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乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白的表达纯化及在 Array-ELISA 方法中的应用
目的:拟在大肠杆菌中高效表达纯化乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白,希望能为乙型脑炎(乙脑)病毒( JEV)感染血清的诊断试剂盒提供候选抗原。方法针对乙脑病毒的EDⅢ蛋白设计特异的PCR扩增引物,对提取的乙脑病毒RNA进行RT-PCR扩增,获取目的基因并构建重组质粒,将重组质粒转入E.coli BL21中并在IPTG作用下表达目的蛋白。将表达的乙型脑炎病毒EDⅢ抗原系列稀释后与对照抗原同时点制在ELISA微孔板中,采用Array-ELISA技术同时检测临床JEV感染患者及正常人血清,并与间接免疫荧光方法的检测结果进行比较。结果成功克隆了JEV EDⅢ蛋白基因段,并在E.coli BL21中表达,成功获得EDⅢ蛋白。该重组蛋白可用于Array-ELISA方法,进行JEV感染血清的检测,并且与传统免疫学检测方法---间接免疫荧光法结果一致。结论该重组抗原可作为JEV感染血清检测的候选抗原。
关键词: 乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白 克隆 Array-ELISA -
新型登革热疫苗临床前研发
登革热已经成为全球重要的公共卫生问题,由于目前尚无有效的治疗方法,因此,研发登革热疫苗已成为控制该病研究的热点.如今,几个候选登革热疫苗正处于临床试验阶段.一些临床前候选疫苗可能成为高质量的新一代疫苗.此文介绍了登革热疫苗研发的各种技术,着重阐述了临床前疫苗的研发现状.