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人血管生长素的亚细胞定位
已有大量研究表明血管生成素(angiogenin,ANG)与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系,肺癌、胰腺癌、乳腺癌等患者的外周血血清中,ANG的水平明显升高,血清ANG的水平与这些肿瘤的发展及转移呈显著正相关,因此,可以检测血清中ANG的水平来预测肿瘤的发生与发展情况.此外,ANG对于创伤、烧伤及血循环较差的股骨头、半月板等损伤的修复具有较大的临床应用价值.
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人血管生长素重组大肠杆菌发酵条件优化
考察了Mg2+、Ca2+、NH+4、PO3-4等无机离子、初始pH、装液量以及诱导前添加葡萄糖对重组大肠杆菌表达rhANG和菌体生长的影响.经过优化,rhANG表达量提高约39%,菌体干重达1.59 g/L,为工程菌发酵的扩试提供了参考.
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重组人血管生长素包涵体复性条件研究
目的 摸索重组人血管生长素(rhANG)复性影响条件,以提高rhANG的复性效率.方法 超声波破碎菌体,变性萃取rhANG包涵体.分析rhANG包涵体起始浓度、氧化型、还原型谷胱甘肽比例、盐酸胍和添加精氨酸对复性的影响.结果 在0.1 mol/L Tris-HCl pH 7~8,还原型、氧化型谷胱甘肽比率为5,盐酸胍为0.2~0.5 mol/L,起始蛋白质浓度0.1~0.2 mg/mL时,rhANG蛋白复性率为60%;0.5 mol/L L-精氨酸有助于复性.结论 初步优化rhANG包涵体复性参数,为rhANG的放大制备创造了条件.
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重组人血管生长素及其单克隆抗体的特性鉴定
目的鉴定自制重组人血管生长素(rhANG)及其单克隆抗体(mAb).方法采用凝胶扫描法分析rhANG的纯度;ELISA等方法检测抗rhANG mAb的特异性,鸡胚绒毛尿囊膜实验检测rhANG及其mAb的生物学活性,并与商品化标准品的免疫结合性进行对比研究.结果 rhANG的纯度达96%,具有促进血管生长的生物学活性;抗ANG mAb具有很好的特异性和抑制血管生长的活性;而且二者较标准品均具有良好的免疫结合活性.结论该rhANG及其mAb可用于进一步的实验和临床应用研究.