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牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用
目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系.方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列.构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清.采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性.建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA.检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用.结果 6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同.所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右.rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体.94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性.1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P＜0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P＜0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P＞0.05).结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率.rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原.rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用.
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牙龈卟啉单胞菌菌毛致病机制的研究进展
FimA蛋白是牙龈卟啉单胞菌的重要毒力因子,在牙龈卟啉单胞菌黏附和入侵宿主细胞,促进牙菌斑生物膜形成以及引起宿主免疫炎症反应的过程中发挥重要作用,与牙周病和心血管疾病的发生和发展密切相关.根据编码FimA蛋白的fimA基因核苷酸序列的不同可将牙龈卟啉单胞菌分为Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型共6种基因型.FimA的表达受fimA基因的调控,不同fimA基因型菌毛的致病作用有一定差异.本文就牙龈卟啉单胞菌菌毛相关致病机制的研究进展进行综述.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响
目的 观察不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)表达水平的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力之间的关系.方法 Pg ATCC 33277(Ⅰ型)、WCSP115(Ⅱ型)、WCSP1.5(Ⅲ型)、W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育(对照组为达尔伯克氏改良伊格尔培养基),于孵育后1、3、6和12 h收集细胞和培养上清液,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA及蛋白的动态表达.结果 与对照组相比,Pg刺激下牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA和蛋白水平表达量均明显上调(P<0.01);其中Ⅱ型fimA型Pg的刺激作用强于其他各型,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(28.88±3.12)～(231.01±24.99)、(1.35±0.17)～(3.08±1.20);MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(20.42±2.21)～(188.34±37.37)、(2.57±0.76)～(18.08±1.15),与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ型Pg的刺激作用较弱,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(5.11±0.55)～(72.84±8.84)]μg/L、[(0.68±0.13)～(1.46±0.94)]μg/L;MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(4.55±0.55)～(25.75±3.12)]μg/L、[(2.28±0.93)～(11.22±2.46)]μg/L,与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 Pg可以诱导牙龈成纤维细胞过表达MMP,fimA基因型与Pg的毒力作用相关,fimA型可能为Pg致病力差异的基因基础.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在牙周健康人群中的分布
目的 调查不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)在牙周健康人群中的分布情况.方法 收集136例牙周健康者的龈下菌斑样本,采用16S rRNA PCR法检测P.gingivalis;并根据各fimA基因型特异性引物,用PCR法检测不同fimA基因型P.gingivalis的分布.结果 136例牙周健康者的龈下菌斑样本中携带P.gingivalis的阳性率为22.1%.大多数受检者龈下菌斑中只检测到1种fimA基因型P.gingivalis菌株(80.0%);5例样本检出了2种fimA型P.gingivalis(16.7%),且均为ⅠfimA型与其它fimA型P.gingivalis的联合检出.各fimA型P.gingivalis的检出情况:Ⅰ型(66.7%)、Ⅰb型(6.7%)、Ⅱ型(6.7%)、Ⅲ型(10%)、Ⅳ型(6.7%)、Ⅴ型(16.7%).Ⅰ型的检出率明显高于其它各型,差异有统计学意义(P＜0.05);其它各fimA型P.gingivalis间的检出差异均无统计学意义.结论 本研究条件下ⅠfimA型P.gingivalis在牙周健康人群中检出例数高, 提示:我国牙周状况不同人群携带的P.gingivalis菌株fimA基因型可能存在差异.
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感染根管中牙龈卟啉单胞菌fimA基因多态性研究
目的 研究根尖周炎患牙感染根管内牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)不同fimA基因型的分布情况.方法 收集200例感染根管内样本,经DNA抽提后使用16S rDNA PCR方法检测P.gingivalis.在P.gingivalis检出阳性样本中,根据各fimA基因型的特异引物,采用PCR检测不同fimA以基因型菌株的分布,并通过Pearson x2检验对不同fimA基因型与临床症状进行相关性分析.结果 感染根管中P.gingivalis的检出率为48％,其中79例样本只检测到1种fimA基因型P.gingivalis菌株(82.3％);12例样本检测到2种或2种以上fimA基因型P.gingivalis(12.5％).各fimA基因型P.gingivalis的检出情况:Ⅰ型29.2％、Ⅰb型8.3％、Ⅱ型37.5％、Ⅲ型14.6％、Ⅳ型19.8％.各型fimA基因与临床症状之间无统计学相关性(P＜0.05).结论 感染根管内P.gingivalis的fimA以基因存在基因多态性,其中以fimAⅡ型P.gingivalis菌株检出率高,其次为Ⅰ型和Ⅳ型.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在青春期龈炎患者中的分布
目的:分析不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)在青春期龈炎患者和青春期牙周健康者中的分布.方法:收集51例青春期龈炎患者和46例青春期牙周健康者的龈下菌斑,采用16S rRNA PCR检测P.gingivalis,并根据各fimA基因型的特异引物,用PCR检测不同fimA基因型菌株的分布.结果:龈炎组各fimA基因型P.gingivalis的总检出率:Ⅰ型34.2％,Ⅱ型55.3％,Ⅳ型18.4％,Ⅲ型和Ⅴ型未检出;另有7例(占18.4％)未分出型别.健康组各fimA基因型P.gingivalis的总检出率:Ⅰ型14.3％,Ⅱ型85.7％,Ⅲ型14.3％,Ⅳ型28.6％,Ⅴ型未检出；另有2例(占14.3％)未分出型别.结论:青春期龈炎和青春期牙周健康者龈下菌斑中的P.gingivalis存在fimA基因多态性.fimA基因Ⅱ型是其主要存在的基因型,其次是Ⅰ型和Ⅳ型,Ⅲ型和Ⅴ型较少或不能检出.
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牙龈卟啉单胞菌fimA分型与相关疾病的研究
牙龈卟啉单胞菌与牙周组织感染、糖尿病、冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)等疾病的发生发展密切相关.菌毛是牙龈卟啉单胞菌重要的毒力因子,可以协助牙龈卟啉单胞菌黏附和入侵宿主细胞.根据FimA蛋白编码基因fimA核苷酸序列的不同可将其分为Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ等6种基因型,不同fimA基因型菌株的致病力和与疾病的相关性有一定差异.本文重点综述近年来不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌菌毛与相关疾病的研究进展.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在慢性牙周炎患者中的分布
目的分析不同fim A基因型牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)在慢性牙周炎患者中的分布状况.方法收集101例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用常规培养法和16S rRN APCR检测P.gingivalis,并根据各fimA基因型的特异引物,用聚合酶链反应(PCR)检测不同fimA基因型菌株的分布.结果 16S rRNA PCR检测P.gingivalis阳性检出率为88.1%.大多数受检牙龈下菌斑中只检测出一种fimA基因型菌株(65.1%),各fimA基因型的总检出率:ⅠfimA为24.7%;ⅡfimA为43.8%;ⅢfimA为15.7%;ⅣfimA为40.4%;VfimA为3.4%.结论慢性牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈卟啉单胞菌存在fimA基因多态性,ⅡfimA和ⅣfimA基因型P.gingivalis菌株与慢性牙周炎的发生发展关系密切.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞表达白细胞介素-8的影响
目的:研究不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)对人牙龈成纤维细胞表达IL- 8的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力差异之间的关系.方法: Pg ATCC 33277(Ⅰ型),WCSP115(Ⅱ型),WCSP1.5(Ⅲ型),W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后1、3、6、12 h收集细胞和上清,应用实时荧光定量RT- PCR和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的动态表达.结果:与对照组比较,各fimA型Pg对牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达均有明显的促进作用(P<0.01);其中ⅡfimA型组IL- 8 mRNA和蛋白的表达量明显高于其它fimA型组,不同时间点IL- 8 mRNA相对表达量分别为20.42±2.21～103.01±12.50,蛋白分泌水平为(137.46±4.97～323.24±13.74) pg/ml;而Ⅲ fimA型Pg组的表达水平弱于其它fimA型组,IL- 8 mRNA相对表达量为3.61±0.39～12.88±1.56,蛋白分泌水平为(44.83±3.68～189.19±87.34) pg/ml, 差异有统计学意义(P<0.05).结论:Pg可促进牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达,且各fimA型Pg的促进作用有所差异.提示: fimA基因型的不同可能是Pg的致病力差异的基因基础.
