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干扰SULT2B1抑制人肝癌细胞BEL-7402的上皮间质化
目的 研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1与人肝癌细胞BEL-7402上皮间质转化的关系及其作用机制.方法 细胞分为空白对照组(NC)、阴性对照组(control-siRNA)和SULT2B1干扰组(SULT2B1-siRNA),Lipofectami-neTM 2000脂质体转染细胞,real-time PCR和Western blot检测干扰效果.Western blot检测紧密连接蛋白(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)和转录因子ZEB1的表达.结果 SULT2B1干扰BEL-7402细胞后其mRNA与蛋白表达均显著降低(P＜0.05),ZO-1表达水平升高(P＜0.05),vimentin的表达及ZEB1的蛋白水平均降低(P＜0.05).结论 干扰SULT2B1通过下调ZEB1的表达抑制人肝癌细胞BEL-7402的上皮间质化.
关键词： 肝癌细胞 羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1 上皮间质转化 ZEB1 -
干扰SULT2B1下调MMP-2抑制Hepa1-6肝癌细胞的体外迁移与侵袭
目的 研究羟基类固醇硫酸基转移酶(SULT2B1)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外迁移与侵袭的影响及分子机制.方法 分别用SULT2B1慢病毒干扰载体和对照载体感染Hepa1-6细胞,设立干扰组和对照组.Transwell法检测细胞的侵袭与迁移能力,Real-time PCR法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA水平,明胶酶谱法检测肿瘤条件培养基(TCM)中MMP-2和MMP-9的活性.结果 SULT2B1干扰组穿过未铺和铺Matrigl胶滤膜的细胞数较对照组明显减少(P＜0.05),干扰SULT2B1下调MMP-2、上调TIMP-2的mRNA水平(P＜0.05),干扰SULT2B1的TCM降低MMP-2的活性(P＜0.05).结论 干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的迁移与侵袭能力,其机制主要与降低MMP-2,升高TIMP-2的表达水平有关.
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SULT2B1影响小鼠Hepa1-6肝癌细胞的HIF-1α,糖酵解及血管新生
目的 研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠Hepa1-6肝癌细胞HIF-1α、糖酵解及血管新生能力的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 分别用SULT2B1过表达及干扰载体感染Hepa1-6细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测过表达/干扰SULT2B1对HIF-1α表达水平的影响,同时检测糖酵解相关基因HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平.CCK-8法检测干扰SULT2B1的肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM)对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖能力的影响,并检测VEGF的mRNA表达水平.建立Hepa1-6细胞裸鼠移植瘤模型,免疫组化染色检测裸鼠瘤组织中CD34的表达水平.结果 过表达/干扰 SULT2B1可分别上调/下调HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平,且干扰SULT2B1可使HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平降低,过表达发生相反的变化(P<0.05).干扰SULT2B1的TCM可抑制bEnd.3细胞的增殖能力,并降低VEGF的mRNA表达水平(P<0.05).同时,干扰SULT2B1可降低Hepa1-6细胞移植瘤在裸鼠体内的生长并降低瘤组织中的微血管密度(P<0.05).结论 干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的糖酵解及血管新生能力,其作用主要与下调HIF-1α、HK-Ⅱ、LDH及VEGF的表达水平有关.
