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金黄色葡萄球菌PGRP的原核表达及生物信息学分析
目的 构建金黄色葡萄球菌PGRP基因片段的原核表达,对表达产物进行生物信息学分析. 方法 根据GenBank中收录的金黄色葡萄自溶素(autolysin,AtlA)基因序列(AC:D17366),设计其中pgrp基因片段的特异性引物,并通过NCBI Blast,在收录的所有金黄色葡萄球菌菌株中对相应的基因序列进行保守性分析.提取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)的全基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增pgrp基因序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32a(+)/pgrp,通过IPTG诱导表达重组蛋白PGRP.利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1 server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0 Server)分析rPGRP蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等生物学信息. 结果 成功构建重组质粒pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32a(+)/pgrp,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中金黄色葡萄自溶素AtlA基因序列(AC:D17366)的相似性为95.7％.获得的rPGRP分子质量单位约为20×103.生物信息学方法分析rPGRP片段由155个氨基酸组成,分子质量单位(Mr)为17.440 95×103,理论pI为5.45,是一种稳定的亲水性蛋白,该蛋白无信号肽且为非跨膜蛋白,属于胞外蛋白. 结论 成功构建金黄色葡萄球菌自溶素酰胺酶PGRP的原核表达系统.获得的约20×103肽聚糖识别蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白.
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革兰阴性菌结合蛋白(Toll/GNBPs)和肽聚糖识别蛋白(PGRPs)在无脊椎动物先天免疫应答中的作用
由于无脊椎动物没有专一的特异性免疫系统,所以先天免疫系统是其抵御外来病原入侵的唯一方式,无脊椎动物的先天免疫系统包括细胞和体液防卫机制,这2种机制可被模式识别受体(PRRs)分子所触发,PRRs可与微生物表面特异的物质识别并结合,通过结合,这些PRRs通过包囊和噬菌作用直接杀死微生物,或者通过丝氨酸蛋白酶级联反应和细胞内免疫信号途径间接引发不同的防御反应以抵御病原微生物.革兰阴性菌结合蛋白(GNBPs)和肽聚糖识别蛋白(PGRPs)作为无脊椎动物先天免疫系统中的一类重要模式识别受体,在识别微生物病原并引发一系列级联反应做出免疫应答过程中起重要作用.本文主要对GNBPs和PGRPs在无脊椎动物中的研究进展及其在先天免疫应答过程中的作用机制进行综述.
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哺乳动物中肽聚糖识别蛋白的研究进展
目的 综述哺乳动物肽聚糖识别蛋白(petidoglycan recognition proteins,PGRPs)的各方面特征性质及近年来研究的新进展.方法 根据已报道的30篇相关文献,按照PGRPs的发现、蛋白结构、功能及其与疾病的关系四个方面进行了总结和分类综述.结果 哺乳动物肽聚糖识别蛋白家族含有4个成员,其C末端都至少含有一个约165个氨基酸残基的与噬菌体和2型细菌酰胺酶同源的PGRP结构域.PGRPs广泛分布于生物体的各个组织和器官.目前已知的PGRPs能够识别细菌、直接杀死革兰阳性菌和革兰阴性菌和具有酰胺酶活力.并且,PGRPs还跟炎症性疾病、帕金森、亚临床动脉粥样硬化等疾病相关.结论 肽聚糖识别蛋白是一种重要的从无脊椎动物到脊椎动物高度保守的模式识别受体.
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软体动物模式识别受体研究进展
软体动物建立了复杂的固有免疫系统以对抗病原生物体的入侵.模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是软体动物启动固有免疫应答的首要分子,其种类甚多,如Toll样受体、C型凝集素及半乳凝素、脂多糖葡聚糖结合蛋白、补体相关分子和肽聚糖识别蛋白等.PRRs具有多种生物学特性,在软体动物的固有免疫中发挥着重要作用.本文对软体动物PRRs的研究进展作一综述.
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肽聚糖识别蛋白
天然免疫系统通过一系列高度保守的模式识别受体识别病原体相关分子模式.肽聚糖识别蛋白家族是重要的模式识别受体,从昆虫到人类均高度保守,可识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌,在天然免疫和获得性免疫应答中发挥重要的识别和调节功能.
