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芪卫颗粒调节USF2及其下游信号分子表达对KK-Ay小鼠糖尿病肾病的干预作用
目的:探讨自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1、USF2、MMP-9、TIMP-1的表达情况和相互关系,以及芪卫颗粒对糖尿病肾病(DN)肾纤维化的干预机制.方法:将SPF级12周龄雄性KK-Ay小鼠60只按血糖值随机分为模型组、芪卫颗粒组、缬沙坦组,20只C57BL/6J小鼠为对照组.24周龄时,行RT-PCR检测肾组织中USF2、TGF-β1的mRNA表达,Western Blot检测TGF-β1、USF2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达,免疫组化染色观察TGF-β1在肾脏中的表达及分布情况.并用图像定量分析系统进行统计分析.结果:①与对照组比较,模型组肾组织TGF-β1、USF2、TIMP-1表达明显升高,MMP-9表达明显降低,免疫组化显示模型组TGF-β1在肾小球和肾小管表达均明显增加(P＜0.05).②与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组TGF-β1、USF2、TIMP-1表达降低,MMP-9表达升高(P＜0.05).结论:①USF2正向调节TGF-β1表达,TGF-β1过表达进而促使MMP-9表达降低、TIMP-1表达升高,MMP-9/TIMP-1比例失衡,细胞外基质(ECM)降解减少而沉积.②芪卫颗粒下调KK-Ay小鼠肾组织USF2基因和蛋白表达,负向调节TGF-β1表达,纠正MMP-9/TIMP-1比例失衡,可能是其治疗DN肾纤维化的机制之一.
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水痘-带状疱疹病毒基因启动子分析
目的 从水痘-带状疱疹病毒(VZV)主要基因的启动子中找到容易被VZV感染激活的启动子及其短有效序列以构建VZV报告细胞系.方法 构建18个VZV开放读码框架(ORF)启动子的重组报告质粒,用基因转染瞬时表达分析法比较各启动子在VZV感染早期启动报告基因产物表达的活性;将容易被激活的启动子从5'和3'端截短后构建截短启动子的重组报告质粒,比较各截短启动子的活性以找到启动子的短有效序列;应用点定向突变技术将短有效序列中细胞转录因子的结合序列进行碱基置换突变后比较突变启动子的启动活性.结果 VZV感染早期ORF9、ORF61和ORF66的启动子容易被激活;ORF9启动子的短有效序列位于-127～-34(93 bp),其上游刺激因子(USF)结合序列的碱基置换突变后启动子活性降低50%;ORF61启动子的短有效序列位于-227～-52(165 bp),其Pbx-1结合序列的碱基置换突变后启动子活性增强一倍,但NF-κB结合序列的突变对启动子活性无影响.结论 ORF9启动子的短有效序列适合用来构建VZV报告细胞系.
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上游刺激因子的研究进展
上游刺激因子是一种多功能转录调节因子,在真核细胞中广泛存在,它以蛋白二聚体的形式在胞核中与靶基因中启动子的特异位点结合发挥转录调控作用.本文介绍了上游刺激因子的基因定位、分子结构、作用机制,并对该因子在糖脂代谢、胚胎发育、肾脏疾病、牙齿发育等方面的作用进行了综述.
