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Flk-1+间充质干细胞和SP细胞参与肠道损伤修复的比较
目的 比较骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞生物学特征及参与肠道放射性损伤修复的潜能及机制.方法 流式细胞仪分析免疫表型;在肠道放射性损伤小鼠模型中,观察移植细胞的分布、分化及各组受体鼠照射后组织病理学改变及长期纤维化情况.结果 这两个干细胞亚群的免疫学表型存在很大的差异;在肠道放射性损伤模型中均能够快速归巢到损伤的肠道局部,参与肠道上皮细胞的损伤修复,减轻照射后引起的纤维化胶原沉积.SP细胞移植后主要分布在肠道上皮,而Flk-1+间充质干细胞除了分布在肠道上皮外,还参与肠道间质的修复.结论 骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞都能有效的参与肠道放射性损伤修复,但修复机制上有差异.
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从耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系分离和鉴定肺癌干细胞的研究
目的 从耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系中分离侧群细胞(SP)以观察其是否富含肺癌干细胞(CSCs)样细胞,以期为肺癌CSCs样细胞生物学研究和干预建立基础.方法 将A549/DDP细胞经过流式细胞术分选获得SP细胞并检测纯度,经过体外克隆形成试验检验其体外克隆形成能力.通过比较接种A549/DDP SP细胞和A549/DDP non-SP细胞的NOD/SCID鼠成瘤和肿瘤生长情况,观察其体内成瘤能力.结果 流式细胞分析发现A549/DDP细胞中存在10%~17%的SP细胞.分离获得的SP细胞纯度>95%(平均97%).SP细胞的体外克隆形成能力和non-SP细胞相比有统计学差异(克隆形成率的对数,即lgCFE:1.544±0.150 vs.0.301±0.082,P<0.05).接种A549/DDP SP细胞的NOD/SCID鼠的成瘤率较对照组存在明显差异.接种SP细胞的小鼠只需要5×103个SP细胞便足以成瘤,而接种non-SP细胞的小鼠却需要超过5×106个non-SP细胞才能在体内成瘤.A549/DDP SP成瘤能力是non-SP细胞成瘤能力的1000倍.结论 耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞系中分离的SP细胞比例高且富含肺癌CSCs样细胞,可以用于肺癌CSCs样细胞生物学和干预治疗的研究.
关键词： 肺肿瘤 肿瘤干细胞 SP细胞 耐顺铂肺腺癌细胞系A549/DDP -
SP细胞分选与肿瘤干细胞关系的研究进展
肿瘤干细胞已成为肿瘤研究的热点之一,但是由于缺乏特异的表面标记,肿瘤干细胞的分离纯化一直是亟待解决的难题.由于SP(side population)细胞富含干细胞样细胞,并且SP细胞具有较明确的表型标记和分离方法,近年来,通过流式细胞仪分选SP细胞的方法越来越多地应用在肿瘤干细胞的研究中.
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肠上皮干细胞分离培养方法研究进展
肠上皮干细胞是位于肠黏膜陷窝内的具有自我更新和增殖分化为成熟肠上皮细胞功能的细胞.近年来,肠上皮干细胞的研究越来越受到重视,通过分离SP细胞、培养隐窝器官样组织和利用组织工程等方法研究肠上皮干细胞的分裂、分化过程,加深了对肠上皮干细胞的生物学特征的了解.但肠上皮干细胞的分离、培养和鉴别等研究方法尚未取得突破性进展.
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胆囊癌与肿瘤干细胞关系的研究进展
胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤,其早期诊断率低,患者预后极差.目前关于胆囊癌的发病机制尚未阐明.近年来,关于肿瘤干细胞研究的不断深入,在胆囊癌中,新的研究证实胆囊癌GBCSD细胞系中分离出了SP细胞.同时,胆囊癌中存在CD133+细胞、CD44+细胞、CD133+ CD44+细胞,并具有克隆形成能力、增生能力、分化能力及成瘤能力.本文就以胆囊癌与肿瘤干细胞关系的研究进展进行综述.
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肿瘤干细胞的研究进展
肿瘤具有异质性的特征,随着研究的深入,越来越多的证据提示肿瘤组织中也存在少量具有干细胞性质的肿瘤干细胞,于是人们在此基础上提出了肿瘤干细胞学说,肿瘤干细胞已成为当今肿瘤研究领域的热点.目前,已经从白血病、脑肿瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤及前列腺癌等多种恶性肿瘤中初步分离鉴定出肿瘤干细胞.肿瘤干细胞学说的提出,使得靶向性杀伤肿瘤干细胞从而根治肿瘤成为可能.
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人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群细胞的耐药性研究
目的 研究人胆囊细胞系GBC-SD中侧群细胞(side population cells,SP)的耐药特性,并探讨其耐药机制.方法 利用流式细胞术分选SP、非SP细胞,采用MTT检测2种细胞亚群对5种化疗药物吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、表阿霉素、米托蒽醌的药物敏感性;利用流式细胞术检测吉西他滨处理的人胆囊癌细胞系GBC-SD中SP细胞比例的变化,并通过RT-PCR、Western印迹检测SP、非SP细胞亚群中ABCG2 mRNA和蛋白的表达.结果 吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、米托蒽醌以对胆囊癌细胞系GBC-SD的IC50浓度分别作用SP、非SP细胞亚群1 d后,SP细胞的增殖能力高于非SP细胞,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),而表阿霉素处理水平的两组间差异无统计学意义(P>0.05);人胆囊癌细胞系GBC-SD经过吉西他滨处理3周后,SP细胞的比例显著升高(8.02%±0.13%比0.62%±0.08%,P<0.05),且SP细胞明显高表达ABCG2基因.结论 人胆囊癌细胞系GBC-SD中SP细胞具有类似干细胞的耐药特性,耐药基因ABCG2高表达是其耐药的重要机制.
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膀胱癌干细胞样侧群细胞的分选与鉴定
目的 探索膀胱癌干细胞样侧群细胞(SP细胞)的分选方法,并分析其生物学特性.方法 以流式细胞术对DNA染料hoechst33342染色后的5种膀胱癌细胞株进行检测,分选其中的SP细胞及non-SP细胞.电子荧光显微镜下进行形态学观察,并再次经流式细胞仪分析验证;分析其裸鼠成瘤能力;MTT法分析丝裂霉素(0.05、0.10、0.50 mg/ml)对SP、non-SP及未分选细胞的抑制作用.结果 所检测的SCaBER、T24、EJ、5637、BIU87等5种膀胱癌细胞株中,仅膀胱鳞癌细胞株SCaBER中检测到sP细胞,分选出的SP细胞占SCaBER总细胞数的0.6%.电子荧光显微镜下,SP细胞体积较non-SP细胞小,SP细胞胞核蓝色荧光黯淡或消失.接种NOD/SCID鼠SP细胞成瘤率67%,显著高于non-SP细胞.0.05 mg/ml丝裂霉素对SP细胞的抑制率为(56.61±4.16)%,低于non-SP细胞(60.25±2.52)%及未分选细胞(61.42土2.33)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 所分选的SP细胞中可能含有大量干细胞样肿瘤细胞;膀胱癌SP细胞对化疗药物有一定耐药性.
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肝细胞癌侧群/非侧群细胞中miRNA-21表达差异的检测
目的 采用流式细胞仪优化Hoechst33342染料浓度,检测肝细胞癌(HCC) MHCC-97H细胞中侧群(SP)细胞与非侧群(NSP)细胞中微小RNA-21(miRNA-21)的表达情况.方法 常规制备MHCC-97H单细胞悬液,采用不同浓度(5、6、7、8、9、10、11、12 mg/L)的荧光染料Hoechst33342染色,以维拉帕米拮抗组为对照,优化适合的Hoechst33342染料浓度,通过流式细胞仪分离SP、NSP细胞;采用RT-PCR法检测SP、NSP细胞中miRNA-21的表达情况.结果 优化Hoechst33342浓度为10 mg/L,活细胞比例较高,是适染色的浓度,此时MHCC-97H中SP细胞比例为(8.4±0.7)％;从SP、NSP细胞中提取的总RNA纯度为1.8～2.0,其中没有DNA和蛋白质混杂;SP细胞的miRNA-21表达水平是NSP细胞的(7.30±0.78)倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 优化的Hoechst33342浓度可以提高SP细胞的纯度,同时miRNA-21表达可能与HCC干细胞分化有关.
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MCF-7异质性及肿瘤干细胞相关亚群初步研究
目的:探讨人乳腺癌细胞系MCF-7的异质性及其肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞或CD44+ CD24-/low细胞)的性质.方法:采用Percoll不连续密度梯度法分离MCF-7,流式细胞仪检测各亚群中SP和CD44+ CD24-/low细胞比例及各亚群细胞周期时相分布,各亚群细胞体外培养获得其生长曲线,平板克隆实验检测各亚群的增殖能力.结果:经Percoll分选MCF-7可形成A、B、C、D和E5个亚群.各亚群中SP细胞比例分别为1.43％、2.15％、6.43％、25.23％和2.09％,其中D亚群中SP细胞富集.细胞周期时相分布显示,D亚群中G0/G1静止期细胞比例高(P＜0.05),为80.58％.生长曲线显示D亚群生长速度快,以下依次为A亚群、B亚群、C亚群和E亚群.各亚群克隆形成率分别为(32.5±3.7)％、(41.3±4.8)％、(50.8±4.3)％和(68.2±3.5)％,其中D亚群具有高的克隆形成率(P＜0.05),而E亚群未形成明显的克隆性集落.但各亚群中均未检测到明显的CD44+ CD24-/low细胞.结论:乳腺癌细胞系MCF-7具有异质性特征,经Percoll分选MCF-7可形成5个异质性的亚群,其中D亚群富含肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞),但MCF-7在长期体外培养过程中,乳腺癌干细胞表面标志CD44+ CD24-/low可能已经改变.
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低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例影响及其与HIF-2α和ABCG2表达相关性的分析
目的:通过观察低氧对SGC7901细胞株SP细胞的影响及其与HIF-2α和ABCG2表达变化的关系,初步探讨低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:用氯化钴(CoCl2)创建低氧模型.Hoechst 33342染色法检测SP细胞比例,免疫荧光细胞化学法检测ABCG2在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2a和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:SP细胞比例为2.36％,低氧诱导后其比例逐渐增加,P＜0.05.ABCG2在SP细胞中的表达明显高于非SP细胞(P＜0.01),低氧诱导后在SP细胞和非SP细胞中的表达均增强(P值均＜0.01),且在SP细胞中的表达高于非SP细胞,P＜0.01.低氧诱导后HIF-2a、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA的表达较常氧组明显增强(P值均＜0.01),且HIF-2α与ABCG2蛋白表达呈高度正相关(n=4,r=0.893,P＜0.05).结论:低氧能促进SGC7901细胞株SP细胞比例的增加,其机制可能与低氧激活HIF-2α-ABCG2通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.
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PI3K/mTOR信号通路参与胰腺肿瘤干细胞样SP细胞生存增殖的调控
目的 分离鉴定胰腺癌中肿瘤干细胞样的侧群(SP)细胞亚群并探讨磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)信号通路对其生存与增殖的调控.方法 应用流式分析检测5个胰腺癌细胞系中SP细胞的含量.观察加入PI3K/mTOR)R信号通路特异性抑制剂LY294002或雷帕霉素培养后胰腺癌细胞PANC-1中SP细胞的含量变化.通过平板集落形成试验,NOD-SCID小鼠异种移植成瘤试验和移植瘤的SP再次分析评价PANC-1 SP细胞的自我更新和分化潜能.采用 MTT试验和集落形成试验检测LY294002或雷帕霉素对分选的SP细胞和非SP细胞的抑制作用.结果 除了BXPC-3,其他胰腺癌细胞系都存在维拉帕米敏感的SP细胞.SP细胞具有较高的集落形成能力(SP细胞:43.7%±3.1%,非SP细胞8.3%±1.6%,P=0.000)和成瘤能力(至少100倍于非sP细胞),并能够发生不对称分裂生成非SP细胞.加入LY294002或雷帕霉素培养后PANC-1中sP细胞的含量明显降低(LY294002,7.60%±0.27% vs 1.90%±0.22%,P=0.000;雷帕霉素,7.60%±0.27%vs 1.14%±0.20%,P=0.000).与非SP细胞相比,LY294002及雷帕霉素均优先抑制sP细胞.结论 SP细胞富集胰腺癌肿瘤干细胞.PI3K/mT0R信号通路参与对其生长增殖的调控,可能成为根治胰腺癌的治疗新靶点.
关键词： 胰腺肿瘤 肿瘤干细胞 SP细胞 Hoeehst 33342 信号通路 -
肿瘤干细胞与卵巢癌研究进展
近年肿瘤干细胞理论及其相关研究引起关注.该理论认为,肿瘤干细胞是恶性肿瘤发生、耐药,复发及转移的根源,并终导致恶性肿瘤靶向治疗失败,难以根治.卵巢癌治疗的大障碍是肿瘤细胞耐药性的产生,肿瘤干细胞的研究对解决卵巢癌等恶性肿瘤的高耐药、复发难题有重要意义.目前,卵巢癌干细胞已经成功分离鉴定,但此方面的研究尚处于开始阶段.从肿瘤干细胞角度对卵巢癌于细胞的性质及分离鉴定方法综述.
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姜黄素对A549细胞亚群SP和NON-SP的NF-kB、VEGF及Notch通路的影响
[目的]通过动物实验了解姜黄提取物-姜黄素抗肿瘤血管生成的具体作用机制.[方法]将40只BALB/C雄性裸小鼠分为4组,每组10只.分别为A组(SP亚群细胞姜黄素组)、B组(SP亚群细胞荷瘤对照组)、C组(NON-SP亚群细胞姜黄素组)、D组(NON-SP亚群细胞荷瘤对照组).A、B两组于实验前建立肺腺癌A549 SP细胞亚群荷瘤模型,C、D两组建立肺腺癌A549 NON-SP细胞亚群荷瘤模型,建立模型后观察16 d,于A组、C组小鼠腹腔注射姜黄素,隔天1次,B、D两组注射生理盐水.16 d后将小鼠称重后处死,剥离瘤块组织,比较各组瘤质量;免疫组化法检测肿瘤组织中血管生长因子(VEGF)、核因子-κB(NF-κB)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch1 mRNA含量.[结果]肺腺癌A549 SP细胞亚群荷瘤模型组小鼠瘤体与NON-SP细胞亚群荷瘤模型组小鼠相比体积较大;SP亚群细胞姜黄素组抑瘤作用及抗肿瘤血管生成优于NON-SP亚群细胞姜黄素组,两组相比差异具有统计学意义.[结论]姜黄素可以抑制肿瘤生长,考虑可能与其抑制NF-kB的表达,下调Notch1 mRNA含量,阻断Notch信号通路,抑制肿瘤组织中VEGF的表达有关.
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姜黄素对A549细胞亚群SP及NON-SP细胞凋亡的诱导作用
目的 探讨姜黄素对人肺腺癌A549细胞亚群SP及NON-SP生长的影响及其作用靶点.方法 从A549细胞中分选出SP及NON-SP细胞,通过软琼脂克隆形成实验及体外致瘤性对其进行鉴定.将SP及NON-SP细胞用不同浓度的姜黄素(10、20、30、40 μmol/L)处理,MTT法检测姜黄素对SP及NON-SP细胞生长的抑制作用；荧光定量PCR法检测细胞中survivin、caspase-3基因表达.结果 不同浓度的姜黄素对SP、NON-SP细胞的生长产生不同程度的抑制作用,浓度为30 μmol/L的时细胞生存率低,且与作用时间呈正相关,对SP细胞的抑制作用明显强于NON-SP细胞.姜黄素抑制survivin基因的表达,促进caspase-3基因的表达,其对SP细胞凋亡的诱导作用明显强于NON-SP细胞.结论 SP细胞的致瘤性高于NON-SP细胞.姜黄素主要通过抑制SP细胞的生长、下调survivin基因的表达和促进caspase-3基因的表达而产生诱导肿瘤细胞凋亡的作用.
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卵巢肿瘤干细胞研究进展
研究显示,卵巢肿瘤中存在少量具有自我更新和分化潜能的肿瘤于细胞,这些肿瘤干细胞具有耐药性,对现有的抗肿瘤治疗不敏感,尽管数量极低,却可能是卵巢肿瘤发生、发展和复发的根源.对卵巢肿瘤干细胞的研究将会加深对卵巢肿瘤的认识,进而为肿瘤发病机制的研究及临床治疗提供新的思路和方向.
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人胆囊癌SP细胞的分离及其干细胞标记物的表达
目的:探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side population cells),以及SP细胞、非SP细胞和GBC-SD细胞系表达常见干细胞标记物ABCG2、Oct-4、CD34的情况.方法:采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞,通过RT-PCR、Western blot、流式细胞术以及免疫荧光化学技术检测SP细胞、非SP细胞以及GBC-SD细胞系表达ABCG2、Oct-4和CD34的情况.结果:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着少量的具有干细胞潜能的SP细胞,其所占的比例为(0.64±0.08)%,SP细胞相对于非SP细胞和GBC-SD细胞,具有更强的体外侵袭力(P<0.05);并且ABCG2在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态(89.56±3.86)%,在非SP细胞中几乎不表达(1.32±0.49)%,在未分选胆囊癌细胞系中ABCG2呈弱表达(12.37±1.61)%,P=0.001;Oct-4在三种细胞中的表达分别为:(94.87±1.40)%、(88.16±2.34)%、(90.17±1.61)%,P>0.05;CD34在mRNA水平高表达于非SP细胞和GBC-SD细胞,不表达于SP细胞;在蛋白水平几乎均不表达于这三种细胞,其含量依次为:(1.78±0.51)%、(0.63±0.21)%、(0.96±0.38)%,P>0.05.结论:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在具有干细胞特性的SP细胞,并且具有ABCG2~+Oct-4~+CD34~-的表型特征.
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干细胞样SP细胞研究进展
干细胞样SP细胞是近年来在很多正常组织和恶性肿瘤组织及细胞系中发现的一种具有不同程度分化潜能和自我更新能力的细胞群体。虽然SP细胞在总体细胞中所占比例很低，但这部分具有干细胞特性的细胞在干细胞以及肿瘤干细胞研究方面起着越来越重要的作用。本文综述了SP细胞的发现、生物学特性、与肿瘤干细胞之间的关系以及SP细胞的未来临床应用等。后对SP细胞的发展进行了展望。
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CD55高表达在分离乳腺癌SP细胞中的作用研究
目的 探讨应用细胞CD55高表达的特性替代Hoechst 33342染色来分离乳腺癌SP细胞的可行性.方法 应用Hoechst33342及抗CD55抗体对两种乳腺癌细胞株进行荧光染色,应用FACS-Vantage和FACS Vantage SE分选SP和MP细胞、CD55高表达(CD55hi)和CD55低表达(CD55lo)细胞,对比2组细胞对血清缺失诱导的凋亡的耐受性及CD55hi和CD55lo细胞的克隆形成能力.结果 对分选的CD55hi和CD55lo细胞行Hoechst 33342染色,2组细胞分别位于SP和MP区域中.在血清缺失情况下,SP细胞和CD55hi细胞分别比MP细胞和CD55lo细胞对凋亡刺激具有更高的耐受性.CD55hi细胞较CD55lo细胞具有更强的克隆形成能力.结论 细胞CD55高表达的特性可以替代Hoechst 33342染色用于分离乳腺癌SP细胞.
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顺铂对人胃癌SGC7901细胞株中干细胞的影响
肿瘤组织中存在极少量具有无限自我更新能力和多向增殖潜能的细胞，即肿瘤干细胞（ CSC ），它们不仅在肿瘤的形成、发展和转移方面起着重要的作用，也可能是肿瘤耐药及抵抗放化疗的根源〔1，2〕。 Nanog基因作为全能性或多能性干细胞标记物，在胚胎干细胞和包括肺癌、胃癌在内的多种 CSC 中表达〔3，4〕。本研究旨在揭示顺铂干预人胃癌SGC7901细胞后，对胃癌干细胞的影响。
