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miR-181a靶向抑制ATM表达促进急性髓系白血病细胞增殖
目的:研究microRNA181a(miR-181a)在人急性髓系白血病(AML)中的作用及其调控机制.方法:采用miR-181a小分子类似物转染人AML细胞系HL-60细胞,采用CCK-8计数法检测miR-181a对细胞增殖的影响.利用生物信息学方法结合文献分析预测miR-181a潜在的靶基因,通过双荧光报告实验在HL-60细胞内以及白血病患者体内多方面对靶基因进行验证.结果:miR-181a能显著促进人HL-60细胞恶性增殖(P＜0.05);在线软件预测发现,抑癌基因ATM可能是白血病细胞miR-181a潜在的靶基因;双荧光报告实验结果表明,miR-181a能显著地抑制含3'-UTR的ATM报告基因活性,荧光素酶活性下降56.8％ (P＜0.01),而对含3'-UTR突变位点的ATM报告基因载体没有抑制作用.在HL-60细胞中过表达miR-181a,Western blot检测显示可以显著抑制内源性ATM的表达(P＜0.01),而在白血病患者中miR-181a的表达增高,与ATM的表达呈负相关(r=-0.766).结论:miR-181a通过抑制抑癌基因ATM表达以促进人AML细胞恶性增殖,从而在AML发病中起着类似“癌基因”的作用.
关键词： 微小RNA-181a 靶基因 ATM 髓系白血病 -
微小RNA-181a抑制唾液腺腺样囊性癌细胞株增殖能力的研究
目的 探讨微小RNA(miR)-181a对唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞增殖能力的体内外作用影响.方法 通过过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达.实时荧光定量PCR检测转染后SACC细胞株中miR-181a的表达水平.MTT法检测miR-181a对SACC细胞体外增殖能力的影响.Western blot检测转染后生长因子因子表达的改变.裸鼠皮下移植瘤模型检测miR-181a对SACC细胞体内增殖能力的影响.采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 实时荧光定量PCR结果示,转染后SACC-LM细胞中miR-181a表达升高(t=-9.198,P=0.012),而SACC-83细胞中miR-181a表达降低(t=-7.241,P=0.019);SACC-LM细胞增殖能力降低(t =-4.58,P=0.045),而SACC-83细胞增殖能力提高(t=3.016,P=0.03);SACC-LM细胞中转化生长因子β2(TGF-β2)、神经生长因子(NGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平均下调,而SACC-83细胞中TGF-β2、NGF和VEGF的表达水平均升高.裸鼠皮下移植瘤模型结果显示,miR-181a mimics组移植瘤瘤体明显小于mimics NC组(t=-4.692,P=0.043).结论 miR-181a能抑制SACC细胞体内体外的增殖能力.
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细胞Toll样受体4/微小核糖核酸-181a在慢性乙型肝炎肝纤维化进程中的动态表达及临床意义
目的 探讨TLR4/微小核糖核酸(micro RNA,miRNA)-181a在CHB肝纤维化进程中的作用及临床意义.方法 CHB患者经肝活组织检查进行肝纤维化分期(S);实时PCR法检测肝组织、血清miRNA-181a以及肝组织TLR4 mRNA表达;蛋白质印迹法检测肝组织TLR4蛋白;计算基于4因子的纤维化指数(fibrosis index based on the 4 factors,FIB-4)及天冬氨酸转氨酶与血小板比值指数(aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index,APRI)进行非侵袭性肝纤维化诊断;对数据采用单因素方差分析、Mann-Whitney U检验、Spearman相关分析及受试者工作特征曲线(receiver operation characteristic curve,ROC曲线)分析.结果 40例CHB患者,S0期(7例)、S1期(6例)、S2期(14例)、S3期(7例)和S4期(6例)血清miRNA-181a表达水平(2-ΔΔCt值)分别为1.00±0.00、0.68±0.08、1.60±0.43、2.32±0.40和1.81±0.22,总体呈上升趋势(F=207.242,P=0.000),与肝纤维化严重程度呈正相关(r=0.754,P<0.01);随肝纤维化分期加重,肝组织miRNA-181a、TLR4 mRNA及TLR4蛋白表达总体呈上升趋势(F值分别为207.242,110.390和57.030,均P<0.01),肝组织miRNA-181a与T L R4蛋白表达及肝纤维化严重程度均呈正相关(r值分别为0.673和0.911,均P<0.01).严重肝纤维化(S3～S4)组APRI与非严重肝纤维化(S0～S2)组差异无统计学意义(Z=-1.401,P>0.05).血清miRNA-181a表达评估严重肝纤维化(S3～S4)优于FIB-4(ROC曲线下面积:0.887比0.695;准确度:85.0％ 比60.0％).结论 miRNA-181a可能参与TLR4信号通路的调控而影响CHB患者肝纤维化进程,有望成为防治肝纤维化新的"靶点"及非侵袭性评估肝纤维化的血清指标.
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NSCLC患者血清miR-181a的表达变化及其与铂类药物化疗敏感性的关系
目的 观察微小RNA(miR)-181a在早期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达变化,并分析其与铂类药物化疗效果的相关性.方法 采用茎环结构的逆转录实时定量PCR方法,检测40例早期NSCLC患者(NSCLC组)术前及其中30例铂类药物化疗前后血清miR-181a水平,同时设40例健康体检者为对照组;分析血清miR-181a水平与NSCLC临床病理特征及铂类药物化疗效果的关系.结果 NSCLC组术前和对照组血清miR-181a表达量分别为0.002 59、0.007 29(P ＜0.000 1),前者与肿瘤临床病理特征间无统计学相关性(P均＞0.05);NSCLC组30例患者化疗前后血清miR-181a相对表达量分别为0.002 79、0.006 25(P =0.000 1),其中化疗无效、有效者分别为0.004 56、0.007 93,化疗无效者显著低于化疗有效者及对照组(P分别为0.015、0.005),后两者比较无显著差异(P =0.806).结论 miR-181a在早期NSCLC患者血清中的水平降低,并与铂类药物化疗敏感性相关;可能作为潜在的生物标记物用于NSCLC的早期诊断及化疗敏感性预测.
关键词： 微小RNA-181a 非小细胞肺癌 铂类药物 化疗敏感性 -
微小RNA-181a与视网膜节细胞在视网膜缺血-再灌注中的关系及其作用机制探讨
背景 视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤是眼科常见病理改变之一,但其发病机制尚未明确.目的探讨大鼠RIR模型中微小RNA-181a(miR-181a)与视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡之间的关系及可能的靶向机制.方法 构建68只SD大鼠RIR模型,按随机数字表法随机分为对照组和造模后即刻组、造模后24 h组及造模后72 h组,每组17只,根据MiRanda、Targetscan和miRBase 3个靶基因数据库的共同预测结果,选取肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作为miR-181a的下游靶基因研究对象,通过免疫荧光标记法Western blot 及实时荧光定量PCR法观察miR-181a、TNF-α在各组的表达情况及其与RGCs凋亡的关系. 结果 RGCs计数在造模后24 h和72 h显著减少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.001).各造模组miR-181a表达量随造模时间明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).此外,随RIR时间的延长,miR-181a的表达量及RGCs的数量均逐渐减少,两者呈正相关(r=0.995,P=0.005).TNF-α主要在内层视网膜表达,与miR-181a分布重叠;RIR即刻至24 h之间TNF-α表达明显升高,与RGCs计数及miR-181a表达的变化趋势相反,但总体相关性分析无统计学意义. 结论 在RIR模型中,miR-181a可能参与RGCs凋亡的调控,TNF-α是其可能的下游靶基因之一,RIR 24 h前是重要的干预时机.深入研究miR-181a及其靶向基因有助于探寻新的神经保护治疗靶点.
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上调miR-181a抑制香烟提取物诱导的支气管上皮细胞致炎因子生成与collagen IV、fibronectin和α-SMA表达
目的:探讨微小RNA-181a(miR-181a)对香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)致炎因子生成与IV型胶原蛋白(collagen IV)、纤连蛋白(fibrone-ctin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并分析其可能的机制.方法:RT-qPCR检测CSE诱导下HBECs中miR-181a的表达情况.转染miR-181a mimic后经ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;Western blot检测collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达;并进一步评估NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活性.结果:CSE可显著增加HBECs中致炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的生成,显著上调collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达,同时细胞内miR-181a的表达明显降低(P<0.05);转染miR-181a mimic可显著抑制CSE诱导的HBECs致炎因子生成及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达(P<0.05).此外,Western blot的结果显示转染miR-181a mimic可抑制CSE诱导的NF-κB/TGF-β1/Smad3信号活性(P<0.05).结论:上调miR-181a表达可部分逆转CSE诱导的HBECs致炎因子的释放及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达,其作用机制可能与抑制NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活化有关.
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miR-181a与消化系统常见肿瘤关系的研究进展
消化系统肿瘤是严重影响人类健康的疾病,目前其发生发展、侵袭转移、化疗耐药等机制尚未明确.miR-181a是miRNA家族的重要一员,研究发现其在消化系统肿瘤的发生发展、侵袭转移等方面具有重要作用.故本文对miR-181a与消化系统肿瘤的关系作一综述,为探索消化系统肿瘤的发生发展及临床治疗提供一定的理论依据.
关键词： 微小RNA-181a 消化系统 肿瘤
