首页 > 文献资料
-
siRNA腺病毒抑制Survivin基因表达诱导肝癌细胞凋亡
目的 为改进质粒siRNA载体的不足,建立siRNA的病毒性载体系统,并探讨凋亡抑制因子Survivin基因在肝癌细胞中的作用.方法 通过已建立的Survivin质粒siRNA,构建Survivin的腺病毒siRNA载体系统,筛选重组病毒并感染肝癌细胞HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测Survivin基因表达变化,用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡.结果 成功构建Survivin基因的腺病毒siRNA载体及重组腺病毒,感染肝癌细胞明显抑制Survivin蛋白表达,抑制率66.32%;降低Survivin 基因的mRNA转录水平达72.04%;应用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡明显增加.结论 腺病毒siRNA载体系统可作为抑制目的 基因,进而研究其功能和作用的技术平台,并为其他基因的相关研究打下基础;抑制Survivin基因表达可诱导肿瘤细胞HepG2的凋亡,为今后腺病毒siRNA载体应用于肿瘤动物实验和肿瘤基因治疗提供实验资料.
-
siRNA腺病毒体内抑制Survivin基因表达诱导裸鼠肿瘤细胞凋亡的研究
目的 利用腺病毒siRNA载体介导的RNA干扰技术,在免疫缺陷鼠肝癌肿瘤动物模型中通过靶向沉默细胞凋亡因子Survivin的表达,探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用.方法 利用肝癌细胞株HepG2构建裸鼠肝癌肿瘤细胞动物模型,并按照病毒注射剂量分组,将已构建的Survivin-siRNA重组腺病毒注射入裸鼠肿瘤内,观察肿瘤生长状况并绘制肿瘤生长曲线,利用TUNEL反应测定肿瘤组织细胞内DNA的片段化观察细胞凋亡.结果 注射AdsiRNA-Survivin高、低剂量组肿瘤生长明显受到抑制,且抑制程度与注射的腺病毒浓度呈正相关;TUNEL实验表明注射AdsiRNA-Survivin高、低剂量组的肿瘤组织标本可见大量细胞核呈黄褐色、核质浓缩、细胞形态不规则的凋亡细胞.高剂量组、低剂量组、AdsiRNA-U6组、PBS组凋亡细胞数依次减少.结论 腺病毒siRNA载体系统可应用于活体动物试验中;AdsiRNA-Survivin对裸鼠人肝癌移植瘤有明显抑制作用,与肿瘤感染数或浓度成正比,且能促进人肝癌肿瘤细胞的凋亡.
