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细粒棘球绦虫AgB5抗原表位的生物信息学预测
目的 应用计算机在线预测软件分析细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构,预测其可能形成的B细胞表位和T细胞表位,为研制安全、高效的新型包虫病基因疫苗奠定基础,也为包虫病的免疫学治疗提供新的理论依据.方法 采用计算机在线预测软件SOPMA对细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构进行预测和分析;采用LEPS和ABC Pred网络软件结合其表面特性、亲水性、柔韧性、可及性、可塑性等对其B细胞表位进行预测和分析;采用IEBD和SYFPEITHI在线软件对细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位进行预测和分析.结果 采用计算机在线预测软件预测细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构中α螺旋结构占76.47％,β-折叠占5.88％,无规则卷曲占17.65％.结合其表面特性、亲水性、柔韧性、可及性以及可塑性等分析得出分值较高的3个B细胞表位区域,分别为:6～14、28～33和48～52氨基酸序列,较易形成B细胞表位;通过MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位分析得出分值较高的4个T细胞表位区域,分别为:9～13、24～29、38～45和51～59氨基酸序列,较易形成T细胞表位. 结论 通过生物信息网络技术方法分析确定细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白分别存在3个B细胞抗原表位和4个T细胞抗原表位,可为细粒棘球绦虫AgB抗原性研究和高效表位疫苗研发提供参考,为临床包虫病的免疫诊断、药物治疗提供新的靶标.
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检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究
目的探讨检测患者血清特异IgG4诊断包虫病的效果.方法采用两种抗原(棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过ELISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异IgG4.结果粗抗原和抗原B检测棘球蚴患者血清特异IgG4的阳性率分别为94.4%和89.8%;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应.结论检测棘球蚴患者血清特异IgG4敏感性高,特异性强,具有较好的诊断价值.
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感染细粒棘球蚴绵羊诱发过敏性休克期间IgG、IgG1和IgE水平的探讨
目的测定感染细粒棘球蚴(E.g)绵羊诱发过敏性休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平.了解抗原B对人工感染E.g绵羊IgG抗体的反应性.方法从绵羊E.g囊液中制备抗原B和E.g囊液粗制抗原,ELISA测定感染E.g绵羊诱发休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体的动态变化.结果感染E.g绵羊6个月,特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平较正常绵羊显著升高;诱发休克后特异性IgE抗体水平显著下降,尤其因休克致死的绵羊下降更为明显;IgG及IgG1抗体的衰减时间不同,趋势各不相同;抗原B和E.g囊液粗制抗原与血清IgG抗体反应阳性率分别为91%、32%.结论特异性IgE是导致棘球蚴病所致过敏性休克的主要抗体,而IgG和IgG1抗体也起着重要作用.抗原B与感染E.g绵羊IgG抗体的血清反应性较好,可作为一种血清免疫学诊断方法监测绵羊感染E.g的状况.
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细粒棘球蚴抗原B对体外培养人外周血单个核细胞中Th17细胞的影响
目的 观察细粒棘球蚴抗原B(AgB)对体外培养人外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+ IL-17+T细胞(Th17)细胞的影响.方法 Ficoll法分离健康人群外周血中的PBMC并接种于24孔培养板,分为阴性对照组、低剂量抗原B(2 mg/L)实验组和高剂量抗原B实验组(5 mg/L)进行培养.分别在培养96、120和144 h后取样,通过流式细胞术(FCM)检测培养液中Th17细胞的阳性表达率.所得结果采用两组配对t检验.结果 Th17细胞的阳性表达率在低剂量和高剂量抗原B干预培养96 h后分别为0.433±0.115和0.500±0.265,较阴性对照组1.067±0.473均降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而在120 h和144h虽有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 细粒棘球蚴抗原B对健康人外周血单个核细胞中Th17细胞的表达具有抑制作用,它可能与细粒棘球蚴所致免疫逃避机制有关.
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细粒棘球绦虫抗原B8kDa亚单位在虫体发育过程中的阶段性表达研究
目的 研究细粒棘球绦虫抗原B (EgAgB) 8 kDa亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5) 在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原.方法 分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase XL (TaKaRa,Japan) 反转录成cDNA,根据EgAgB 5个亚单位(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)序列设计跨越内含子的基因特异性引物.基因表达差异应用SYBR Green I荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术进行定量分析,并用内参对照基因actin II来标准化定量结果.结果 荧光实时定量PCR结果分析,EgAgB8/1和EgAgB8/2在棘球蚴生发层大量表达(表达量为68.874和16.258),EgAgB8/3和EgAgB8/5在成虫阶段有大量表达(表达量分别为1 905.512和180.315),EgAgB8/4 在成虫、虫卵和原头蚴中的表达量分别为0.001、0.088和0.102,均较棘球蚴生发层表达量(3.576)低.结论 EgAgB 5个亚单位的基因表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异.EgAgB8/1 和EgAgB8/2 可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断佳候选目的 抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原.EgAgB 5个亚单位的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关,有待进一步研究.
