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2B基因文献资料
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EV71病毒2B基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制细胞凋亡
目的 探讨EV71病毒2B基因对EV71病毒诱导细胞凋亡的影响.方法 设计、合成靶向EV71病毒2B基因的siRNA,PCR验证干扰效果,筛选优siRNA浓度;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)转染后接种EV71病毒,通过普通显微镜下细胞形态观察、细胞存活率测定、培养上清病毒滴度测定验证2B基因siRNA对病毒感染的抑制作用;通过流式细胞术检测细胞周期变化;通过Western blotting检测Caspase 3等凋亡蛋白,探讨凋亡通路上关键蛋白的改变.结果 靶向EV71病毒2B基因的siRNA在100 nM浓度下具有优的基因沉默效果,EV71病毒感染前经转染处理的细胞存活率增高、上清病毒滴度降低、细胞周期阻滞减轻、凋亡蛋白Caspase 3激活减少(均P<0.05).结论 EV71病毒2B基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制病毒诱导的细胞凋亡.
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口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达
目的 构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达.方法 RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定.将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平.结果 经双酶切及PCR鉴定,目的 基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致.荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录.结论 已成功构建了FMDV 2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK一21细胞中获得了表达.
