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MUNC18c 蛋白质类文献资料
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基于SM 蛋白的CHO细胞分泌工程化改造和抗体表达的研究
目的：通过构建基于 SM 基因的分泌工程化改造的CHO-AV-SM 细胞株，探讨在悬浮培养条件下，过表达转运蛋白 SM 基因对分泌蛋白表达的影响。方法首先从人 HEK293FT 细胞中克隆出 sly1和munc18c 基因，然后构建含有 SM 基因的真核表达载体 pBSM；随后将 pBSM 质粒稳定转染入 CHO-AV 细胞并鉴定，获得了基于 SM 基因的分泌工程化改造的CHO-AV-SM 细胞株；在此基础上对 CHO-AV-SM 细胞株进行悬浮培养适应，并测定了 CHO-AV 和 CHO-AV-SM细胞株的生长和蛋白表达参数。结果过表达转运蛋白 SM 基因，CHO-AV-SM 细胞株的抗体表达量较 CHO-AV 抗体表达量提高约75%，且测得第6天细胞数达到大值，此时 CHO-AV 的表达量约为45.4μg/ml，CHO-AV-SM 的表达量为79.5μg/ml。结论通过构建全抗稳定表达细胞，在细胞中过表达 SM基因，并悬浮培养适应，建立了悬浮培养条件下基于转运蛋白过表达的分泌工程改造方法，为转运蛋白改造 CHO 细胞，提升全抗表达能力提供了有力支持。
关键词： CHO 细胞 蛋白质工程 SLY1 蛋白质类 MUNC18c 蛋白质类 贝伐单抗
