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丹参注射液对小鼠急性心肌梗死后心脏成体干细胞移植的影响
目的 研究联合应用丹参注射液对心脏成体干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死的影响.方法 将30只小鼠随机分为3组,每组10只,分别为丹参注射液高剂量组[5 g/(kg·d)],丹参注射液低剂量组[0.5 g/(kg·d)]和模型对照组.所有小鼠均通过结扎冠状动脉左前降支构建小鼠急性心肌梗死模型,造模成功后立即在梗死周围区域心肌内注射体外培养的小鼠心脏干细胞约2 ×106个～3 ×106个.在心肌梗死前1周及心肌梗死后1周连续给予丹参注射液灌胃.心肌梗死后1周处死小鼠,对心脏组织进行免疫染色,采用CD31检测微血管密度,Ki67染色检测细胞增殖,Masson染色检测心肌纤维化程度,TUNEL法检测梗死周围区域细胞凋亡,Western blot方法检测小鼠心脏内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)及磷酸化Akt表达情况.结果 丹参注射液高剂量组微血管密度及Ki67阳性细胞数较低剂量组及模型对照组显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).丹参注射液高剂量组心肌纤维化程度及心肌梗死周围区域细胞凋亡较低剂量组和模型对照组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).丹参注射液高剂量组磷酸化Akt蛋白表达水平较其他两组显著升高,各组间差异有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组比较,丹参注射液高剂量和低剂量组总Akt水平显著升高(P＜0.05),但高、低剂量组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 心脏成体于细胞移植联合丹参注射液治疗急性心肌梗死时,可以增加微血管密度及细胞增殖,减少细胞凋亡及纤维化程度,从而提高成体干细胞移植效率.
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丹参注射液对体外小鼠心脏成体干细胞的影响
目的:研究丹参注射液对体外小鼠成体心脏干细胞的细胞学特性影响.方法:体外分离培养小鼠Sca-1+成体心脏干细胞,荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度.培养的小鼠心脏干细胞分为3组,分别为低剂量丹参注射液组(75μg/mL),高剂量丹参注射液组(300μg/mL)及对照组.干预后,采用CCK-8检测细胞活力;EdU掺入法检测细胞DNA合成情况;5% CO2 和95% N2缺氧条件培养12h诱导细胞凋亡后,Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3酶活性情况.结果:成功分离培养小鼠心脏成体干细胞.荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度>95%.与对照组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力(P<0.05)和DNA合成(P<0.05)显著增加;与低剂量组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力增强(P<0.05),但DNA合成无显著差异.缺氧条件下,丹参注射液高剂量处理组Caspase-3酶活性较对照组显著下降(P<0.05).结论:丹参注射液增加小鼠心脏成体干细胞的细胞活力及DNA合成能力,减少缺氧诱导的细胞凋亡.
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成体心脏干细胞经静脉移植后在心梗小鼠体内的分布研究
目的:观察心肌梗死小鼠静脉移植成体心脏干细胞后,细胞在小鼠体内各器官的分布情况.明确心梗后静脉移植成体心脏干细胞在小鼠体内的分布和归巢情况.方法:分离培养小鼠心脏成体干细胞,采用流式细胞仪鉴定细胞,通过亲脂性染料CM-DiI标记细胞后行小鼠急性心肌梗死模型建立和细胞移植,分别在细胞移植后7、14、8天取小鼠心脏、肝脏、脑、脊髓、肺脏,行冰冻切片,在荧光显微镜下观察移植细胞在各组织器官存活和分布情况.结果:成体心脏干细胞分离培养后呈贴壁生长,流式细胞仪检测显示细胞纯度＞80％.CM-DiI标记后荧光显微镜下观察可见标记的细胞胞浆胞核均被染成呈明亮的红色.心肌梗死后经静脉移植成体心脏干细胞,细胞在各组织中分布呈变化过程,7天时,在肺脏和肝脏分布较多,至14天和28天时,肺脏和肝脏分布减少,心脏分布逐渐增多,表现出向心脏的"归巢"现象,而脑和脊髓在28天的观察时间内分布较少.结论:采用CM-DiI标记心脏成体干细胞,操作简单,标记效果好,可用于短期的细胞体内追踪.小鼠心肌梗死后行经静脉成体心脏干细胞移植,28天后细胞在心脏的分布逐渐增多,表现出向心脏的"归巢"现象.
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丹参注射液对小鼠心肌干细胞的影响
目的:探讨丹参注射液对小鼠原位心脏成体干细胞数量和旁分泌功能的影响.方法:以不同剂量丹参注射液对小鼠进行灌胃给药,分为高剂量丹参注射液组(5g·kg-1·d-1)和低剂量丹参注射液组(0.Sg·kg-1·d-1),对照组采用相同体积生理盐水,每天1次连续1周.1周后经小鼠眼眶取血,检测血常规及肝肾功能;以小鼠新鲜心脏组织冰冻切片行免疫荧光染色,检测Sca1+成体干细胞数量；以Real-Time PCR检测心脏血管内皮生长因子(VEGF)、IL-6、BAD基因表达情况.结果:灌胃1周后,三组间血常规、肝肾功能差异无统计学意义(P＞0.05);与高剂量丹参注射液组比较,低剂量丹参注射液及对照组中Sca-1+成体干细胞数量及VEGF和IL-6基因表达显著减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).同时,丹参注射液高剂量组BAD基因表达较丹参注射液低剂量组和对照组显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参注射液能增多小鼠心脏中成体心脏干细胞数量,改善旁分泌功能.
