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乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白的表达纯化及在 Array-ELISA 方法中的应用
目的：拟在大肠杆菌中高效表达纯化乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白，希望能为乙型脑炎（乙脑）病毒（ JEV）感染血清的诊断试剂盒提供候选抗原。方法针对乙脑病毒的EDⅢ蛋白设计特异的PCR扩增引物，对提取的乙脑病毒RNA进行RT-PCR扩增，获取目的基因并构建重组质粒，将重组质粒转入E．coli BL21中并在IPTG作用下表达目的蛋白。将表达的乙型脑炎病毒EDⅢ抗原系列稀释后与对照抗原同时点制在ELISA微孔板中，采用Array-ELISA技术同时检测临床JEV感染患者及正常人血清，并与间接免疫荧光方法的检测结果进行比较。结果成功克隆了JEV EDⅢ蛋白基因段，并在E．coli BL21中表达，成功获得EDⅢ蛋白。该重组蛋白可用于Array-ELISA方法，进行JEV感染血清的检测，并且与传统免疫学检测方法---间接免疫荧光法结果一致。结论该重组抗原可作为JEV感染血清检测的候选抗原。
关键词： 乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白 克隆 Array-ELISA -
Array-ELISA检测六项肿瘤标志物诊断结直肠癌的临床价值分析
目的:探讨微阵列酶联免疫法(Array-ELISA)检测六项肿瘤标志物诊断结直肠癌(CRC)的临床价值.方法:选择49例CRC患者作为CRC组,选择19例同期进行结直肠手术的良性病变患者作为良性组,另取同期71例健康体检者作为对照组.采集3组患者的静脉血,通过Array-ELISA技术进行六项肿瘤标志物(AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199)检测.比较3组血清六项肿瘤标志物检测结果、CRC组ROC AUC结果、以及CRC组PRE与6项肿瘤标志物的相关参数.结果:(1)CRC组血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性组与对照组(P＜0.05).3组PSA与CA153水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)单项检测中CEA(AUC =0.916,P-0.001)具有高的诊断价值,Logistic回归模型建立的PRE面积为0.932,均高于单项指标检测.(3)本组CRC患者中的CEA特异度、灵敏度与准确率在单项中高;联合检测中Logistic回归预测变量PRE的特异度、灵敏度与准确率高于CEA(P ＜0.05).结论:Array-ELISA对CRC患者六项肿瘤标志物均有理想的检测效果,但单项肿瘤标志物的特异度、灵敏度具有一定的局限性,六项指标联合检测可以有效提高CRC的检出率.
关键词： Array-ELISA 六项肿瘤标志物 结直肠癌 临床价值
