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神经生长因子诱导神经干细胞定向迁移
目的探讨体外培养环境中神经生长因子(NGF)诱导神经干细胞定向迁移的特性. 方法运用半固体培养法结合单细胞克隆技术动态观察神经干细胞迁移情况,采用免疫细胞化学技术鉴定迁移细胞的类别. 结果在具有NGF浓度梯度的培养体系中,克隆细胞迁向高浓度NGF区域.在NGF源附近,这种定向迁移更加明显.迁移细胞随时间的延长表达神经元特异性抗原.在含均匀浓度NGF的培养基中细胞从球团向四周短距离的扩散,无方向性.所有迁出细胞随时间的延长进一步分化成熟,干细胞比率下降. 结论 NGF有诱导神经干细胞定向迁移的作用.
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脐血干/祖细胞的生物学特点
脐血是一重要的造血干/祖细胞（HSPC）来源,可用作临床干细胞移植,目前有关脐血的研究主要集中于HSPC的比例、细胞亚群的划分、对造血因子刺激的反应能力、增殖/扩增潜能的控制及HSPC体外扩增的条件等。研究表明，脐血和成人骨髓来源的HSPC功能有显著不同，我们力图在细胞和分子水平论述其生物学特点。1 脐血中HSPC的比例研究表明，1?ml脐血中大约有原始红系祖细胞(BFU-E)8?000个,髓系祖细胞(CFU-GM)13?000～24?000,多能祖细胞（CFU-GEMM)1? 000～10?000。由于培养条件的不同，各家报道有一定差异，特别是CFU-GM和CFU-GEMM两项指标差异更大。事实上，许多研究证实，在半固体培养中加入干细胞因子(SCF)会明显提高CFU-GM、CFU-GEMM检出率。脐血和骨髓中HSPC含量相似，但HSPC亚群比例尚有很大差异，主要表现在以下几个方面：①脐血中BFU-E水平高于骨髓；②脐血和骨髓中CFU-GM水平相似，但脐血中更幼稚的双能粒-单核祖细胞含量明显高于骨髓；③脐血中不成熟的巨核祖细胞集落（>200个细胞）较多；④脐血中CFU-GEMM数比骨髓高4倍。脐血中高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）比骨髓大约高8倍；体外检测中接近人干细胞的长期培养启始细胞（LTC-IC）的比例二者相似，骨髓和脐血LTC-IC培养5周和8周产生的鹅卵石区分别为1∶13?314和1∶33?949，1∶12?506和1∶34?546,从这些结果可推测脐血中干细胞数与骨髓相当。
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半固体培养及快速筛选策略在恶性疟原虫相关单克隆抗体制备中的应用
目的 以恶性疟原虫富组氨酸蛋白单克隆抗体的制备为例,分析半固体培养技术和筛选鉴定策略在单克隆抗体制备中的关键作用. 方法 用恶性疟原虫富组氨酸蛋白重组抗原(rePf-HRP)免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP20细胞融合,于含2％甲基纤维素的半固体培养基中培养,使融合细胞呈集落化生长;将单细胞集落转移至液体培养基中培养;建立不同的抗原和ELISA检测方法对培养上清进行筛选;经粗筛和特异性筛选为阳性的细胞株置液氮保存.冻存复苏后,对稳定分泌特异性抗体的单抗细胞株进一步分析腹水产量、抗体亚类、抗体识别位点、抗体的亲和常数及配对检测抗原的灵敏度. 结果 细胞融合后经半固体培养获得的单克隆细胞株为915个,粗筛的克隆阳性率为37.8％ (346/915);特异性筛选的克隆阳性率仅占粗筛检测阳性的2.6％ (9/346),占总克隆数的0.98％ (9/915),经液氮冻存复苏鉴定,获得了8株稳定分泌特异性抗体的单抗细胞株;经腹水产量、抗体亚类、抗体识别位点、抗体的亲和常数及配对检测抗原的灵敏度等检测,终获得了2株可用于快速检测恶性疟患者血液样本中特异性循环抗原的配对抗体. 结论 半固体培养保证了可供筛选的融合细胞的数量,粗筛和特异性筛选结合的策略保证了快速筛选出特异性克隆.
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环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血一例报告
1 病历介绍 患者男性，24岁，农民。因头昏、乏力、牙龈出血1月余于1998年2月4日收入本院血液科。患者于1998年1月初始无明显诱因下牙龈、口腔粘膜出血，皮肤散在出血点、瘀斑，当时在上海市第六人民医院，经骨髓、外周血象等检查诊断为重型再生障碍性贫血(SAA-I)，骨髓象：有核细胞增生V级，非造血细胞达0．95。经输血、血小板悬液输注、抗炎、止血等对症支持治疗，出血、感染等得到控制，但回家后头昏、乏力进行性加重，入院前一周高热，对症治疗无效而入本院。患者起病前在制鞋厂工作了8个月。体检：重度贫血外观，双下肢皮肤见散在出血点，心肺检查无异常，肝、脾、浅表淋巴结不大。血象：wBC0．6×109／L，Hb 62 g／L，BPC 6×109／L，RBC 2．03×1012／L，RC0．02。骨髓象：有核细胞增生V级，非造血细胞0．78。诊断：SAA-I。骨髓体外甲基纤维素半固体培养GM-CFU分型提示为细胞抑制型(即患者细胞与正常人细胞共同培养受抑制)，并对环孢霉素A(CSA)敏
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有血清和无血清培养基中BFU-E的比较研究
目的:比较有血清和无血清培养基中BFU -E生长情况.方法:分离脐血中单个核细胞(MNC),接种于有血清和无血清甲基纤维素半固体培养基中生长14～18 d,观察BFU-E,并染色鉴定.结果:有血清中约在培养14～16 d集落数达高峰,BFU-E为(70.3±50.5)/105MNC ,大部分BFU-E的细胞为300～500个,小部分集落细胞超过1 000个;无血清培养16～18 d集落数达高峰,BFU-E为(36.5 ±18.2)/105MNC,集落形态与有血清基本相似,但集落体积普遍较小,细胞数约为200～300左右.结论:无血清培养基中生长时BFU-E数目及BFU-E平均细胞数均较有血清培养中少,血清中含有促进BFU-E生长与分化的因子.
