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缺氧诱导因子及其研究进展
缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)是20世纪90年代初,在研究低氧诱导的红细胞生成素(erythropoietin,EPO)基因表达时,从细胞核提取物中发现的参与氧稳态失衡调节的一个核心调节因子.HIF-1在哺乳动物和人体内广泛存在,是低氧活化的转录因子,直接或间接调节着血管生成、细胞增殖与凋亡、能量调节等众多通路.本文就HIF的结构、转录激活系统及其在红系生成、铁代谢稳态、固有免疫以及脂质代谢等方面的研究进展作一综述.
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人脑胶质瘤干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究
目的 探讨体内外原代培养的人脑胶质瘤干细胞(GSCs)与胶质瘤新生血管内皮细胞的关系.方法 新鲜高级别(WHOⅢ级、Ⅳ级)的人脑胶质瘤标本经原代培养获取GSCs,免疫组化法检测其肿瘤干细胞及干细胞标记物Nestin的表达；鉴定后的GSCs经低氧诱导,免疫荧光法检测其诱导分化后内皮细胞标记物CD31、CD144和胶质瘤细胞标记物GFAP的表达,RT-PCR和Western-blot法检测其CD31的表达；建立胶质瘤干细胞皮下荷瘤裸鼠模型,免疫组化技术检测模型中人来源的CD31的表达.结果 (1)悬浮生长的胶质瘤干细胞球样细胞经免疫组化鉴定Nestin表达阳性；(2)低氧诱导后的GSCs能够表达CD31、CD144,有些细胞能够同时表达CD144和GFAP；(3)RT-PCR检测发现GSCs在诱导前后都有CD31 mRNA的表达,而Western-blot检测到只有诱导后的GSCs有CD31蛋白的表达；(4)胶质瘤干细胞荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中部分微血管抗人CD31抗体染色阳性.结论 胶质瘤干细胞不仅在体外低氧条件下可分化为内皮细胞,在体内微环境条件下同样可分化为血管内皮细胞,并参与胶质瘤新生组织的血液供应.
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低氧诱导因子-1研究进展
低氧诱导因子-1(HIF-1)是机体的一种重要转录因子,其表达和活性受到细胞氧浓度的严密调控.它通过控制血管生成来调节氧的运输能力,通过调控糖酵解作用来增强机体对低氧的耐受.肿瘤的生长和血管生成与HIF-1的表达紧密相关,抑制HIF-1活性可能是治疗癌症的一种途径.另外,对HIF-1表达水平的药理学控制,可能也是治疗慢性肺疾患、脑缺血和心肌缺血等疾病的一种新思路.
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低氧诱导心肌细胞表达血管内皮生长因子发生机制的实验研究
目的:研究低氧诱导心肌细胞表达分泌血管内皮生长因子（VEGF）的发生机制.方法:将新生SD大鼠的心肌细胞进行原代培养,培养的细胞分为二组:正常对照组和低氧培养组,低氧组采用向培养瓶内灌注99.99% N2的方法,24 h后将预置的盖玻片取出,进行免疫组织化学检测分裂原活化蛋白激酶（MAPK）活性.结果:低氧培养的心肌细胞MAPK活性高于对照组（P<0.001）.结论:MAPK通路可能是低氧促进心肌细胞表达和分泌VEGF蛋白的机制之一.
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丹参酮ⅡA对膀胱癌裸鼠移植瘤增殖的影响及相关机制
目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对膀胱癌细胞体内增殖的影响以及相关机制.方法 将膀胱癌T24细胞注射到20只裸鼠皮下,建立裸鼠膀胱癌动物模型.1周后,随机分为对照组(n=10)和TanⅡA组(n=10),分别腹腔内注射生理盐水和TanⅡA(15 mg/kg,1次/3 d),并且开始定期测量瘤体大小(1次/3 d),连续6次,绘制肿瘤增殖曲线.末次给药24 h后,处死小鼠,RT-PCR检测两组裸鼠肿瘤组织中Aurora A、HIF-1α和Bcl-2 mRNA表达水平.结果 相比对照组,TanⅡA能够明显抑制T24细胞在裸鼠皮下的增殖,呈时间依赖性,并且可以显著降低TanⅡA组肿瘤组织中Aurora A(P<0.0001)、HIF-1α(P=0.0047)和Bcl-2(P=0.0005)mRNA表达水平.结论 TanⅡA可能通过降低Aurora A、HIF-1α和Bcl-2的表达水平,抑制膀胱癌的增殖,发挥抗膀胱癌的作用.
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IL-17在低氧诱导肺动脉高压过程中的作用
目的 观察不同时程低氧诱导的肺动脉高压小鼠肺组织中IL-17 mRNA及其蛋白表达水平的变化,探讨IL-17在低氧诱导肺动脉高压中的作用.方法 建立小鼠低氧诱导肺动脉高压模型,监测小鼠血流动力学改变、右心室肥厚指数(RV/LV+S),RT-PCR技术检测对照组及低氧3周、6周组肺组织IL-17 mRNA表达水平变化,Western blot技术检测相应蛋白表达水平变化及免疫组化方法对IL-17进行定位.结果 与对照组相比,低氧诱导下小鼠右心室收缩压力及右心室肥厚指数均明显升高,且差异有统计学意义(均P＜0.01),证实肺动脉高压模型成功建立.随着低氧时间的延长,IL-17 mRNA及其蛋白表达水平也逐渐增加,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).IL-17主要定位于内皮细胞,肺泡上皮细胞也有表达.结论 IL-17可能在低氧诱导肺动脉高压发生、发展过程中扮演了重要角色.
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低氧诱导神经元特异性表达bFGF重组腺相关病毒载体构建研究
目的:研究构建低氧诱导神经元特异性表达碱性纤维细胞生长因子(bFGF)重组腺相关病毒载体.方法:以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为治疗靶基因,通过分子克隆手段,构建低氧诱导、神经元特异性表达bFGF的“时空”表达可调控性新型重组腺相关病毒(AAV)载体.结果:将重组质粒5 HRE-3 NRSE-bFGF的菌液送测序,得到测序结果,并与合成的DNA寡核苷酸序列进行比较,证实与设计序列完全一致.结论:构建、包装重组腺相关病毒载体pAAV-5 HRE-3NRSE-bFGF有效.
关键词： 青光眼 低氧诱导 神经元特异性 腺相关病毒(AAV)载体 -
毛壳素诱导SIRT1表达及其在低氧性肺动脉高压形成中的作用及机制研究
目的：探索低氧性肺动脉高压（ HPH）的发生机制，明确毛壳素（ Chaetocin）在HPH发生发展中的作用及机制。方法：将小鼠分为常氧组、低氧组、低氧sham组和低氧毛壳素组，运用低压氧舱模拟5000 m海拔低氧28 d复制小鼠HPH模型。导管法检测小鼠右心室压力，并分离计算右心室肥厚指数，肺组织切片染色观察肺血管结构。体外培养平滑肌细胞，给予毛壳素及低氧（1％O2）处理，运用报告基因、PCR、Western blot、流式细胞等方法检测去乙酰化酶SIRT1及凋亡相关指标。结果：毛壳素可改善低氧诱导的小鼠右心室肥厚及肺血管重构，并显著降低小鼠右心室压力，同时逆转低氧诱导的肺组织中SIRT1以及caspase－3、8的表达下调。体外细胞实验也发现毛壳素可显著激活平滑肌细胞中SIRT1的转录和表达，上调caspase－3、8的表达，并诱导平滑肌细胞凋亡。结论：毛壳素可显著改善低氧诱导的小鼠肺血管重构，防止右心室肥厚，并降低右心室压力。其机制与上调SIRT1及凋亡相关分子的表达，诱导平滑肌细胞凋亡有关。
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HIF-1基因C1772T、G1790A多态性与藏族人群高原低氧适应关系的研究
缺氧诱导因子-1(HIF-1)是首先被低氧诱导并在组织细胞广泛表达的转录因子,HIF-1通过与靶基因低氧应答元件(HRE)的结合位点相结合并调节后者的转录,在缺氧分子生物学反应中起着重要调控作用.
