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α-Synuclein在阿尔茨海默病中作用的研究进展
1993年,Ueda在阿尔茨海默病老年斑中发现NAC以来,阿尔茨海默病老年斑中的非Aβ成分以及其前体α-Synuclein在阿尔茨海默病中的作用越来越成为研究者们关注的热点之一.α-Synuclein基因位于4q21.3-q22上,蛋白由140个氨基酸组成,在脑内有高度表达.在生理情况下,α-Synuclein可能参与突触功能和神经可塑性,在造血细胞分化过程中也有一定的功能.在阿尔茨海默病中,α-Synuclein代谢的改变可能通过促进Aβ聚积以及其本身的自聚作用而促进老年斑的形成,从而在阿尔茨海默病中起一定的作用.
关键词： α-synuclein 阿尔茨海默病 -
乳胞素诱导大鼠致帕金森病的实验研究
目的 应用蛋白酶体抑制剂乳胞素(lactacystin)构建帕金森病(PD)模型,从泛素-蛋白酶体功能角度探讨PD的发病机制.方法 应用立体定向注射法在大鼠黑质致密部上方注射乳胞素;观察大鼠行为学改变及光镜下中脑组织学改变;免疫组化染色观察黑质细胞α-synuclein表达和酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数.结果 注射乳胞素后大鼠逐渐出现运动迟缓、少动、震颤等行为学异常,阿朴吗啡诱导出向健侧旋转行为;3 w后黑质部TH阳性细胞减少,部分黑质细胞内出现α-synuclein免疫反应晕强阳性的Lewy小体.结论 乳胞素对多巴胺能神经元有毒性作用,可导致蛋白聚集、包涵体形成,应用乳胞素可成功构建PD模型;蛋白酶体功能异常可能在PD的发病中发挥重要作用.
关键词： 乳胞素 帕金森病 蛋白酶体 α-synuclein -
血浆α-synuclein水平与帕金森病相关性的Meta分析
目的 综合评价人血浆α-synuclein表达水平与帕金森病(PD)的相关性.方法 利用Meta分析方法对国内外公开发表以及本课题组尚未发表的关于人血浆α-synuclein水平与帕金森病关系的研究文献进行综合的定量分析.结果 共收集到符合纳入标准的文献4篇,累计病例共444例,累计对照共252人；Meta分析结果显示,总体效应检验Z=0.57,P=0.57,标准化均数差(S-x)为0.26,95％CI=-0.64 ～1.17,与无效线相交；漏斗图分布呈倒漏斗形,近似对称,发表偏倚较小；敏感性分析结果显示,在排除权重较大和较小的研究后,合并95％CI仍与无效线相交.结论 血浆α-synuclein表达水平与帕金森病相关性无统计学意义,但该结论尚需大样本研究证实.
关键词： α-synuclein 帕金森病 Meta分析 -
脑脊液中α－synuclein与帕金森病相关性的Meta分析
目的：综合评价人脑脊液α－synuclein（α－syn）表达水平与帕金森病（PD）的相关性。方法利用 Meta 分析方法对国内外公开发表的关于人脑脊液α－syn 水平与 PD 相关性的研究文献进行综合定量分析。结果共收集到符合纳入标准的文献16篇，累计病例共1337例，对照共1045例；Meta 分析结果显示，PD 患者脑脊液总α－syn 表达水平显著低于对照组（总体效应检验 Z ＝5．66，P＜0．001，合并效应值为－0．89，95％CI ＝－1．20～－0．58，位于无效竖线左侧）；PD 患者脑脊液α－syn 寡聚体表达水平显著高于对照组（总体效应检验 Z ＝6．20，P＜0．001，合并效应值为0．73，95％CI＝0．50～0．96，位于无效竖线右侧）；PD 患者脑脊液α－syn 寡聚体／总α－syn 表达水平显著高于对照组（总体效应检验 Z ＝4．51，P＜0．001，合并效应值为1．22，95％CI ＝0．69～1．75，位于无效竖线右侧）；漏斗图分布呈倒漏斗形，近似对称，发表偏倚较小；敏感性分析显示结果可靠。结论脑脊液总α－syn、α－syn 寡聚体、α－syn 寡聚体／总α－syn 表达水平与 PD 密切相关，脑脊液α－syn 寡聚体、α－syn 寡聚体／总α－syn 的变化更适于作为 PD 的诊断标记。
关键词： α-synuclein 寡聚体 帕金森病 脑脊液 -
Numb蛋白对α-synuclein蛋白寡泛素化水平的调控
目的 探索Numb蛋白对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)寡泛素化水平的调控.方法 分别将EGFP-N1或EGFP-Numb与HA-α-syn共同转染SH-SY5Y细胞；采用细胞免疫荧光法检测α-syn蛋白和Numb蛋白的亚细胞共定位；使用免疫共沉淀的方法检测Numb蛋白与α-syn蛋白的相互结合；利用Western blot检测Numb蛋白对α-syn蛋白寡泛素水平的调控；在MPP+细胞模型中利用细胞免疫荧光检测Numb对α-syn包涵体形成的影响.结果 Numb与α-syn在细胞质中存在亚细胞共定位；Numb蛋白上调α-syn寡泛素化水平；Numb蛋白通过上调α-syn寡泛素水平促进MPP+诱导α-syn阳性包涵体形成.结论 Numb蛋白上调α-syn蛋白寡泛素水平并促进α-syn包涵体形成.
关键词： α-synuclein Numb 寡泛素化 包涵体 -
PSI诱导PC12细胞胞浆内胞核旁嗜酸性包涵体的形成及其演变过程
目的 研究蛋白酶体抑制剂PSI诱导PC12细胞胞浆内嗜酸性包涵体的形成及演变过程.方法 取进入对数生长期的PC12细胞,孵育24h后,加入PSI(终浓度10μmol/L),分别于给药后3、6、9、12、24、48、72、96、120 h取出细胞并甩片固定,行HE染色及α-synuclein免疫组织化学染色,光镜下观察形态变化.结果 HE染色:PSI作用6 h后,PC12细胞胞浆呈现嗜伊红染色,胞体变大;至12 h可见明显的嗜伊红聚集的核心;24h后,几乎所有的细胞都形成了核旁嗜伊红球状包涵体;其后,胞核及胞浆逐渐缺失,于120 h仅余聚集的嗜伊红球状包涵体.免疫组化染色:PSI作用3 h后,可见到散在于整个胞浆的α-synuclein免疫反应阳性颗粒;6h后,细胞明显增大,胞浆中颗粒增多;12 h后,颗粒聚集更加明显,形成明显的聚集中心;24 h后,几乎所有的细胞都形成了α-synuclein免疫反应阳性的球状包涵体;随时间延长,胞核及胞浆逐渐缺失,至120 h仅见固缩的α-synuclein免疫反应阳性球状包涵体.结论 PSI作用于PC12细胞,早期出现散在于胞浆中的嗜酸性和α-synuclein免疫反应阳性的点状颗粒,然后这些颗粒进一步在核旁聚集,形成聚集中心,后形成固缩的包涵体,细胞外包涵体可独立存在.这种包涵体形成和演变过程与以人类PD为代表的神经变性疾病中的包涵体非常相似,可以作为研究包涵体相关问题的有力工具.
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帕金森病细胞模型的建立及鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用
目的:建立帕金森病细胞模型,研究鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用及机制.方法:PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元,加入不同浓度鱼藤酮(0、10、25、50、75和100 nmol·L-1),观察细胞形态改变;鱼藤酮处理PC12细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活性;免疫组化和免疫荧光法观察α-synuclein 在胞内聚集情况;AO/EB双染检测细胞凋亡.结果:神经生长因子(NGF)诱导后PC12细胞形状不规则,突起增多变长,细胞间连接增多;染毒后细胞突起结构逐渐消失,细胞体积变小、形态变圆.50 nmol·L-1鱼藤酮作用24 h后PC12细胞活力开始低于对照组(P＜0.05),随着浓度增大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性(P＜0.01);随着作用时间延长,细胞活力亦逐渐下降,不同时间组间比较差异有显著性(P＜0.01).免疫组化结果显示,胞浆中出现棕色的类圆形α-synuclein染色阳性颗粒;免疫荧光显示,胞浆中有α-synuclein标记的强绿色荧光的蛋白聚集.染毒细胞逐渐呈现出早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞状态.结论:鱼藤酮对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成类包涵体样蛋白聚集并诱导细胞凋亡.α-synuclein 代谢异常及细胞凋亡可能在鱼藤酮所致的帕金森病发病机制中发挥重要作用.
关键词： 鱼藤酮 PC12细胞 α-synuclein 细胞凋亡 帕金森病 -
α-synuclein在体外培养SH-SY5Y细胞中过表达致自体吞噬
目的:观察α-synuclein转基因细胞内α-synuclein过表达对细胞超微结构的影响.方法:Lipofectamine法转染SH-SY5Y细胞,用G418对转基因细胞进行筛选,免疫荧光细胞化学检测α-synuclein表达,电子显微镜观察转基因细胞超微结构的改变.结果:转基因细胞内出现大小不等、边界明显的自体吞噬体并伴有线粒体结构紊乱.结论:α-synuclein过表达可致细胞出现自体吞噬现象.
关键词： α-synuclein 过表达 SH-SY5Y细胞 体外研究 自体吞噬 -
Lactacystin对大鼠纹状体DAT和VMAT2蛋白表达的影响
目的:探讨蛋白酶体抑制剂lactacystin对大鼠纹状体多巴胺转运体(DAT)和囊泡单胺转运体2(VMAT2)蛋白表达的影响.方法:在大鼠单侧黑质致密部立体定向分别注射lactacystin 0.2、2、8 μg,对照组注射等量的生理盐水.观察大鼠自主行为和阿扑吗啡诱导旋转行为的变化;应用免疫组化观察黑质细胞α-synuclein和纹状体DAT和VMAT2蛋白表达.结果:注射lactacystin 0.2 μg组未见明显异常;2 μg组和8 μg组出现进行性的运动迟缓、少动、震颤、头向健侧倾斜;注射阿扑吗啡后,8 μg组大鼠出现向健侧旋转运动.随着lactacystin剂量的增加,2 μg组和8 μg组黑质细胞α-synuclein的表达分别较对照组高出57%(P＜0.01)和122%(P＜0.001);纹状体DAT和VMAT2的表达分别较对照组减少了40%(P＜0.01)、85%(P＜0.001)和50%(P＜0.01)和88%(P＜0.001);DAT和VMAT2的比值分别较对照组高出了18%和32%.结论:Lactacystin可能通过抑制DAT和VMAT2的表达导致黑质细胞变性坏死及帕金森病的发生.
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Lactacystin对酪氨酸羟化酶基因和蛋白表达的影响
目的:探讨lactacystin对酪氨酸羟化酶(TH)基因及蛋白表达的影响.方法:在大鼠单侧黑质致密部(SNc)立体定向注射蛋白酶体抑制剂lactacystin 0.2、2、8 μg抑制α-synuclein的降解,对照组注射等量生理盐水,观察大鼠自主行为和阿扑吗啡诱导的旋转行为变化;应用免疫组化观察黑质细胞α-synuclein和TH蛋白表达;采用RT-PCR方法测定黑质细胞TH mRNA的表达.结果:注射lactacystin 0.2 μg组未见异常;2和8 μg 组大鼠出现进行性的运动迟缓、少动、头向对侧倾斜、震颤,但后者更加明显并出现阿扑吗啡诱导的向对侧旋转运动;给药后3周注射lactacystin 2 和8 μg组大鼠黑质细胞α-synuclein表达分别较对照组高出56.71%(P<0.01)和122.16%(P<0.001);部分细胞胞质内出现α-synuclein免疫反应呈强阳性的Lewy小体;TH mRNA和蛋白的表达分别较对照组减少了63.34%(P<0.001)、60.55%(P<0.05)和81.95%(P<0.001)、89.53%(P<0.01).结论:lactacystin对中脑黑质细胞TH基因及蛋白表达均有显著的抑制作用,参与了lactacystin所致的帕金森病发病机制.
关键词： lactacystin 酪氨酸羟化酶 α-synuclein -
α-synuclein与帕金森病
α-synuclein是路易小体的主要成分,可能通过破坏多巴胺存储与释放、增加氧化应激等机制,在多巴胺神经元变性中起作用.
关键词： α-synuclein Lewy小体 帕金森病 -
帕金森病发病机制研究进展:α-synuclein与氧化应激
帕金森病(PD)是一种常见的老年神经变性疾病,它的发病机制与遗传因素和环境因素共同作用有关,但其内在的联系尚不十分清楚.α-synuclein可能起到联系基因和环境因素在PD中的发病机制的作用,而多巴胺导致的氧化应激则可能是神经变性的共同途径.本文就α-synuclein和氧化应激在PD发病机制中作用等方面的研究作一综述.
关键词： 帕金森病 发病机制 α-synuclein 氧化应激 -
模拟帕金森病的表达人α-synucleinA53T转基因小鼠的早期嗅觉功能观察
目的 通过对表达人α-synucleinA53T的转基因小鼠嗅觉功能的检测和比较,确立一个可供研究帕金森病早期嗅觉障碍发病机制的模型.方法 选取不同月龄的表达人α-synucleinA53T的转基因(TC)小鼠与同窝野生型(WT)对照小鼠；转棒试验评估10月龄TG小鼠随意运动功能足否发生变化;DAB法观察10月龄小鼠脑黑质多巴胺能神经元,进一步验证小鼠是否发生运动功能改变.通过气味鉴别及适应试验,观察小鼠对已熟悉的同种气味的短期记忆能力及适应能力,判断小鼠对陌生气味的辨别能力；通过长间隔记忆试验,检测小鼠对已经暴露过的气味在一定间隔时间后再次暴露的记忆能力；通过隐藏颗粒试验,检测小鼠对食物气味的感知能力,反映嗅觉阈值的水平.结果 转棒试验和多巴胺能神经元观察结果均显示10月龄TG小鼠的随意运动功能尚未发生改变.6月龄TG小鼠出现对气味辨别能力的下降,对新旧两种气味的识别时间比较,差异无统计学意义(P=0.120)；10月龄TG小鼠表现出更明显的气味识别缺陷(P=0.295).6月龄TG小鼠寻找到食物的时限长于WT小鼠(P=0.015).各年龄段小鼠短期记忆及适应能力均正常；但9月龄TG小鼠表现出长期(两次试验间隔时间60、80、100 min)记忆能力减退.结论 表达人α-synuclein A53T的转基因小鼠在运动功能改变之前出现嗅觉障碍,表现在气味辨别、记忆、感知能力等方面,能够很好地模拟帕金森病早期嗅觉障碍的表现.
关键词： 帕金森病 嗅觉障碍 动物模型 α-synuclein -
G209A突变型α-synuclein基因真核表达质粒的构建
目的构建人G209A突变型α-synuclein基因真核表达质粒.方法采用RT-PCR从人胚脑组织中扩增人α-synuclein基因,再采用SOE法定点突变,构建G209A突变型α-synuclein基因真核表达质粒.结果酶切和DNA测序证实,突变型(G209A)α-synuclein基因除第209位碱基G被A替代以外,其余序列与野生型完全一致.结论成功构建G209A突变型α-synuclein基因真核表达质粒,为研究帕金森病发病机制奠定基础.
关键词： α-synuclein 基因 定点突变 -
野生型和G88C突变型α-synuclein基因真核表达质粒构建
目的构建人野生型和突变型(G88C)α-synuclein基因真核表达载体.方法采用逆转录-聚合酶链反应从人胚脑组织中扩增人α-synuclein基因,克隆至pMD18-T中.采用SOE法定点突变获得G88C突变型α-synuclein基因,并将其克隆至pMD18-T中.酶切鉴定后将野生型和突变型(G88C)α-synuclein基因亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1+中.结果酶切及DNA测序结果证实,野生型和突变型α-synuclein基因分别插入到pcDNA3.1+中,野生型α-synuclein基因序列与基因库(登录号L08850)完全一致,突变型(G88C)α-synuclein 基因除第88位碱基G被C替代以外,其余序列与野生型完全一致.结论构建野生型和G88C突变型α-synuclein基因真核表达质粒为研究人α-synuclein基因的功能及其突变体的致病机制奠定了基础.
关键词： α-synuclein 基因 定点突变 -
应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin建立有Lewy体的帕金森病大鼠模型
目的 建立符合帕金森病(PD)病理特征--黑质细胞有Lewy体的PD大鼠模型.方法 分别在大鼠一侧黑质致密部注射蛋白酶体抑制剂Lactacystin 8 mg(Lactacystin组)、等体积生理盐水(NS组)和6-羟基多巴胺(6-OHDA组)12 mg;观察大鼠自主行为和阿朴吗啡诱导的旋转行为;光镜下观察中脑组织学改变;应用免疫组化染色观察黑质细胞α-synuclein表达和酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数;测定纹状体区多巴胺和高香草酸含量.结果 NS组大鼠未见行为异常;Lactacystin组大鼠出现进行性的运动迟缓、少动、震颤、头向健侧倾斜,注射阿朴吗啡后出现向健侧旋转运动;给药后3周黑质部TH阳性细胞数较NS组减少了83.29%(P＜0.01),部分黑质细胞内出现α-synuclein免疫反应呈强阳性的Lewy体;纹状体多巴胺和高香草酸含量(154.82±37.17,98.66±18.81)较NS组明显减少(822.87±131.25,617.77±95.74)(均P＜0.01);6-OHDA组大鼠出现与Lactacystin组类似的行为变化,黑质细胞亦显著减少,但未见Lewy体.结论 利用蛋白酶体抑制剂Lactacystin阻碍α-synuclein的降解可以建立有Lewy体的PD大鼠模型.
关键词： lactacystin 蛋白酶体 α-synuclein Lewy体 -
α-Synuclein诱发的小胶质细胞激活在帕金森病发生发展叶的作用
帕金森病是一种进行性的神经退行性疾病,主要病理学特征是黑质致密部多巴胺能神经元死亡和胞质内出现以聚集化的α-Synuclein为主要成分的路易小体.在帕金森病发生发展过程中有以激活的小胶质细胞为主要特征的炎症反应发生,但是,此类炎症反应的具体机制目前还不清楚.近的一些研究表明,单体、聚集化、突变、硝化的α-Synuclein可以激活小胶质细胞,激活的小胶质细胞通过释放细胞毒性因子,终对多巴胺能神经元产生细胞毒性.该文尝试总结α-Synuclein诱发的小胶质细胞激活与帕金森病发生发展之间的关系,并探讨其可能的作用机制.
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稳定表达α-Synuclein4种选择性剪接异构体的PC12细胞对神经毒性剂MPP+的敏感性研究
目的 研究稳定表达α-synuclein 4种选择性剪接体的PC12细胞对神经毒性剂MPP+的敏感性.方法 PCR获得α-synuclein的4个选择性剪切体,克隆入pcDNA3.1载体,转染PC12细胞,经G418筛选获得稳定表达这4个剪切体的PC12细胞株,采用细胞毒的方法检测这4个稳定细胞株对神经毒性剂MPP+的敏感性.结果 同全长相比,去除外显子5的选择性剪切体α-synuclein114和α-synuclein98对神经毒性剂MPP+的敏感性升高,表现为细胞活力的降低.结论 去除外显子5的选择性剪切体α-synuclein114和α-synuclein98对神经毒性剂MPP+的敏感性明显升高.抑制外显子5的选择性剪切,从而抑制选择性剪切异构体α-synuclein114和α-synuclein98的产生可能是阻止神经元退行性丢失的一种策略.
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芍药苷对MPP~+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用
目的 研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对MPP~+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用,并观察PF对α-synuclein(α-syn) mRNA表达水平的影响.方法 离体培养SD大鼠黑质器官型脑片,培养的d 10给予不同浓度的MPP~+(0.1、0.5、1.0 mmol·L~(-1))处理24 h,并在0.5 mmol·L~(-1) MPP~+处理的基础上,给予1 μmol·L~(-1)或10 μmol·L~(-1)的PF进行干预.免疫组化法计数黑质致密部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数,定量RT-PCR法检测α-syn mRNA的表达丰度.结果 MPP~+(0.1、0.5、1.0 mmol·L~(-1))处理导致黑质致密部TH+细胞数较正常对照组减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MPP~+(0.5 mmol·L~(-1))使α-syn mRNA的表达水平明显升高(P<0.01).PF(10 μmol·L~(-1))有效增加了TH+细胞的数量(P<0.01),并明显下调了α-syn mRNA的表达(P<0.05).结论 PF能有效拮抗MPP~+导致的多巴胺能神经元受损死亡,其机制可能与下调α-syn的表达有关.
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α-synuclein C端截短体的胞内分布
目的 研究α-synuclein的4种C端截短体胞内的表达分布情况.方法 PCR法获得α-synuclein的4个C端截短体基因片段,分别克隆入pEGFP-N1载体,并转染MN9D细胞、PC12细胞及SH-SY5Y细胞,于Confocal荧光显微镜下观察α-synuclein 4个C端截短体胞内的表达分布情况.结果 α-synuclein的不同C端截短体胞内分布明显不一致,表现为随着C端部分的增长,α-synuclein截短体向核分布的趋势增强.结论 α-synuclein的胞内定位与其C端密切相关,并且整个C端序列都可能在其核分布中发挥重要作用.
