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汉逊酵母表达乙肝表面抗原的结构研究
目的 解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原(HBsAg)的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息.方法 整合adr 亚型 HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌.经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg.滴加5μl浓度为80 μg/mlHBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2%醋酸铀染色,放置24 h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像.运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构.结果 汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布(P=0.45),均值为(28.4.±2.6)nm;汉逊酵母表达HBsAg是-中空的"鱼笼"状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1~2 nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性.结论 汉逊酵母表达的 HBsAg与血源性的 HBsAg 在大小和结构对称性方面都有显著差异.
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绿脓假单胞菌是单端双鞭毛菌的验证
绿脓假单胞菌(PA)是由Schroeter 在1872年首次报告[1],所有的文献均描述具有单端极鞭毛,第9版伯杰细菌鉴定手册[2]和第8版临床微生物学手册[ 3 ]也是这样记载的.本研究通过细菌鞭毛染色方法和透射电镜负染色证实,PA具有双鞭毛.
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透射电镜观察氧化亚铁硫杆菌的改进
电子显微镜广泛应用于生物医学领域,而负染色技术也得到越来越广泛的应用.负染色是利用高密度的在透射电镜下不显示结构的重金属盐(如醋酸铀、磷钨酸等),将生物标本包围起来,增强背景散射电子的水平以提高反差,在黑暗的背景上显示阴性反差样品的微细结构.
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应用电子显微镜的负染色技术快速检测樱桃树叶病毒
目的:讨论应用电子显微镜负染色技术进行樱桃树叶病毒粒子的快速检测.方法:对病株的典型叶片进行搅碎、离心制成悬液,用磷钨酸进行染色,在载网上干燥后,透射电镜下观察.结果:在电镜下能清楚显示样品表面的微细结构.结论:这种技术具有分辨率高、简单易行、快速等优点,被广泛应用于研究病毒及生物大分子的形态与结构.
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应用单宁酸的负染色效果显示大鼠生殖器官微血管
近百年来,许多学者为研究器官内血管立体构筑倾注了大量心血,创造了多种显示微血管构筑的方法,诸如墨汁灌注法[1],橡胶[2]、维尼龙[3]血管、淋巴管立体铸型法,微血管铸型扫描电镜法[4],碱性磷酸酶法(钙铅法)[5]以及单宁酸-氯化铁媒染法(TA-Fe法)[6,7],为科学研究及临床应用做出了贡献.继TA-Fe法媒染微血管后,我们又发现单宁酸过度媒染某些组织结构,有类似电镜标本负染色技术效果,清晰地显示了大鼠子宫、卵巢、输卵管等器官的血管构筑特点.
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透射电镜负染色技术常见影响因素与对策
负染色技术又称阴性反差染色,简称负染.它是由HaLL和Huxley首先采用的一种应用于生物大分子研究的染色技术.与传统染色不同的是,样品进行负染色时,由于其与染液之间不发生反应,故样品本身并不着色.利用样品与染色剂密度的悬殊对比,在电子致密的黑色背景中能反衬出低电子密度的白色样品,形成负反差,故称负染色[1].