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应用RNA干扰技术抑制K562细胞BCR-ABL基因表达及诱导细胞凋亡
目的运用RNAi技术,设计针对BCR-ABL基因融合位点的siRNAs,研究其干扰后细胞变化.方法针对BCR-ABL基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行MTT法、RT-PCR及流式细胞仪检测,观察其干扰效果.结果转染组与对照组相比细胞增殖减少,BCR-ABL mRNA表达量降低,并有明显的细胞凋亡.结论运用RNAi技术,可以有效地抑制BCR-ABL的表达,诱导细胞凋亡,为白血病的分子机制研究和基因治疗奠定基础.
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RNAi在研究EGF生理效应机制中的应用
目的 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是发生在mRNA水平上的一种基因沉寂现象,即在外源性双链RNA导入细胞后可以引起细胞内与其同源的mRNA特异性降解,使该基因在RNA水平上被关闭而导致其不表达,即转录后基因沉寂.小干扰RNA(small interferring RNA,siRNA)已经发展成为研究基因功能的有效工具,具有相当高的特异性;可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解.而表皮生长因子能诱导成纤维细胞的移动,促进EGF受体激活与推动力产生的分子链接,构成完整的信号传递链,从而使EGF信号完成传递,终引发一系列的细胞生化反应.
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RNA干扰技术
RNA干扰首次发现于美丽线虫,siRNAs(小干扰RNA)的产生可诱导特异内源性mRNA的降解,现在被认为是真核细胞在翻译后水平抑制蛋白产生的主要途径.典型的内源性siRNA是由19-23个碱基构成的双链寡核苷酸RNA,由RNase蛋白复合物聚集降解靶mRNA所产生.RNA干扰近常被用作逆转录基因工具来沉默多倍体有机体中的基因表达.表达siRNAs的方法日新月异,已经由初的在体内或者体外利用病毒载体转染合成的siRNA至细胞,发展为在不同型细胞和有机体中建立不同功能的特异蛋白.RNA干扰的方法较之前的方法(反义DNA或抗体封闭技术)在抑制基因表达方面有着明显的优点.RNAi序列特异性的抑制效应是有选择性的、长期的,系统地调节靶向基因.不论是直接转染siRNA或者由RNA载体表达产生,RNAi都可抑制哺乳动物中的特异基因,这无疑加速了基因功能的研究速度,而且极有潜力成为高效的基因特异性治疗方法.药理学家一直梦寐以求可有方法能够选择性的拮抗或剔除个体特异蛋白的功能,RNAi十分有望使其梦想成真.
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MicroRNA在肿瘤发生机制中的研究进展
MicroRNAs(miRNAs)是一类新发现的非编码小RNA分子,是由机体内源基因转录出长约70nt的发夹结构前体,然后被Dicer酶切割后产生的长度约22nt非编码单链核苷酸片段.在翻译水平特异性抑制基因的表达,参与调控了生物的生长和发育等许多复杂的生命过程.近的研究表明,miRNAs与肿瘤的发生和发展密切相关.该文就miRNAs的结构特点及其在肿瘤研究中的新进展作一综述.
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RNA干扰技术在哺乳动物中的应用
RNA干扰技术已被广泛应用于线虫、植物和果蝇的基因功能分析中.随着Dicer酶和siRNAs的发现,人们已经能够利用人工合成的siRNAs,或转染siRNAs的表达载体来诱发哺乳动物细胞特定基因的抑制以及将上述方法应用于整体实验中,证明整体哺乳动物也存在RNA干扰现象.
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RNAi在基因治疗中的应用
小RNA的作用与应用研究是近年生物学领域的研究热点,其核心技术RNA干扰(RNAi)是动物和植物界普遍存在的一种防御反应,RNAi被细胞内出现的双链RNA(dsRNA)所激活,可以高度特异地抑制同源基因的表达[1-2],已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因治疗开辟了新的途径.
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RNA药物的研发现状
近年来,随着RNA新类别的发现及基因编辑技术的不断进步,对开发RNA靶向药物提供更多方向.RNA药物主要分为ASO、双链siRNAs、miRNA模拟物、RNAi、基因编辑工具引导的RNA(sgRNA).本文从这几类药物出发,阐述RNA药物研发的现状与RNA药物研发存在的难点.
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bcr-abl基因沉默对相关基因表达的影响
目的运用RNAi技术,研究使bcr-abl基因沉默后相关基因表达变化.方法针对bcr-abl基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行细胞计数及流式细胞仪检测,观察干扰效果,应用RT-PCR检测相关基因表达变化.结果转染组与对照组相比,细胞数减少,有明显的细胞凋亡,bcr-abl,N-ras,c-myc基因的mRNA表达量降低.结论运用RNAi技术,可以有效地诱导细胞凋亡,抑制相关基因的表达,为研究CML的发生机制奠定基础.
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siRNA在哺乳动物基因研究中的应用
siRNAs可以有效的沉默哺乳动物细胞内内源和外源基因的特异序列,其应用为哺乳动物的基因研究提供了新的篇章.以其特异性强,沉默效率高,作用更迅速,副反应小,而成为近几年来基因研究领域的热点技术.
