尾酒DNA疫苗的表达及其免疫原性的研究
目的:构建能同时表达多个基因的刚地弓形虫 DNA 鸡尾酒疫苗并初步观察其免疫原性。方法从基因组 DNA 扩增刚地弓形虫表面抗原( surface antigen , SAG )、微线体蛋白( microneme , MIC )和棒状体蛋白( rhoptry protein , ROP )基因片段,克隆到真核荧光表达载体 pShuttle-CMV-MCS-EF1α-AmCyan , pLVX-IRES-Zs-green 及pLVX-IRES-rfp 中,构建pShuttle-SAG1, pLVX-Zsgreen-MIC3和 pLVX-rfp-ROP2表达质粒。通过聚乙烯亚胺法用混合质粒转染293F 细胞48 h ,荧光显微镜下观察3个基因的表达情况。将30只 C57BL/6雄性小鼠随机分为A、 B、 C 组,分别肌内注射生理盐水(50μl)、 pShuttle+pLVX-Zsgreen+pLVX-rfp 混合空质粒(2μg/μl,各17μl)、pShuttle-SAG1+pLVX-Zsgreen-MIC3+pLVX-rfp-ROP2混合重组质粒(2μg/μl ,各17μl )。免疫28 d 后, ELISA 检测血清抗刚地弓形虫 IgG 抗体水平,初步评价该疫苗的免疫原性。结果从刚地弓形虫基因组成功扩增出1、1.1及1.7 kb 的 SAG1、 MIC3和 ROP2序列。成功构建了 pShuttle-SAG1、 pLVX-Zsgreen-MIC3和 pLVX-rfp-ROP2真核荧光表达质粒,转染293F 细胞后观察到相应的蓝、绿、红报告荧光。免疫小鼠后28 d , ELISA 测得 A、 B、 C 组IgG 抗体的吸光度(A450值)分别为(0.620±0.029)、(0.741±0.040)、(1.561±0.131), C 组显著高于 A、 B 组(P<0.01)。结论刚地弓形虫 SAG1、 MIC3和 ROP2基因混合重组质粒组成的 DNA 鸡尾酒疫苗能诱导小鼠产生良好的免疫原性,且多个荧光蛋白真核表达载体能够较好地指示目的基因的表达。
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弓形虫微线体蛋白MIC3的研究进展
弓形虫(Toxoplasma gondii)的微线体(microneme)散布于虫体前端棒状体周围,是一种具有分泌功能的细胞器,其分泌的微线体蛋白( microneme proteins MICs)与虫体对宿主细胞的识别和结合密切相关,在虫体入侵宿主细胞早期发挥重要作用[1].目前发现的微线体蛋白有15种以上,包括MIC1-MIC12、AMA1、SUB1、SUB2等[2],MIC3是其中重要的一种微线体蛋白.
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弓形虫表面抗原和致密颗粒蛋白的研究进展
弓形虫生活史包括无性增殖与有性增殖,存在形式有滋养体、包囊、卵囊、配子体、裂殖体,滋养体包括速殖子、缓殖子,它们在分子学上有一些共同成份:表面抗原(surface antigen,SAG),微线体蛋白(microneme protein,MIC)、棒状体蛋白(rhoptry protein,ROP),致密颗粒抗原(dense granules antigen,GRA)等,近年来研究的较多的是表面抗原、致密颗粒蛋白,现综述如下.
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弓形虫微线体蛋白研究进展
弓形虫( Toxoplasma gondii )属于真球虫目弓形虫科,是一种专性细胞内寄生原虫,具有广泛的宿主群,几乎可感染包括人类在内的所有哺乳动物、鸟类和爬行类动物.它是人或动物流产、死胎、弱智儿等围产期疾患的重要病因;也是导致感染者发生视网膜脉络膜炎、脑膜炎、癫痫等眼科疾患和脑神经疾病的病因;同时,弓形虫作为一种机会感染因子,是引起艾滋病患者、器官移植及恶性肿瘤患者等免疫功能严重损伤或抑制者死亡的主要病原之一.在弓形虫入侵宿主细胞的过程中,微线体蛋白发挥了极其重要的作用,本文就近年来微线体蛋白的研究进展综述如下.
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疟原虫顶部复合器及其与宿主红细胞的作用
疟疾目前仍然是世界上重要的传染病之一,疟疾疫苗一直是人们所期望的控制本病的理想途径。然而,在疟疾疫苗研究中仍未找到稳定的免疫原成份。近年研究发现顶部复合器与侵入宿主细胞有关,尤其是微线体蛋白和棒状体蛋白复合物参与识别及侵入过程。某些单克隆抗体在体外实验中可抑制裂殖子的侵入作用,有些顶部复合器相关抗原可使宿主产生保护性免疫反应。近期研究还表明这些蛋白具有种、株和期的特异性并且对发病和预后有重要影响〔1~9〕。这些研究提示:可以通过阻断疟原虫识别和入侵宿主细胞的过程而达到预防的目的。但是顶部复合器的抗原成份复杂,哪些成份参与侵入机制,哪些起关键作用,哪些能产生稳定的保护性免疫,还不十分明确。随着分子生物学和显微处理技术的发展,顶部复合器与寄生性原虫侵入宿主细胞的机制研究日益深入。