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基因芯片分析IFRD1表达沉默后肝癌细胞周期相关基因表达的变化
目的:分析IFRD1基因表达下调后人肝癌细胞周期中基因的改变,探讨该基因影响肝癌细胞增殖的机制.方法:采用RNA干扰技术下调目的基因表达,再用基因芯片检测人肝癌细胞表达谱的改变,重点分析细胞周期通路中基因的表达变化.结果:IFRD1干扰后,细胞周期蛋白和CDK表达上调,而抑制因子CKI以下调为主;G1/S期检测点p21、p57表达均下调;S期MCM蛋白复合体以下调为主,ORC表达均下调,而CDC6和CDC45表达也下调,提示染色体复制受阻.结论:IFRD1表达沉默后,细胞生长活跃,G1-S期转换顺利,而S期DNA合成受到抑制,有丝分裂检测点受阻,终导致细胞增殖分裂受限.
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IFRD1基因表达下调对人肝癌细胞细胞株SMMC-7721基因表达谱的影响
目的 探讨IFRD1表达下调后人肝癌细胞SMMC-7721基因表达谱的改变.方法 采用脂质体lipo2000将构建的含目的基因shRNA的质粒转染入SMMC-7721细胞,并应用Affymetrix U133 plus 2.0 array基因芯片检测目的基因表达下调后,该细胞基因表达谱的变化.结果 RNA干扰抑制IFRD1基因表达后,基因芯片检测发现25476个基因中,表达量发生明显改变的有4221个(上下调大于等于1.5倍),上调的基因有1109个,下调的有3 112个;这些基因涉及到细胞周期、细胞凋亡、DNA复制等通路.结论 IFRD1基因表达下调后,人肝癌细胞SMMC-7721基因表达谱发生明显变化,与细胞生长增殖关系密切的细胞信号通路也发生了明显的改变.