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降脂益生菌对非酒精性脂肪肝大鼠胆汁酸代谢的影响及机制
目的：探讨降脂益生菌 DM9054(鼠李糖乳杆菌)联合86066(植物乳杆菌)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)胆汁酸代谢的影响及其可能机制。方法21只雄性 SD 大鼠随机分为对照组、模型组及益生菌干预组。高脂饮食20周建立大鼠 NAFLD 模型,造模同时给予干预组大鼠鼠李糖乳杆菌联合植物乳杆菌灌胃,对照组及模型组给予生理盐水灌胃。干预结束后,我们检测了各组大鼠甘油三酯、胆固醇水平以及血清 CK18-M30水平。并使用 real-time PCR 评估了胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、纤维生长因子受体4(FGFR4)、法尼醇受体( FXR) mRNA 以及回肠 FXR、ASBT、纤维生长因子15( FGF15) mRNA表达水平。 Western blot 检验肝脏 CYP7A1、FXR 及回肠 ASBT 蛋白表达水平。免疫组织化学法分析肝脏 FXR 及肠道 FXR 蛋白表达水平。结果与模型组相比,降脂益生菌干预可显著改善肝脏脂质沉积及损伤,上调肝脏 CYP7A1表达水平,抑制肝脏 FXR,激活肠道 FXR-FGF15通路,降低 ASBT 表达,且差异均有统计学意义(P<0.05),虽然降脂益生菌可使肝脏 FGFR4 mRNA 表达下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论降脂益生菌可能通过抑制肝脏 FXR 通路及肠道 ASBT 负反馈上调 CYP7A1的表达,并激活肠道 FXR-FGF15通路,促进胆汁酸代谢,从而起到改善非酒精性脂肪肝的作用。
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熊脱氧胆酸对抗乙炔雌二醇诱发孕大鼠肝内胆汁淤积的作用机制
目的:研究熊脱氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)对雌激素诱发孕鼠肝内胆汁淤积肝脏胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)及肝脏法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)表达的影响,探讨UDCA治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatis cholestasis of pregnancy,ICP)的作用机制.方法: 随机将孕15d的大鼠40只分成4组,1,2-丙二醇(propylene Glycol,PG)组,17-α-乙炔雌二醇(ethinylestradiol,EE)组,UDCA组和UDCA+EE组.用药前,用药后5d测血浆中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆酸(TBA).同时观察肝脏形态学变化及胎鼠生长发育情况;应用免疫组化法分析肝脏BSEP及FXR的表达.结果:用药后EE组的孕鼠ALT、AST、ALP、TBA比用药前显著升高(P＜0.05),PG组无明显变化(P＞0.05),UDCA组,UDCA+EE组ALT,AST,ALP无明显变化(P＞0.05),但TBA明显升高(P＜0.05).EE组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,其余3组肝脏形态结构正常.EE组胎仔身长,尾长,体重,死胎数,活胎数,孕天数与其余3组比较有显著差异(P＜0.05).EE组BSEP表达降低,FXR表达升高,与PG组,UDCA组,UDCA+EE组差异均有显著性(P＜0.05).结论:UDCA对雌激素诱发孕鼠肝内胆汁淤积肝脏具有保护作用,能改善胎仔预后,可能是通过恢复肝脏BSEP的表达促进胆汁分泌,而不是通过影响FXR表达调节胆汁酸的合成.
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多药耐药蛋白3和法尼醇受体在婴儿胆汁淤积性肝炎肝组织中的表达及意义
目的 探讨婴儿胆汁淤积性肝炎肝组织中多药耐药蛋白3(MDR3)和法尼醇受体(FXR)的表达及意义.方法 2000年1月-2009年10月就诊于广西医科大学第一附属医院儿科的婴儿胆汁淤积性肝炎患儿21例.男14例,女7例,男女比例21;年龄(2.96±1.19)个月.收集其临床资料,进行肝组织活检.正常对照组10例,为肝移植供体,肝功能和病理检查正常.采用免疫组织化学法检测婴儿胆汁淤积性肝炎患儿及正常肝组织中MDR3、FXR的表达,通过图像分析技术进行定量分析.分析MDR3蛋白水平与血清γ-谷氨酰转肽酶及FXR蛋白水平的关系.结果 MDR3在正常肝组织的表达位于肝细胞膜,胆汁淤积性肝炎肝组织MDR3表达增强.胆汁淤积性肝炎组和正常对照组MDR3表达吸光度(A)值分别为 0.13±0.02 和0.11±0.03,二组比较差异有统计学意义(t=-2.239,P<0.05).MDR3表达水平与γ-谷氨酰转肽酶水平无相关性(r=0.869,P>0.05).正常对照组肝组织FXR表达位于肝细胞核,正常对照组和胆汁淤积性肝炎组肝组织FXR表达A值分别为 0.07±0.02 和 0.08±0.02,二组比较差异无统计学意义(t=-1.539,P>0.05).MDR3表达与FXR水平无相关性(r=-2.680,P>0.05).结论 在婴儿胆汁淤积性肝炎中,肝组织MDR3表达增强可能是机体的适应反应,以利于增强磷脂的转运,MDR3的上调可能与FXR无关.
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通过调控载脂蛋白(a)基因表达降低脂蛋白(a)血浆水平
脂蛋白(a)是1963年由Berg等[1]从血浆中分离出来的一种与低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)相似的蛋白质.与LDL相比,脂蛋白(a)具有更强的氧化活性及致炎作用,因此其致动脉粥样硬化(As)的能力更强[2-3].这与其分子组成密切相关.脂蛋白(a)是由载脂蛋白B100[apolipoprotein B100,apo B100]和富含神经氨酸的糖蛋白apo(a)[apolipoprotein(a),apo(a)]通过二硫键共价结合而成[1,4].脂蛋白(a)的致病作用主要源于其脂质成分和apo(a),前者可以增加胆固醇在动脉壁沉积和LDL胆固醇的氧化易感性,后者由于其结构和纤溶酶原高度同源,可以竞争性抑制纤溶酶原的激活从而干预纤维蛋白溶解,加速血栓形成[5-6].研究显示血浆中脂蛋白(a)的水平主要由遗传所决定,在不同的人种中变化较大,但不受年龄、性别及饮食的影响[7],高脂蛋白(a)被认为是引起心血管疾病独立的危险因素.因此,降低高脂蛋白(a)血症患者中的血浆中脂蛋白(a)浓度成为防治心血管疾病发生发展的重要策略.但目前还缺乏专一有效的方法.
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FXR、CYP7A1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用
目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahe-patic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠肝脏的表达情况,探讨FXR与CYP7AI在ICP发病机制中的作用.方法 用随机数字表法将30只孕15 d的SD大鼠分成2组:生理盐水(NS)组和苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)组,每组15只.用药前和用药后第5天分别测定血清中ALT、AST、ALJP、TBA水平,同时观察肝脏形态学变化,并应用RT-PCR和Westernblot分别检测肝脏FXR、CYP7A1两者mRNA和蛋白的表达.结果 EB组用药后备血清生化指标比用药前显著升高(P<0.01),NS组用药前后无明显变化(P>0.05);EB组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,Ns组肝脏形态结构正常;EB组FXR和CYP7A1两者的mRNA和蛋白表达均显著高于Ns组(P<0.01).结论 EB诱导的ICP孕鼠肝脏FXR及CYP7A1表达均增加,说明存在胆汁酸合成自身反馈调节障碍,导致胆汁酸合成增加,这可能是ICP发病机制之一.
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FXR、IBABP在ICP孕鼠胆汁酸肠肝循环中作用机制的探讨
目的:通过苯甲酸雌二醇诱导建立孕鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)模型,检测法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)、回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP)在回肠上的表达,从胆汁酸肠肝循环角度探讨FXR通过IBABP在ICP中的作用机制.方法:孕15天SD大鼠30只随机分成两组:0.9%氯化钠(NS)组;苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)处理组.用药前,用药后5天测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)水平,测量胎鼠生理指标,观察肝脏形态学变化.分别应用逆转录多聚酶链式反应法(RT-PCR)及免疫组化法对回肠FXR及IBABP表达进行分析.结果:用药后EB组出现以下变化:孕鼠血清生化指标比用药前显著升高(P＜0.05);孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现;胎鼠体重、胎盘重量减轻,胎死率增加,孕天数缩短(P＜0.05);FXRmRNA、蛋白及IBABP mRNA、蛋白的表达高于NS组(P＜0.05).结论:雌激素具有明确的诱发孕鼠肝内胆汁淤积症的作用.雌激素诱导的胆汁淤积促进回肠FXR和IBABP(蛋白及mRNA)的增加表达,导致胆汁酸肠肝循环转运增加,进一步加重胆汁淤积,这可能是ICP发病机制之一.
