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G蛋白偶联受体34转录变异体在结肠癌中的表达及其潜在意义
目的明确G蛋白偶联受体34（G-protein coupled receptor 34，GPR34）转录变异体在结肠正常以及癌细胞和组织中的表达模式，探讨其在结肠癌中的潜在作用。方法（1）通过检索NCBI有关GPR34的基因信息和设计特异性引物，利用PCR技术确定结肠中表达的GPR34转录变异体；（2）通过染料法Real-time PCR明确GPR34各转录变异体在结肠正常和肿瘤细胞以及临床组织标本中的定量表达谱；（3）分析GPR34转录变异体表达与结肠癌临床病理特征的相关性。结果（1）结合GPR34基因相关信息分析，通过PCR技术确定了在结肠正常细胞中仅表达序列号为AF039686.1和AK122945.1的转录变异体；（2）与正常的结肠细胞相比，本研究所使用的所有结肠癌细胞中总的GPR34转录变异体和AK122945.1均表达上调；对30例结肠癌临床组织标本的分析表明，结肠癌组织中GPR34总的转录变异体表达上调的有18例，转录变体AK122945.1表达上调的有19例；（3）Fisher精确检验和Spearman相关性统计分析结果显示，GPR34总转录变异体和AK122945.1的表达上调与结肠癌的临床分期呈显著正相关性（ P＜0.05），而与性别、年龄、病理分级和浸润程度无相关性（ P＞0.05）。此外，二者表达上调的患者虽然淋巴结转移的发生趋于增多，但是统计学无差异（ P＞0.05）。结论 GPR34总转录变异体和AK122945.1表达上调涉及结肠癌的发生和发展，其中后者是GPR34总转录变异体表达上调的主要原因，推测其可能具有潜在的促癌作用。
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XAF1转录变异体在结直肠肿瘤中的差异表达
背景：X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）能与 XIAP 结合而拮抗其 caspase 抑制活性，从而促进细胞凋亡，已被认定是一种肿瘤抑制基因。在多种肿瘤细胞中可检测到 XAF1转录变异体，但不同转录变异体在结直肠肿瘤中的表达情况尚不明确。目的：检测 XAF1及其转录变异体在不同结直肠组织中的表达，初步探讨其在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法：收集结直肠癌及其配对癌旁组织、增生性息肉、腺瘤和正常结直肠黏膜组织样本，以免疫组化法和蛋白质印迹法检测 XAF1蛋白表达，RT-PCR 检测 XAF1转录变异体表达。结果：与正常结直肠黏膜相比，XAF1蛋白在增生性息肉、腺瘤和癌组织中的胞核表达强度显著降低（ P <0.05），胞质表达强度有所增高（P >0.05），总体表达强度显著降低（P <0.05）。结直肠癌组织中的 XAF1A 蛋白表达显著低于相应癌旁组织（P <0.05）。转录变异体 XAF1A、XAF1B、XAF1C mRNA 在结直肠肿瘤中的表达均显著低于正常结直肠黏膜（P <0.05）。结论：XAF1及其转录变异体在结直肠肿瘤和正常结直肠黏膜中存在差异表达，腺瘤阶段即已出现 XAF1表达下降并由胞核向胞质易位。转录后修饰可能影响 XAF1基因功能。
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XAF1转录变异体在胃肠道肿瘤细胞株中的表达及意义
目的 探讨XAF1不同转录变异体在胃肠道肿瘤中的表达情况及在肿瘤中的可能作用.方法 培养18株肿瘤细胞及正常转化细胞,取正常人胃黏膜组织及外周血淋巴细胞作为对照,RT-PCR方法检测XAF1 3种不同转录变异体的的表达情况;用人重组IFN-α作用于MGC803细胞24 h后,RT-PCR方法检测XAF1 3种不同转录变异体的改变情况.结果 XAF1A及XAF1B在胃肠道肿瘤细胞株及正常转化细胞中多不表达或低表达,高表达XAF1A的肿瘤细胞株(KATO Ⅲ、COLO205、HCT116、ESO)同时表达XAF1C,IFN-α能同时上调XAF1的不司转录变异体.结论 XAF1C与XAF1A、XAF1B在细胞凋亡上可能起相互拮抗作用,XAF1C的高表达可能与肿瘤细胞的转移有关.与XAF1A一样,XAF1B、XAF1C也可被干扰素诱导.
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FAM92A1新转录变异体的鉴定及功能研究
目的:对高度保守新基因FAM92A1的变异体进行鉴定和功能分析.方法:利用RT-PCR和序列测定检测FAM92A1基因新的转录变异体；分别构建FAM92A1三个转录变异体的真核表达质粒(pFAM92A1-271,pFAM92A1-251,pFAM92A1-289),转染SKOV3细胞,用MTT、流式细胞仪分析FAM92A1基因各转录本在过表达情况下对细胞增殖及细胞周期的影响；通过构建其融合蛋白表达载体pFAM92A1-EGFP转染细胞,分析其蛋白的亚细胞分布.结果:发现了FAM92A1两个新的转录变异体FAM92A1-251、FAM92A1-289,三者结构相似,都具有保守结构域DUF1208；FAM92A1-271、FAM92A1-251和FAM92A1-289过表达均可抑制细胞增殖,改变周期分布且阻碍细胞由S期进入G2期,形成S期阻滞；FAM92A1-271融合蛋白在细胞中的分布与DNA分布基本一致,主要定位于细胞核.结论:FAM92A1基因存在至少9种转录变异体,参与细胞增殖及细胞周期活动调节,是一与细胞周期活动相关的重要基因.
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Plunc基因AF172993序列不是complete CDS
目的 明确Plunc基因AF172993序列是complete CDS还是transcript variant.方法 利用RT-PCR方法扩增Plunc基因CDS区编码序列,将该序列克隆人pEGFP-N1真核表达载体中.正反双向测序分析,所得序列除了与AF172993序列两两比对,还与nr和人类基因组数据库进行比对分析.结果 新克隆序列在CDS区658位C取代了AF172993序列A,遗传密码子由AAG改变成CAG,相应氨基酸编码也从Gln变为Lys.与人类基因组比对,Plunc基因CDS区658位C碱基能与人类20号染色体基因组2094188位C碱基完全匹配.结论 AF172993序列658位A为突变位点,改变了氨基酸编码,实际为Plunc基因的变异体.GenBank数据库注释该序列错误.
