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正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR 细胞凋亡易感性的影响
为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60/VCR凋亡易感性的影响,先建立HL-60或HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养体系;采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙/溴化乙啶(A0/EB)染色,分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察;TUNEL检测晚期凋亡细胞,流式细胞术检测细胞周期、凋亡峰和annexin Ⅴ阳性的早期凋亡细胞;Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化.结果表明,经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60/VCR细胞,在光镜和荧光显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变,这些改变具有时间和剂量依赖性;annexin Ⅴ染色后能检测到早期凋亡细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有明显凋亡峰;TUNEL能检测到许多阳性细胞;同时出现活化的caspase-3,伴有Bcl-2的表达下调,但与HFCL细胞共培养后,经TPT处理的HL-60和HL-60/VCR细胞中早期和晚期凋亡细胞有所减少,凋亡峰减低,而且活化的Caspase-3表达减弱,Bcl-2蛋白表达上调,且以直接接触组为甚.结论:正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60/VCR细胞对TPT的凋亡易感性,并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与.
关键词： 骨髓基质细胞 急性白血病 HL-60细胞 HL-60/VCR细胞 细胞凋亡 -
正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响
目的观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60/VCR增殖和分化的影响.方法采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60/VCR细胞药物敏感实验.建立HL-60/VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp).结果HL-60/VCR细胞对多种药物耐药.与HFCL细胞共培养后,HL-60/VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用＞用transwell组.同时发现HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多.Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚.但是P-gp表达无变化.结论正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60/VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化.
