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斑点金免疫渗滤试验同步检测抗梅毒螺旋体IgM和IgG抗体的研究
目的 探求一种可用于梅毒诊断及疗效考核的简便、快速、可靠的方法.方法 建立检测抗梅毒螺旋体抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),平行检测梅毒患者血清中IgM和IgG抗体,对患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究;以梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)法为金标准,对临床上疑为梅毒患者的360份血清进行TPHA法和DIGFA法检测对比.结果 用DIGFA法对已确诊为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期梅毒患者治疗前血清中特异IgM抗体的检出率分别为82.61%(38/46)、100.00%(24/24)和77.78%(14/18);IgG抗体的检出率分别为60.87%(28/46)、91.67%(22/24)和88.89%(16/18);在Ⅰ期梅毒患者血清中特异IgM抗体的阳性率高于1gG抗体(P＜0.05),在Ⅱ期和Ⅲ期梅毒患者血清中,两类抗体的阳性率均较高,且差异无统计学意义(P均＞0.05).58例两类抗体均阳性的梅毒患者经有效药物治疗后3个月、6个月、1年、1.5年、2年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3个月的阴转率就达31.03%(18/58),1年的阴转率可达93.10%(54/58);而IgG抗体出现较晚,阴转缓慢,治疗后1年的阴转率仅为34.48%(20/54).结论 DIGFA是检测抗梅毒螺旋体抗体的有效方法,早期梅毒的诊断和疗效考核可检测IgM抗体,而IgG抗体的检测则主要用于回忆性诊断,不适用于判断是否治愈或再感染.
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HIV-1新发感染快速检测方法的建立与初步评价
目的 建立用于Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染检测的斑点金免疫渗滤快速检测方法,并研究其可行性及适用性.方法 以特定浓度的HIV-1多亚型重组gp41抗原作为探针,包被硝酸纤维素膜,胶体金标记的抗人IgG作为显色试剂,建立新发感染的快速检测方法.比较该方法与BED捕获酶联法、限制性抗原亲和力方法的一致性.结果 采用已知阳转时间的样本用于快速检测方法的建立,检测5例已知感染时间的样本的结果全部正确.分别用3种方法检测90例样本,快速检测方法与BED方法的符合率为88.9％(80/90),与亲和力方法的符合率为94.4％(85/90),快速检测方法与这两种方法检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 斑点金免疫渗滤法检测HIV-1新发感染具有快速、简便、经济、直观的特点,可节省检测时间和成本,提高检测效率,具有良好的适用性.
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斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用
目的:探讨利用斑点金免疫渗滤试验(DIFGA)检测结核分枝杆菌抗体对肺结核临床诊断的应用价值.方法:应用斑点金免疫渗滤法检测了正常人和各类肺部疾病患者共313例血清中结核分枝杆菌抗体,并与痰液涂片法、结核菌培养法和PCR法进行方法学比较.结果:结核分枝杆菌抗体检测肺结核患者阳性率为80.77%,非结核性肺病患者阳性率为7.64%,正常人阳性率为3.08%.结论:斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体对肺结核的诊断敏感性高,特异性好,对肺结核诊断有较高的应用价值,并且操作简便、快速,与涂片法、培养法和PCR相比,有明显优势.
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解脲支原体IgM抗体的临床意义探析
目的:探讨斑点金免疫渗滤试验检测解脲支原体IgM抗体在解脲支原体(UU)感染中的诊断价值.方法:对129例非淋菌性尿道炎患者的泌尿生殖道分泌物和血清,分别进行UU培养和UU-IgM抗体斑点金免疫渗滤试验.结果:129例非淋菌性尿道炎患者中,培养法检出UU42株,阳性率32.6%;UU-IgM抗体阳性38例,阳性率29.5%,与培养法比较,符合率95.3%,特异性98.8%,敏感度88.1%.经过两样本率的配对χ2检验,χ2＝0.14,P＞0.05,培养法和UU-IgM抗体的结果差异无显著性.结论:斑点金免疫渗滤试验检测UU-IgM抗体具有较高的敏感性、特异性,是一项辅助诊断UU早期感染的可信指标.
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斑点金免疫渗滤法检测谷氨酸脱羧酶抗体及临床应用
目的探讨斑点金免疫渗滤法快速测定谷氨酸脱羧酶抗体在糖尿病患者中的临床应用价值.方法采用斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测88例糖尿病患者和40例正常人群的血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab),并与酶联免疫吸附法(ELISA)作方法学的比较.结果DIGFA法检测1型和2型糖尿病患者的血清GAD-Ab阳性率分别为61.3%和19.3%,有显著性差异(P＜0.01),且均明显高于正常人群.与ELISA法比较,两种方法的检出率无显著性差异(P＞0.05).结论血清谷氨酸脱羧酶抗体在1型及有高度1型糖尿病倾向的人群中检出率较高,可作为糖尿病分型的依据,斑点金免疫渗滤法快速、简便、可靠,有实用价值.
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定量测定HCG的斑点金免疫渗滤试验的临床评价
目的评价斑点金免疫渗滤试验(DGIFA)定量测定血清和尿液人绒毛膜促性腺激素(HCG)的可靠性.方法分别用化学发光免疫分析法(CLIA)和DGIFA定量测定HCG试剂盒(HCG-DOT)及DGIFA定量仪测定40份血清样品的HCG含量,分别用胶体金免疫层析定性试验(GICA)和HCG-DOT及DGIFA定量仪测定270份尿液样品的HCG水平;作回收试验和不精密度试验.结果 CLIA和DGIFA定量测定血清样品HCG的相关性好;GICA检测阴性的162份尿液样品用HCG-DOT测定有9份为背景红色所致的假阳性,1份为血尿导致的假阳性,另2份为阳性;GICA检测阳性的95份和可疑阳性的13份尿液样品用HCG-DOT测定,结果均为阳性;HCG-DOT定量测定高、低浓度HCG血清样品和HCG尿液样品的变异系数(CV)分别为5.38%、4.13%和4.73%、6.01%;HCG-DOT定量测定血清和尿液的HCG回收率分别为94.7%和89.9%.结论 DGIFA定量测定尿液HCG,对尿液GICA结果可疑者可在妊娠早期作出明确的判断;DGIFA定量检测血清和尿液HCG的精密度良好,回收率较高,适合门急诊应用.
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斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体
目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原，将其结合于硝酸纤维素膜上；以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体，以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应，10 min内即可用肉眼观察结果，在289例临床血清标本的检测中，阳性率为21%，与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体，具有推广使用的价值。
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免疫胶体金检测不孕症患者血清ZPAb
目的:建立快速测定抗人卵透明带抗体(ZPAb)的新方法.方法:采用人卵透明带蛋白hu2p3a22-176和hu2p3b177-248肽段作为抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清ZPAb.共检测500份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果:人卵透明带多肽抗原与患者血清中特异性ZPAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反映,6min内即可直接观察结果.在500份血清检测中,阳性率为21.2%,与ELISA的结果基本一致(x2=3.66,P＞0.05)符合率96.1%,特异性为95.4%,敏感性为96.3%.交叉试验与重复试验结果显示,DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论:DIGFA可快速测定ZPAb,具有推广使用的价值.
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血清旋毛虫P49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测
目的建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径.方法以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfi]tration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体.共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68%,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84%,(χ2=7.94,P＜0.01).交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值.
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斑点金免疫渗滤法检测不孕症患者血清抗子宫内膜抗体
目的:建立一种快速测定抗子宫内膜抗体(antiendometrial antibody, EMAb)的新方法.方法:采用经抗人血清抗体-Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原(endometrium antigen,EMAg),以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫渗滤原理,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清EMAb.共检测586份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果:纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应,8 min内即可直接观察结果.在586份血清的检测中,阳性率为36.8%,与ELISA的结果基本一致(χ2=3.45,P＞0.05),符合率95.0%.特异性为94.7%,敏感性为95.6%.交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论:DIGFA可快速测定EMAb,具有推广使用的价值.
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斑点金免疫渗滤试验结核抗体检测临床应用的评价
目的探讨斑点金免疫渗滤试验抗结核抗体检测在结核病的诊断和疗效观察中的应用价值.方法对528例肺结核、324例非结核疾病、38例健康对照,分别进行结核分枝杆菌抗体斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)与痰涂片、L-J培养、TB-DNA检查对比,及观察100例DIGFA阳性患者的治疗后抗结核抗体动态变化.结果对396例肺结核、243例非结核疾病、38例健康对照的阳性率分别为80.3%(318/396)、7.4%(18/243)、2.6%(1/38),临床敏感性为80.3%,特异性为93.1%,与痰涂片、L-J培养、TB-DNA检查的阳性率37.3%、39.1%、48.5%相比,有显著性差异.100例DIGFA阳性患者的治疗后抗结核抗体动态观察,开始治疗后每隔3个月抗结核抗体阳性人数逐渐下降.结论抗结核抗体检测对结核病具有较高临床诊断价值,对肺结核的疗效监测有较高的实用价值.
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斑点金免疫渗滤法联合检测糖尿病自身抗体的研究
目的 构建联合检测糖尿病自身抗体的斑点金免疫渗滤法(dot immunogold filtration assay,DIGFA).方法 将重组人胰岛素、谷氨酸脱羧酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和锌转运体8抗原点样于硝酸纤维素膜上,制备胶体金标记链霉亲和素作为显色探针,建立斑点金免疫渗滤法检测1型糖尿病(type 1 diabetes,T1DM)患者外周血中相应的自身抗体,并对方法性能开展评估.结果 DIGFA法检测42例T1DM敏感性66.7％,检测100例健康对照特异性97％.与ELISA法相比对T1DM自身抗体检出率无显著差异(P＞0.05).3个批次的免疫渗滤装置检测结果一致,4℃保存10周内检测性能稳定.结论 本研究构建的斑点金免疫渗滤法准确、快速、简便,为联合检测糖尿病自身抗体提供了一种高效的新途径.
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迪比多检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用
目的探讨斑点金免疫渗滤试验(DIFGA 商品名:迪比多)检测结核分枝杆菌抗体对肺结核的诊断价值.方法采用迪比多试剂盒对包括104例肺结核患者、144例非结核性肺病患者和65例正常人共313例血清进行结核分枝杆菌抗体检测,同时用涂片法、培养法和聚合酶链法(PCR)检测痰液进行方法学比较.结果迪比多检测肺结核患者阳性率80.77%,非结核性肺病患者阳性率7.64%,正常人阳性率3.08%.结论迪比多敏感性高,特异性好,对肺结核诊断有参考价值;操作简便、快速,与涂片法、培养法和PCR相比有明显优势,适合基层医院推广使用.
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免疫胶体金检测不孕症患者血清EMAb
目的建立快速测定抗子宫内膜抗体(EMAb)的新方法.方法采用经Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原(EMAg),以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清EMAb.共检测500份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应,6 min内即可直接观察结果.在500份血清检测中,阳性率为41.2%,与ELISA的结果基本一致(X2=3.66,P＞0.05),符合率96.1%.特异性为95.4%,敏感性为96.3%.交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论 DIGFA可快速测定EMAb,具有推广使用的价值.
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斑点金免疫渗滤试验检测血清中抗-HAV抗体
0 引言抗-HAV是甲型肝炎既往感染的标志, 抗-HAV阳性率是甲型肝炎流行病学调查的主要指标. 目前检测抗-HAV常用的方法有RIA和ELISA法,两方法所需时间长,操作步骤多,且需特殊仪器设备. 斑点金免疫结合试验是20世纪80年代发展起来的一种简便快速的免疫检测新技术, 已成功地用于检测抗人类免疫缺陷病毒抗体[1,2]. 我们建立了检测抗-HAV的快速斑点金免疫渗滤试验,经初步试验,效果满意.
