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双重打击致急性肺损伤大鼠膈肌中泛素-蛋白酶体途径变化的研究
目的：观察大鼠失血性休克(HS)+内毒素二次打击后膈肌组织内蛋白降解途径之一的泛素-蛋白酶体系统组成成分的变化。方法24只SD大鼠随机分为两组：假手术对照组(C组)和二次打击组(HS组)，每组12只。建立“失血性休克-内毒素”二次打击大鼠模型。蛋白免疫印记(Western blot)方法测定大鼠膈肌内E2-14k、MuRF1的蛋白表达；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测膈肌内泛素和蛋白酶体C2亚基的mRNA表达；采用苏木素-伊红(HE)染色在光镜下观察肺组织病理学改变；另外取膈肌标本固定后做电镜检测。结果蛋白免疫印记结果显示，HS组大鼠膈肌组织中E2-14k及MuRF1的蛋白表达分别为(1.65±0.38、1.88±0.32),与C组（分别为1.17±0.25,1.21±0.24）比较明显增加，差异有统计学意义，P<0.01。RT-PCR分析结果显示，HS组大鼠膈肌组织中泛素及蛋白酶体C2亚基的mRNA表达分别为(0.81±0.28、0.50±0.25，与C组（分别为0.89±0.20比0.50±0.15）比较明显增加，差异有统计学意义，P<0.05。HS组电镜下显示膈肌间线粒体肿胀、嵴减少，外膜模糊、变形，部分溶解破坏等超微结构的改变。结论二次打击大鼠膈肌组织内泛素-蛋白酶体降解途径被激活，可能是引起蛋白降解的重要因素之一。
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血管紧张素Ⅱ对急性肺损伤大鼠肺水通道蛋白1表达的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及在肺水肿形成中的作用.方法 按随机数字表法将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、AngⅡ受体阻滞剂预处理组及治疗组,每组10只.采用失血性休克-内毒素二次打击建立大鼠ALI模型.预处理组静脉注射脂多糖(LPS)前30 min注射AngⅡ受体阻滞剂30 μg/kg,注射LPS后30 min注射30 μg/kg生理盐水;治疗组注射LPS前30 min注射30 μg/kg生理盐水,注射LPS后30 min再注射AngⅡ受体阻滞剂30 μg/kg;模型组注射LPS前、后均给予30 μg/kg生理盐水.制模后6 h处死大鼠,取下腔静脉血,用放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;取肺组织,计算湿/干重(W/D)比值,用放射免疫法测定肺组织AngⅡ表达,用逆转录-聚合酶链反应测定AQP1 mRNA表达.结果 与假手术组相比,ALI大鼠血清TNF-α水平及肺组织W/D比值、AngⅡ表达明显增加,AQP1 mRNA表达明显减少.预处理组及治疗组血清TNF-α水平(μg/L)较模型组明显减少(4.79±0.24、5.55±0.36比6.34±0.31,均P<0.05),肺组织W/D比值减小(4.34±0.23、4.85±0.20比5.41±0.26,均P<0.05),AQP1 mRNA表达明显增加(0.854±0.067、0.727±0.081比0.358±0.071,均P<0.05);而AngⅡ表达(ng/g)有所降低(172.19±15.82、202.82±20.47比245.88±26.31),但差异无统计学意义(均P>0.05).AQP1 mRNA表达与AngⅡ表达和肺组织W/D比值均呈负相关(r1=-0.782,r2=-0.726,均P<0.05).结论 ALI时AngⅡ可能直接或通过炎症介质下调肺脏AQP1 mRNA表达,为肺水肿形成的机制之一.
