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中华蜜蜂囊状幼虫病病毒单克隆抗体的制备与鉴定
为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于l∶80 000的小鼠,在细胞融合前3～4d再加强免疫一次.取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后注射入Balb/c小鼠(Mus musculus)腹腔制备单抗腹水.共获得9株稳定分泌抗CSBV的单克隆抗体,命名为10A1、5B10、5A5、5H2、11D7、9A5、1D3、3C10、10C4,效价都在1∶16 000以上,经间接ELISA实验检测表明,具有较好的特异性.在此基础上,将9株腹水单抗分别与CSBV互作后,接种于2～3日龄中华蜜蜂幼虫,观察幼虫死亡率,研究单克隆抗体中和CSBV病毒能力,结果表明筛选到三株单克隆抗体(l0A1、5A5、9A5)对CSBV有中和作用,为CSBV的防治研究奠定了基础.
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检测囊虫循环抗原胶体金试条的研制与初步应用
目的 研制快速检测囊虫循环抗原(CA)的胶体金试纸法.方法 以部分纯化囊虫抗原免疫BALB/c小鼠制备抗CA单克隆抗体(McAb),经筛选获得5株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株.用制备的McAb两两配对,制备了囊虫CA免疫胶体金快速诊断试条.结果 以1A5和1B6配对的试条对人体囊虫CA、囊虫CA标准抗原以及63份囊虫病患者血清、9份脑囊虫痛患者脑脊液的检测结果均为阳性,时弓形虫病感染者、包虫病患者及非疫区献血员血清的检测结果均为阴性;与酶联免疫吸附试验(ELISA)的平行对比试验表明,试条检测敏感性与ELISA的敏感符合率为97.03%.结论 研制的免疫胶体金诊断试条可用于人体囊虫病CA的特异性诊断和流行病学调查.
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抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备能够特异性识别戊型肝炎病毒重组蛋白ORF23的单克隆抗体并分析其生物学特性.方法:利用纯化的戊型肝炎病毒(HEV)ORF23基因工程重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并对其单克隆抗体的相关性质进行鉴定.结果:获得两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株A8和A11.间接ELISA方法测定,杂交瘤细胞培养上清效价均为1:32000,接种小鼠的腹水效价均为1:2×106.两株单抗均能特异性识别重组ORF23蛋白,但它们识别ORF23蛋白的不同表位.结论:获得的单克隆抗体可以为诊断HEV提供敏感、特异、稳定的诊断试剂,并为HEV ORF23重组蛋白抗原表位的精确定位以及基于表位的基因工程疫苗研究奠定基础.
关键词： 戊型肝炎病毒 ORF23重组蛋白 单克隆抗体(McAb) -
呼吸道合胞病毒融合抑制活性单克隆抗体的鉴定及应用
用杂交瘤技术制备了抗呼吸道合胞病毒(RSV-Long株)的单克隆抗体F3细胞株.经IFA及ELISA证明,F3株McAb对RSV抗原特异,具中和活性及融合抑制活性,其腹水中和效价和融合抑制效价分别为1∶128和1∶64.将F3株McAb与商售混合单抗试剂盒进行临床诊断比较,二者阳性符合率96.9%,阴性符合率100%.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 单克隆抗体(McAb) 融合抑制试验 诊断 -
131I-抗VEGF McAb在荷人膀胱癌裸鼠移植瘤体内分布的实验研究
目的研究131I-sc-7269在荷人膀胱癌裸鼠体内生物学分布情况,探讨131I-sc-7269放射免疫治疗实验性人膀胱癌的可行性.方法①Iodogen法标记抗-VEGF McAb(sc-7 269);②荷人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤模型的建立;③荷瘤裸鼠131I-sc-7269体内分布实验.结果①131I-sc-7269比活度为1.00 MBq/μg(放射性浓度为18.30 MBq/ml),放射性化学纯度为96.20%.②131I-sc-7269在肿瘤组织中浓聚的峰时为注入标记抗体后96 h,此时各组织T/NT比值为高.结论①采用Iodogen法标记的131I-sc-7269免疫活性无改变;②131I-sc-7269动物模型肿瘤/膀胱放射性峰时出现在96 h,比值高达6.44,为应用131I-sc-7269放射免疫治疗人膀胱癌的研究提供了实验依据;③本实验研究为进一步开展应用放射性核素标记McAb(sc-7269)放射免疫治疗(RIT)与放射免疫导引手术(RIGS)治疗膀胱癌的实验研究奠定了基础.
关键词： 膀胱癌 血管内皮生长因子 动物/裸小鼠 单克隆抗体(McAb) 放射性核素 -
丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
;上清和腹水抗体效价分别为10-4和10-6;SDS-PAGE显示该抗体在55和25 kD附近各有1条带,与预计的分子量大小一致.纯化抗体的亲和常数为2.2×1011.PAGE后Western blot检测显示该McAb可与人血清中的ALT结合.结论 所制备的杂交瘤细胞株能分泌抗人ALT的特异性Mcab.
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三株抗人肺鳞癌单克隆抗体免疫组化分析
目的 对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法 用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确诊的肺鳞癌组织、肺腺癌组织、肠癌组织、食道癌组织、肾癌组织、肺正常组织石腊切片和肺鳞癌YTMLC-90细胞系、肺腺癌GLC-82细胞系、舌鳞癌Tca-8113细胞系、鼻咽癌KB细胞系、胶质瘤U-251细胞系、膀胱癌T-24、B1u-87细胞系的交叉反应.结果 杂交瘤细胞上清液与肺癌组织及肺鳞癌、肺腺癌细胞系YTMLC-90、GLC-82反应呈阳性,阳性率分别为82%、100%;与正常肺组织及肠癌组织、肾癌组织、食道癌组织及体外培养的其它各肿瘤细胞系均呈阴性反应.结论 经免疫组化研究,三株单克隆抗体具有肺癌特异性,属于肺癌相关抗原的单克隆抗体.
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HEV ORF2 P179重组蛋白特异性单克隆抗体的制备和鉴定
目的：制备戊型肝炎病毒ORF2 P179重组蛋白特异性单克隆抗体并分析其生物学特性。方法利用重组纯化的戊型肝炎病毒HEV ORF2 P179蛋白对BALB/c小鼠进行免疫，采用杂交瘤技术进行淋巴细胞与SP2/0细胞融合、采用间接ELISA方法筛选鉴定高效稳定分泌HEV ORF2 P179特异性单克隆抗体的融合细胞。结果两株株杂交瘤细胞A3和F5可以分泌特异性的针对HEV ORF2 P179蛋白的单克隆抗体。结论获得HEV ORF2 P179特异性单克隆抗体，为戊型肝炎诊断试剂开发和基因工程疫苗研究提供基础数据。
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癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析
采用了两株CEA单克隆抗体(McAb),一株用于固相包被,另一株用于标记制备125I-CEAMcAb,研制了一步法CEA免疫放射分析(IRMA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.5μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为97.4%～108.9%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0μg/L.
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AFP免疫层析测试条的研制
以复合型层析材料为固相,用胶体金标记AFP McAb A14C11,AFP McAb A4A14包被于固相,采用双抗体夹心免疫层析技术,研制出AFP免疫层析测试条.该方法敏感度为10 μg/L,结果显示清楚,具有简易、快速、灵敏、实用、省时等特点.
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癌胚抗原(CEA)酶联免疫分析试剂盒的研制
以一株CEA单克隆抗体(McAb)用于固相包被,另一株McAb与辣根过氧化物酶偶联制备抗CEA酶标记物,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,采用二步法,制备了CEA酶联免疫分析(ELISA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.4 μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为99.4%～108.7%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0 μg/L.该方法具有简便、快速和准确的特点,适用于临床检测和科研应用.
