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上调分子伴侣 mortalin 经由 MAPK-ERK 信号转导通路促进卵巢癌细胞增殖
目的：通过获得稳定表达mortalin的卵巢癌细胞株（A2780、A2780/cis），检测mortalin与卵巢癌细胞增殖的关系及可能机制。方法 CCK-8实验检测mortalin过表达组和对照组细胞增殖的变化；通过流式细胞术检测mortalin过表达对卵巢癌细胞周期的影响；Western blotting检测mortalin上调表达后，卵巢癌细胞中MAPK/ERK和JNK/SAPK信号通路蛋白的变化。结果 Mortalin 上调表达促进卵巢癌细胞 A2780和 A2780/cis 的增殖。Mortalin通过加快卵巢癌细胞由G1期快速过渡到G2/M期，促进细胞增殖，且MAPK/ERK信号通路参与该过程。结论 Mortalin上调表达促进了卵巢癌细胞的增殖，与其对MAPK-ERK信号通路的激活有关。
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缺氧环境下降钙素对破骨细胞增殖和凋亡的影响
目的 阐明缺氧环境下,降钙素调控破骨细胞增殖和凋亡的能力,并探讨其分子生物学机制.方法 在细胞缺氧模型环境下,建立缺氧对照组、降钙素组和p38抑制剂组.每组均利用CCK-8实验检测细胞增殖吸光度(OD值),Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测细胞凋亡情况,ELISA检测各组破骨细胞中p-Erk/Erk蛋白的表达.结果 正常对照组、缺氧对照组、降钙素组破骨细胞的OD值逐渐降低,凋亡率逐渐提高,p-Erk/Erk蛋白表达逐渐降低.p38抑制剂组破骨细胞增殖的OD值和凋亡率呈现相反趋势.结论 降钙素激活p38-MAPK-Erk信号通路抑制破骨细胞增殖,促进细胞凋亡.
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GPR30与AMF正向反馈调控促进子宫内膜癌进展的机制研究
目的:探讨子宫内膜癌(EC)中G蛋白偶联跨膜受体30(GPR30)与自分泌移动因子(AMF)正向反馈的调控机制.方法:免疫组化和免疫荧光法检测EC患者子宫内膜组织中AMF和GPR30的表达情况.Western blot法检测雌激素及GPR30特异激动剂G1对RL95-2细胞、KLE细胞及SPEC-2细胞AMF分泌的调控.使用shRNA干扰、qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光验证雌激素膜受体GPR30介导的AMF表达和分泌.qRT-PCR和Western blot法检测AMF刺激前后细胞GPR30的表达情况.使用信号通路蛋白芯片筛选AMF表达下调前后G蛋白相关信号通路变化,并通过Western blot验证.结果:AMF和GPR30在内膜癌组织中呈高表达,且两者表达水平呈正相关.雌激素刺激后,子宫内膜癌细胞分泌的AMF均显著增多,且与雌激素浓度呈正相关.GPR30特异激动剂G1上调了AMF的分泌.干扰GPR30表达致AMF的表达和分泌下降.外源性AMF刺激可上调GPR30 mRNA及蛋白水平.AMF表达下调后MAPK-ERK信号通路明显受到抑制,同时阻断MAPK-ERK信号通路可消减AMF对GPR30的上调作用.结论:内膜癌细胞中雌激素通过GPR30能显著上调AMF的表达及分泌;AMF可激活MAPK信号通路正向反馈调控GPR30表达.E2-GPR30-AMF轴为内膜癌雌激素致瘤理论提供重要补充,进而为寻找能阻断雌激素作用靶点关键因子的分子靶向治疗提供可靠的实验依据.
