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PcG蛋白EZH2在全反式维甲酸诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的作用
目的 探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在小鼠iPS细胞系IP14D-1向生殖细胞分化过程中的作用.方法 将小鼠iPS细胞系IP14D-1通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,1μmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7d,采用实时RT-PCR、荧光定量RT-PCR、免疫荧光检测atRA处理前后EZH2和生殖细胞分化标志性基因Stra8在iEBs中的表达.结果 在atRA诱导IP14D-1来源的iEBs中,EZH2表达在诱导后2d达到高峰,伴随atRA诱导,EZH2表达减弱；而生殖细胞分化标志性基因Stra8其变化特点与EZH2相反,无atRA诱导时EBs表达Stra8较弱,伴随atRA诱导,Stra8表达增强.EZH2和Stra8阳性信号分别定位于胞膜和胞质,其变化特点与PT-PCP结果相一致.结论 atRA诱导使EZH2低水平表达时期提前出现,伴随Stra8增强表达,启动了小鼠iPS细胞向生殖细胞的分化进程.
关键词： 小鼠诱导性多能干细胞 生殖细胞 EZH2 全反式视黄酸 -
心肌营养素-1诱导小鼠诱导性多能干细胞心肌细胞定向分化的实验研究
目的:观察心肌营养素-1(CT-1)对小鼠诱导性多能干细胞(miPSCs)心肌细胞定向分化的诱导作用.方法:实验分为对照组与CT-1处理组.miPSCs经悬滴法诱导形成拟胚体,第3天培养基中加入1μmol/ml CT-1(CT-1组),对照组采用普通培养基.于第4、7、10和14天,收取细胞样本,采用实时PCR检测心脏特异标志物基因的表达.用免疫荧光染色及流式细胞术检测干细胞标志物Oct4和心肌特异性分化标志物肌钙蛋白I(cTnI)的表达.用透射电镜观察心肌样细胞的超微结构.结果:CT-1组第10天,样本中心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)基因表达的水平为同期对照组的1.75倍,有显著性差异(P＜0.05).免疫荧光染色法检测显示,两组均有cTnI表达.流式细胞术鉴定的结果显示,对照组与CT-1组cTnI的阳性率分别为28.5％和56.4％,有显著性差异(P＜0.05).电镜观察显示,CT-1组肌原纤维及胞内线粒体明显增多,肌纤维排列规则,可见细胞间桥粒连接和缝隙连接.结论:CT-1可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率.
关键词： 心肌营养素-1 小鼠诱导性多能干细胞 心肌细胞定向分化
