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基于UPLC-Q-TOF-MS技术的北青龙衣有效成分动态变化分析
采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析不同采集时期北青龙衣有效成分动态变化规律.用MarkerView软件对6个采集时期18批样品测定数据进行主成分分析,差异性化合物通过Peakview 2.0/Masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定分子式,再通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定结构式.结果表明不同采集期萘醌类有效成分含量发生了明显的变化,鉴定或推断了北青龙衣中38个萘醌类化合物结构,随着采收时间的变化大部分萘醌类成分含量逐渐下降.该方法快速、准确,为北青龙衣的化学成分鉴定与分析提供一种新的策略,为揭示不同生长期北青龙衣有效成分动态变化规律及确定其药材合理采收期提供基础资料.
关键词： 液相色谱-四极杆飞行时间质谱 北青龙衣 萘醌 动态变化 -
基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣褐变过程中成分动态变化分析
该文分析不同褐变时期北青龙衣有效成分动态变化规律.采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对13个褐变时期26批样品进行测定,差异性化合物通过Peakview 2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定分子式,再通过与对照品及质谱数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,并结合已有文献报道,确定结构式.结果不同褐变时期化学成分含量发生了明显的变化,鉴定或推断了北青龙衣中25个化合物结构,随着褐变时间的变化,13个萘醌类化合物中,具有胡桃醌相似母核的6个化合物及3个萘醌苷类化合物的含量显著下降,产生胡桃酮等4个萘醌衍生物;4个黄酮及2个酚酸类化合物含量显著下降;6个二芳基庚烷类化合物显著提高.该方法能够快速、准确鉴定北青龙衣的化学成分,并分析动态变化规律,为揭示褐变对中药材及果蔬成分的影响提供一种新的研究策略.
关键词： 液相色谱-四极杆飞行时间质谱 北青龙衣 褐变 动态变化 -
基于UPLC-Q-TOF/MS分析北青龙衣成分
目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术,对不同产地78批次北青龙衣进行分析,确定其主要的活性组分.方法 采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7μm),以0.1％甲酸水(A)-0.1％甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过Markerview1.2.1软件提取78个样本中1 000个离子,按离子在所有样本中均出现,且相对强度基本大于e4的原则选取共有离子.通过Peakview 2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定共有离子分子式,通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定共有离子结构式.结果 鉴定或推断了北青龙衣中31种主要化学成分,其中包括11种萘醌类、3种二芳基庚烷、3种黄酮、8种三萜类及6个其他类化合物.结论该方法检测快速、准确,为北青龙衣的化学成分鉴定提供一种新的策略,主要化学成分的确定为北青龙衣质量评价指标选择及药效物质深入研究奠定基础.
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基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣成分在大鼠胃组织中的分布研究
目的 采用UPLC-Q-TOF/MS技术首次对北青龙衣化学成分的胃组织分布进行深入研究.方法 大鼠ig给予北青龙衣醇提物后,采集胃组织,经有机溶剂沉淀蛋白,通过Peakview 2.0/Masterview 1.0和MetabolitePilot l.5数据处理软件,根据离子碎片精确质量数和同位素丰度比,数据库的二级质谱对比和裂解规律分析,对胃组织中移行成分进行推断和鉴定.结果 共鉴定出54个移行成分,其中41个原型成分,包括17个萘醌、9个二芳基庚烷、7个黄酮、5个三萜及3个酚酸类成分;13个代谢产物,包括4个萘醌、3个二芳基庚烷、1个黄酮及5个其他类成分.结论 基于UPLC-Q-TOF/MS技术,首次阐明北青龙衣化学成分在大鼠胃组织分布情况,该方法检测快速、准确,为北青龙衣抗胃癌药效学研究与深入开发提供科学的研究数据.
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基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣大鼠肾组织化学成分分析
目的 利用超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术对北青龙衣大鼠肾组织化学成分进行分析.方法 大鼠ig给予北青龙衣醇提物后,采集肾组织,采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸的水溶液(A)-0.1％甲酸的乙腈溶液(B),梯度洗脱,质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过Peakview 2.0/masterview 1.0和Metabolitepilot数据分析软件,通过对比保留时间、碎片丰度比、母离子精确质量数及二级质谱图鉴定和表征北青龙衣在大鼠肾组织成分.结果 从大鼠肾组织中鉴定了24种化学成分,包括16个原型成分和8个代谢产物,其中包含12个萘醌类、5个黄酮类、3个二芳基庚烷类、4个三萜类成分.结论 初步确定了北青龙衣在大鼠肾组织中原型成分及代谢产物,为北青龙衣用药安全性和有效性提供参考,为其在大鼠体内成分及组织分布研究提供方法学借鉴.
关键词： 北青龙衣 肾组织分布 超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱 核桃酮 柚皮素 -
北青龙衣多糖的提取、分离纯化及分析
对北青龙衣中总多糖进行分离纯化,获得分子量均一多糖,并对其进行结构分析.北青龙衣药材经沸水提取,浓缩醇沉,木瓜蛋白酶脱蛋白,D101大孔树脂柱纯化脱色,再经DEAE Cellulose 52离子交换柱层析、Sephacryl S-300凝胶柱层析得到纯化多糖组分.采用高效凝胶渗透色谱-蒸发光检测器对其进行纯度鉴定、分子量测定.气-质联用、红外光谱分析其单糖组成与结构.北青龙衣多糖经分离得到两个均一组分PJP-1a、PJP-3a,其分子量分别为:1.34×103 Da、1.70×107 Da.气-质联用分析PJP-3a是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,单糖摩尔比为:4.56∶7.53∶1∶2.48∶41.4∶17.94.红外光谱提示PJP-1a、PJP-3a可能均具有吡喃环结构,糖苷键的连接方式均为β型,PJP-1a存在乙酰氨基结构.
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原子吸收光谱法测定不同产地北青龙衣药材重金属含量
目的:测定13产地北青龙衣药材中5种重金属元素的含量,为北青龙农药材的质量控制提供更多依据.方法:采用石墨炉原子吸收法测定铅、镉的含量;采用火焰原子吸收法测定铜的含量;采用原子荧光光谱法测定汞、砷的含量.结果:北青龙农药材中5种重金属元素铅、镉、铜、汞及砷的平均含量分别为0.193μg·g-1、0.021μg·g-1、1.337μg·g-1、0.028μg·g-1、0.005μg·g-1,回收率在95.7％～102.11％(RSD＜2.7％).结论:13产地北青龙衣药材中5种重金属元素的含量完全符合《药用植物及制剂进出口行业绿色标准》中的重金属元素限量标准,为该药材中重金属元素限量标准的制定、药材的药用安全性提供依据.
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UPLC-Q-TOF/MS法分析北青龙衣总萘醌类成分的组成
目的:以超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF/MS)技术分析北青龙衣中总萘醌类成分的组成.方法:采用Sephadex LH-20纯化北青龙衣总萘醌类部位,通过UPLC-Q-TOF/MS技术对北青龙衣总萘醌类成分进行快速分析,利用Peakview2.0/Masterview1.0 software数据处理软件,根据质谱所提供的保留时间、精确相对分子量及二级质谱裂解碎片鉴定及推测其化学成分.结果:通过液质数据分析及参考相关文献鉴定出北青龙衣总萘醌部位中萘醌类成分44种.结论:该方法能够快速、准确的分析北青龙衣总萘醌部位的成分,为今后更深入地研究北青龙衣总萘醌有效部位的化学成分奠定结构基础.
关键词： 北青龙衣 总萘醌 超高液相色谱—四极杆飞行时间质谱 -
基于UPLC-Q-TOF-MS技术的北青龙衣肺组织成分分布研究
目的:基于液质联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)分析北青龙衣的化学成分在肺组织中的分布.方法:采用ACQUITY BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以水(A)-乙腈(B)分别加入0.1％甲酸进行梯度洗脱.质谱采用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据,通过数据处理软件,依据精确质量数、同位素丰度比、谱图对比和裂解规律分析,进行化学成分推断和鉴定.结果:共鉴定出19个原型成分和7个代谢产物,包括14个萘醌类、6个二芳基庚烷类、3个黄酮类及3个三萜类成分.结论:该方法检测快速、准确,为北青龙衣抗肺癌活性成分、作用机制及代谢过程研究奠定基础.
关键词： 北青龙衣 化学成分 肺组织分布 超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱 -
北青龙衣抗肿瘤化学成分研究
目的:研究北青龙衣抗肿瘤的化学成分.方法:使用95％乙醇回流提取,大孔吸附树脂、硅胶、 Sephadex LH-20等分离;1H-NMR,13C - NMR,MS鉴定结构.结果:分离得到7个化合物,分别鉴定为熊果酸乙酯(1),20(R) -24β-羟基-20,25 -环氧-达玛烷-3-酮(2),1,7-二羟基-3,6-二甲氧基蒽醌(3),反式邻羟基肉桂酸(4),4-羟甲基-2 -甲氧基苯酚(5),没食子酸甲酯(6),4 -甲氧基-5 -羟基-1 -四氢萘酮(7).结论:化合物1 ～4为首次从该属中分离得到.
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北青龙衣化学成分研究
目的:研究北青龙衣的化学成分.方法:采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、制备HPLC及重结晶为分离纯化手段;ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR和DEPT为结构鉴定手段研究北青龙衣的化学成分.结果:分离得到7个化合物,分别鉴定为12β,20β-二羟基-达玛烷-24-烯-3-酮(1),20β-羟基-达玛烷-23(24)-烯-3-酮(2),20(S),24(S)-二羟基达玛烷-25-烯-3-酮(3),顺式对羟基肉桂酸(4),3-羟基环丁基羧酸(5),(4S)-4,8-二羟基-1-四氢萘酮(6),对羟基苯乙酮(7).结论:化合物1,4~7为首次从该属中分离得到.
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北青龙衣乙酸乙酯部位化学成分研究
目的:研究北青龙衣乙酸乙酯部位的化学成分.方法:采用正相、反相色谱、Sephadex LH-20凝胶柱和高效液相制备色谱等多种手段对乙酸乙酯部位进行成分分离和纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构.结果:从北青龙衣中共分离得到7个化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(1),反式-3-羟基-4-甲氧基肉桂酸(2),4-(1-羟基-1-甲基乙基)苯甲酸(3),3,5-二羟基-1,4-萘醌(4),4(R)-5-羟基-4-乙氧基-β-四氢萘酮(5),4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮(6),异阿魏酸甲酯(7).结论:其中化合物1～3,化合物7为首次从胡桃属中分离获得.
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北青龙衣抗肿瘤谱效关系研究初探
目的:对北青龙衣抗肿瘤谱效关系进行初步研究.方法:采用乙醇冷浸提取,大孔树脂进行初步分离,所得到的各组分用MTT法进行体外细胞毒试验,测定各组分对人胃癌细胞BGC803的抑制活性,并用薄层色谱进行初步谱效关系研究.结果:大孔树脂经30%乙醇洗脱的组分显示较强的细胞毒活性,薄层色谱显示该组分为极性大和极性小的成分的复杂组合.结论:大孔树脂经30%乙醇洗脱的组分在北青龙衣抗肿瘤活性中起重要作用.
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北青龙衣质量控制的研究
目的:建立北青龙衣质量控制的方法.方法:采用薄层色谱进行鉴别,展开条件为三氯甲烷-甲醇(8:2),采用高效液相色谱进行含量测定,以乙腈-水-磷酸(10:90:0.2)为流动相,指标成分为(4S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮-4-O-β-D-吡喃葡糖苷.结果:方法灵敏、可靠、准确、重复性好.结论:该方法可作为北青龙衣质量控制的方法.
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北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中的成分分布研究
目的 利用超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术研究北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中化学成分分布.方法 灌胃给予北青龙衣醇提物后,采集肝组织,用含0.1％甲酸水溶液(A)-含0.1％甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源,以正、负2种离子模式采集数据,通过Peakview 2.0/masterview 1.0和Metabolitepilot数据分析软件,通过对比同位素丰度比、保留时间,精确母离子质量数和二级碎片鉴定北青龙衣在大鼠肝组织中成分.结果 从大鼠肝组织中鉴定了39种化学成分,包括27个原型成分和12个代谢产物,其中包含10个二芳基庚烷类,10个黄酮类,14个萘醌类,5个三萜类成分.结论 初步确定了北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中的原型成分及代谢产物,为北青龙衣体内成分及组织分布研究提供方法学参考,并为其进一步深入研究奠定基础.
关键词： 北青龙衣 肝组织分布 化学成分 超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱 -
基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣不同干燥方法对萘醌类成分影响研究
目的:研究不同干燥方法对北青龙衣萘醌类成分含量的影响,为建立适合北青龙衣产地加工方法提供参考.方法:采用晒干,阴干,40、50、60℃烘干,冷冻干燥,微波干燥5种方法对北青龙衣样品进行干燥处理.采用UPLC-Triple TOF-MS/MS技术对样品进行测定,数据用MarkerView软件进行主成分分析,化合物通过PeakView 2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定分子式,再通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定结构式.结果:不同干燥方法萘醌类有效成分含量发生了明显的变化,鉴定或推断了北青龙衣中24个萘醌类化合物结构,确定了40℃烘干为适宜干燥方法.结论:该方法快速、准确,可为北青龙衣不同干燥方法的化学成分鉴定与分析提供一种新的策略,对北青龙衣加工生产具有一定的指导意义.
关键词： 液相色谱-四极杆飞行时间质谱 北青龙衣 干燥方法 萘醌 -
北青龙衣中萘醌类有效成分动态积累规律研究
目的:明确北青龙衣中萘醌类有效成分动态积累过程,确定北青龙衣药材的适宜采收期.方法:以不同采样方式获得多产区不同采集时期北青龙衣样本,采用紫外分光光度法测定总萘醌含量,采用高效液相色谱法测定胡桃醌、胡桃酮含量,结合药材产量,研究萘醌类成分的动态积累规律,确定适宜采收时期.结果:3个产区各采集时期北青龙衣样本的总萘醌、胡桃醌、胡桃酮含量整体呈逐渐下降趋势,8月中旬后急剧下降.结合药材产量,7月中旬至8月初有效成分总量积累达到大值.结论:综合总萘醌、胡桃醌、胡桃酮含量以及药材产量确定北青龙衣适宜采收时间为7月中旬至8月初.
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一测多评法同时测定北青龙衣药材中胡桃醌和胡桃酮的含量
目的:建立同时测定北青龙衣药材中胡桃醌、胡桃酮含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,以胡桃醌为内参物,计算其对胡桃酮的相对校正因子(RCF),通过RCF计算北青龙衣药材中胡桃酮的含量;以外标法测定的胡桃酮含量作实测值,采用夹角余弦法比较一测多评法的计算值与实测值的差异.结果:胡桃醌、胡桃酮检测质量浓度线性范围分别为7.6～76.0 μg/mL(r=0.999 0)、8.2～82.0 μg/mL(r=0.999 4);精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3.0％;加样回收率分别为95.37％～97.94％ (RSD=1.04％,n=6)、99.13％～100.10％ (RSD=0.33％,n=6).计算值与实测值之间的夹角余弦值为0.999 84,两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于北青龙衣药材中胡桃醌、胡桃酮含量的同时测定.
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多指标评价不同干燥方法对北青龙衣质量的影响Δ
目的：研究不同干燥方法对北青龙衣质量的影响，从而优选北青龙衣的优干燥方式。方法：对北青龙衣经5种干燥方法（阴干、晒干、烘干、微波干燥、冷冻干燥）及烘干方法下不同干燥温度（40、50、60℃）处理后，以干燥时间、复水率、含水量、醇浸出物含量、有效成分胡桃醌和胡桃酮的含量及其甲醇提取物对人胃腺癌BGC823细胞、人肺癌A549细胞的体外抗肿瘤活性为指标，对比分析不同干燥方法对北青龙衣质量的影响。结果：5种干燥方法中，微波干燥时间短，阴干干燥时间长；冷冻干燥样品含水量大，微波干燥样品含水量小；醇浸出物含量相差不大；胡桃醌含量以冷冻干燥样品高、微波干燥样品低；胡桃酮含量以40℃烘干样品高、冷冻干燥样品低；体外抗肿瘤试验表明按对2种细胞的生长抑制率将干燥方法排序为冷冻干燥＞40℃烘干＞阴干，且抑制率随着干燥温度的升高而降低。结论：不同干燥方法对北青龙衣质量有明显的影响。从成本、有效成分含量、抗肿瘤活性及实用性综合分析，认为北青龙衣宜采用在40℃烘干的方法进行干燥。
