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机械创伤升高大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达
目的 观察钙蛋白酶(calpain)对机械创伤大鼠心肌细胞凋亡蛋白caspase-3和caspase-12表达的影响.方法 将大鼠分为对照组、创伤组和calpain抑制剂(MDL28170)干预组(i.p.,24 mg/kg);用Western blot检测caspase-3、caspase-12、calpain-1和calpain-2蛋白表达;用试剂盒检测caspase-3和caspase-12的活性;用real-time PCR检测calpain-1和calpain-2 mRNA表达.结果 与对照组相比,大鼠创伤后心肌细胞caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均升高(P<0.01),calpain-2表达上调(P<0.01);与创伤组相比,给予抑制剂MDL28170干预后,心肌细胞calpain-2表达下降(P<0.05),caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均明显降低(P<0.05).结论 机械创伤所引起的心肌细胞calpain-2表达上调可能是导致凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-12表达和活性升高的重要原因.
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后肢接振对家兔脑和骨骼肌组织中calpain mRNA表达的影响
目的 探讨后肢接触振动(简称接振)对家兔脑和骨骼肌组织中calpain mRNA表达的影响.方法 依据4h等能量频率计权加速度有效值[a()(4)]将32只新西兰大白兔随机分为低强度(4.33 m/s2)、中强度(8.67 m/s2)、高强度(17.34 m/s2)组和对照组;后肢接振45 d后,取家兔脑和骨骼肌组织,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测其calpain-1和calpain-2 mRNA的表达情况.结果 低、中、高强度组家兔脑组织中calpain-1 mRNA的相对含量分别为8.35±3.75、9.64±4.54、15.10±5.26,calpain-2 mRNA的相对含量分别为7.34±4.97、8.50±5.66、8.16±5.59,明显高于对照组(1.10±0.29、0.56±0.43),差异均有统计学意义(P＜0.01);与对照组(0.98±0.59)比较,低、中、高强度组家兔骨骼肌组织中calpain-1 mRNA的相对含量(4.36±2.05、7.37±4.06、12.46±6.21)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);各强度组与对照组家兔骨骼肌组织中calpain-2 mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 后肢接振能够上调家兔脑组织中calpain-1和calpain-2 mRNA以及骨骼肌组织calpain-1 mRNA的表达.
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Calpain-1、caspase-3表达在氟致肾细胞凋亡中作用
目的 观察氟对大鼠肾脏calpain-1、caspase-3蛋白及其mRNA表达和肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 健康SD大鼠36只,随机分为对照组、低氟组和高氟组3组,每组12只,雌雄各半,分别饮用＜1、5、50 mg/L氟化钠的自来水,连续8个月;定期检查大鼠氟斑牙发生情况,实验期末,收集大鼠24 h尿液测尿氟含量;应用免疫组化和原位杂交法检测肾组织中calpain-1和caspase-3蛋白及mRNA表达;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡率.结果 染氟组大鼠出现不同程度氟斑牙表现,且高氟组大鼠氟斑牙程度重于低氟组;与对照组比较,染氟组大鼠尿氟含量明显升高,低、高氟组大鼠肾小管上皮细胞中calpain-1和caspase-3表达[分别为(77.00±7.60)、(83.62±7.78)和(62.33±5.86)、(66.65±3.87)]升高(P＜0.05),呈剂量效应关系;肾组织中mRNA表达与蛋白表达水平一致;与对照组比较,低、高剂量染氟组大鼠肾小管上皮细胞凋亡率[(19.76±2.21)％、(24.58±2.57)％]均增加(P＜0.05);肾小管上皮细胞中calpain-1表达与caspase-3表达呈正相关(r=0.699,P＜0.05).结论 Calpain-1、caspase-3基因表达升高引起的肾小管上皮细胞凋亡是慢性氟中毒大鼠肾脏病变的机制之一.
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瘦素对窒息新生大鼠心肌组织calpain-1和Bcl-2的表达及细胞凋亡的影响
目的：研究瘦素对窒息新生大鼠心肌组织钙依赖中性蛋白酶（calpain-1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的表达及心肌细胞凋亡的影响。方法将48只新生大鼠随机分为正常对照组、窒息组、瘦素处理组（L20组、L80组、L160组）和calpain-1抑制剂组（CAI-1组）。建立新生大鼠常压窒息模型，各瘦素处理组在造模后立即给予瘦素20、80、160μg/kg进行腹腔注射，CAI-1组造模后立即给予calpain-1抑制剂10 mg/kg腹腔注射。各组均在造模完成后2 h取心肌组织，免疫组化法检测calpain-1、Bcl-2的表达，Tunel法检测心肌细胞凋亡指数（AI）。结果窒息组calpain-1、Bcl-2的表达及AI值较正常对照组均明显升高（P<0.05）；各瘦素处理组、CAI-1组calpain-1表达水平及AI值较窒息组显著下降，Bcl-2表达水平较窒息组显著升高（P<0.05）；与窒息组相比，各指标变化均以CAI-1组显著，且与L160组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；窒息后各组calpain-1与AI值呈正相关，Bcl-2与calpain-1和AI值均呈负相关（P<0.05）。结论瘦素可抑制calpain-1的活化，上调Bcl-2表达，从而减少窒息新生大鼠心肌细胞凋亡。
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calpain-1在辛伐他汀抑制糖尿病大鼠心肌炎症中的作用
目的 探讨钙蛋白酶-1 (calpain-1)在辛伐他汀抑制糖尿病大鼠心肌炎症中的作用.方法40只SD大鼠随机分为4组:空白对照组(CON组)、链脲佐菌素组(STZ组)、辛伐他汀高剂量(20 mg/kg)治疗组(STZ+SIM20组)及低剂量(10 mg/kg)治疗组(STZ+SIM 10组),给药12周后,采用HE染色观察心肌组织病理学改变;免疫组化检测心肌组织p65的表达;Western Blot检测心肌组织calpain-1、p65、IκBα的蛋白表达;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量.结果 辛伐他汀治疗组与STZ组相比,心肌细胞排列整齐,炎性细胞浸润减少;胞浆p65、IBα蛋白表达增加,calpain-1、TNF-α、IL-6、核内p65表达减少.结论 辛伐他汀对糖尿病大鼠心肌炎症有保护作用,其机制可能与抑制心肌calpain-1表达有关.
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左乙拉西坦及辛伐他汀对癫痫持续状态大鼠脑保护作用的实验研究
目的 探讨左乙拉西坦、辛伐他汀单用或联用对癫痫持续状态(SE)模型大鼠的早期神经保护作用及其相关机制.方法 利用氯化锂-匹鲁卡品制作SE大鼠模型,将造模成功的大鼠分为4组,采用不同的处理方式(生理盐水即模型组、左乙拉西坦、辛伐他汀、左乙拉西坦+辛伐他汀),同时设空白对照组,将各组大鼠处死后取脑组织,采用免疫组化尼氏染色检测大鼠海马区神经元细胞形态及数量;Western blot检测大鼠海马区calpain-1蛋白表达.结果 免疫组化尼氏染色结果显示:与空白对照组相比,模型组大鼠海马区神经元变性,存活神经元细胞减少甚至消失,正常结构消失,表明SE后24 h,大鼠海马区神经元受到了严重损伤;与模型组比较,辛伐他汀组大鼠海马区神经元减少甚至消失,排列疏松紊乱,但差异无统计学意义,表明辛伐他汀不能改变海马神经元损伤;与模型组比较,左乙拉西坦组及左乙拉西坦+辛伐他汀组大鼠海马区神经元排列尚紧密,基本保持有序,说明左乙拉西坦单用或联用辛伐他汀均能明显减少海马神经元死亡,改变海马神经元变性,差异有统计学意义(P＜0.05),但两种处理方式之间差异无统计学意义;Western blot结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠海马区calpain-1蛋白表达显著增高,说明calpain-1可能参与到SE神经系统损伤的病理生理机制中;与模型组比较,辛伐他汀、左乙拉西坦、辛伐他汀+左乙拉西坦组calpain-1蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),表明辛伐他汀、左乙拉西坦及两种药物联用均能通过降低calpain-1蛋白表达,一定程度地抑制神经兴奋毒性损伤通路.结论 左乙拉西坦可能通过抑制calpain-1发挥早期(SE后24 h)神经保护作用,然而左乙拉西坦联用辛伐他汀并未发挥更优的作用,辛伐他汀没有早期神经保护作用.
