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Ⅰ型Na+/H+交换器在LPS引起的大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的作用
目的 探索Ⅰ型Na+/H+交换器(NHE1)在脂多糖(LPS)引起的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)损伤中的作用.方法 培养大鼠PMVECs.MTT比色试验检测细胞活力;比色法测试上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)浓度;BECEF-AM荧光探针染色细胞,激光共聚焦显微镜下观察细胞内酸碱度,检测NHE1的活性;PT-PCR技术检测NHE1的mRNA表达.结果 LPS不仅使细胞活力降低35%(P＜0.05),使上清液中LDH和MDA分别升高3倍和2.5倍(P＜0.05),而且使NHE1的活性增强,mRNA表达增多(P＜0.05).但是NHE1的抑制剂--环己阿米洛利(HMA)能显著抑制LPS引起的这些变化(P＜0.05).结论 NHE1的活性增强和表达增多是LPS引起大鼠PMVECs损伤的重要机制.
关键词： Ⅰ型Na+/H+交换器 脂多糖 肺微血管内皮细胞 环己阿米洛利 -
脂多糖对肺动脉内皮细胞Ⅰ型Na+/H+交换器表达的影响
目的:探讨脂多糖(LPS)对培养的牛肺动脉内皮细胞(PAEC)Ⅰ型Na+/H+交换器(NHE-1)表达的影响及其与内皮细胞死亡的关系.方法:体外培养牛PAEC,MTT比色检测细胞存活率,并提取总RNA,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及DNA电泳技术,以NHE-1与β-actin电泳条带光密度值之比(e/c)作数据分析,以其比值反映NHE-1 mRNA的表达程度.应用Fluo3/Amy荧光探针标记,激光共聚焦观察细胞内钙离子的浓度.结果:在LPS(0.01～1.0 μg/ml)作用48 h后,MTT比色吸光度值分别为0.35±0.07,0.31±0.07,0.26±0.04,低于对照组0.44±0.06(P<0.01).e/c分别为0.43±0.11, 0.83±0.14,1.22±0.19,高于对照组0.28±0.08(P<0.01,n=4).激光共聚焦结果显示LPS引起细胞内钙离子增多,呈剂量依赖型.结论:LPS可以引起肺动脉内皮细胞NHE-1表达增加,抑制细胞增殖,导致细胞死亡,钙离子可能参与NHE-1的激活及表达.
关键词： 脂多糖 Ⅰ型Na+/H+交换器 肺动脉内皮细胞 钙离子
