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微透析-HPLC-ECD联用技术用于香附四物汤对大鼠脑内5-HIAA动态变化的评价
原发性痛经被认为是与性激素紊乱伴随月经前的孕酮减少有关.下丘脑的单胺和其代谢产物可能参与了这个病理过程.用微透析结合HPLC-ECD快速鉴定正常和原发性痛经模型大鼠下丘脑中的5-HIAA.微透析样品中5-HIAA的检测限和定量限分别是1.5ng/mL和5.0ng/mL.校准曲线在10-250ng/mL的浓度范围内为线性.痛经模型大鼠的5-HIAA的含量和正常对照组相比有显著的增加,表明原发性痛经导致5-HIAA的增加.经过香附四物汤的治疗,5-HIAA的含量降低,显示香附四物汤通过降低下丘脑的5-羟色胺的代谢率从而减轻原发性痛经的疼痛综合症.
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高效液相色谱-电化学检测法测定黄芩中3种有效成分的含量
目的:建立同时测定黄芩中有效成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的HPLC-ECD检测法.方法:采用kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)进行分离,Waters2465电化学检测器进行检测,检测电位为+800 mV vs.ISAAC(in-situ silver/silver chloride),流动相为H2O-THE-H3PO4(80:10:0.2)与CH3OH等体积混合洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,进样体积10 μL.结果与结论:黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在下列范围内,有良好的线性:0.045 6～1.14 μg(r=0.999 6),0.013～0.325 μg(r=1.000 0),和0.009 5～0.047 5 μg(r=0.999 9).平均回收率(n=5)分别为97.9%(RSD 2.3%),97.2%(RSD 3.3%)和103.5%(RSD 3.5%).测定了14个不同种源、9个不同产地黄芩中有效成分的含量,对黄芩品质进行了评价.
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从莪术、郁金两味中药探讨寒热药性对大鼠大脑不同部位单胺类神经递质的影响
目的:从中枢单胺类神经递质的含量差异探讨中药寒热药性的科学内涵.方法:将莪术、郁金2味药性相反的中药给大鼠灌胃给药1个月后,用HPLC-ECD检测大鼠大脑不同部位单胺类神经递质的含量.结果:温热药莪术明显促进大鼠大脑不同部位单胺类神经递质的分泌,与对照组相比有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01);寒凉药郁金明显抑制大鼠大脑不同部位单胺类神经递质的分泌,与对照组相比有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:中药的寒热药性与中枢单胺类神经递质存在一定的相关性.
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中药松郁安神方对失眠大鼠血浆中单胺类神经递质的影响
目的:探讨松郁安神方对睡眠剥夺大鼠血浆中单胺类神经递质去甲肾上腺素( Noradrenalin,NE)、5-羟色胺(Serotonin,5 -HT)、多巴胺(Dopamin,DA)水平的影响.方法:采用对氯苯丙氨酸(PCPA)造大鼠失眠模型；采用高效液相色谱-电化学检测法( HPLC - ECD)测定PCPA失眠大鼠血浆中NE、5 - HT和DA含量.结果:松郁安神方可以降低大鼠血浆中NE、DA含量、升高血浆中5- HT含量,与模型组比较,P＜0.05.结论:松郁安神方改善失眠大鼠睡眠的机制可能与其调节大鼠睡眠相关物质NE、DA、5- HT的含量有关.
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HPLC法测定人血浆中左旋多巴和卡比多巴浓度及其药代动力学研究
目的:建立人血浆中左旋多巴和卡比多巴同时测定的HPLC-ECD方法,研究左旋多巴卡比多巴在人体中的药代动力学.方法:样品提取采用偏重亚硫酸钠抗氧化,高氯酸沉淀蛋白,氧化铝在碱性条件下吸附样品,酸性条件下解吸附的方法.流动相:储备液(2.3%柠檬酸,1.66%NaOH)-甲醇-冰醋酸-水(250∶40∶14∶696,v/v/v/v),庚烷磺酸钠为4 mmol/L.流速 1.0 ml/min.色谱柱为C18,5 μm,250 mm×4.6 mm I.D.电化学检测器(ECD)极化电压为0.8 V.用上述方法研究了20名健康志愿者单剂量和多剂量口服息宁控释片后血药浓度-时间过程.结果:血浆中杂质不干扰样品峰,低检测浓度:左旋多巴50 ng/ml,卡比多巴12.5 ng/ml,线性范围:左旋多巴50～3200 ng/ml,卡比多巴12.5～800 ng/ml.回收率大于70%,日间和日内的变异系数小于15%.受试者单剂量口服250mg(200/50)息宁控释片后估算的左旋多巴末端相半衰期为2.02±0.41 h,峰时间为2.0±0.9 h,峰浓度为1553.5±350.6 ng/ml;卡比多巴的末端相半衰期为1.77±0.68 h,峰时间为3.8±0.7 h,峰浓度为236.98±62.03 ng/ml.多剂量口服息宁控释片达稳态时的左旋多巴药代动力学参数为tmax 1.8±0.6 h,cmax 1203.0±319.5 ng/ml,cav 322.9±62.5 ng/ml,AUCss 3874.9±749.5 ng·h/ml,DF3.75±0.84;卡比多巴药代动力学参数为tmax 2.8±0.7 h,cmax 225.94±89.94 ng/ml,cav 60.53±20.66,AUCss 726.41±247.88 ng·h/ml,DF 3.68±0.52.结论:本文建立的HPLC-ECD法适合于左旋多巴和卡比多巴联合用药的临床研究.
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银杏二萜内酯对缺血／再灌注大鼠脑组织中神经递质的影响
目的：探讨银杏二萜内酯葡胺注射液对缺血／再灌注大鼠脑内氨基酸类和单胺类神经递质的影响。方法采用线栓法制备大鼠脑缺血／再灌注模型，缺血1.5 h，再灌注24 h，尾静脉给予不同剂量银杏二萜内酯葡胺注射液后，用高效液相色谱串联电化学检测器（HPLC-ECD）测定脑内氨基酸类和单胺类神经递质含量。结果银杏二萜内酯葡胺注射液可以抑制缺血／再灌注导致的脑内天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸的升高；降低缺血脑区皮层和海马内去甲肾上腺素、二羟苯乙酸、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸的浓度，抑制皮层内肾上腺素的减少。结论银杏二萜内酯葡胺注射液可以通过调节脑内氨基酸类和单胺类神经递质的水平，对大鼠脑缺血／再灌注引起的损伤发挥治疗作用。
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松果菊苷对阿尔采末病大鼠海马、皮质内神经递质水平的影响
目的：研究松果菊苷( ECH)对阿尔采末病( AD)模型大鼠海马、大脑皮质细胞外液中单胺类神经递质水平的影响,为ECH改善学习记忆力提供理论依据。方法60只 SD大鼠随机分为模型组、ECH 低、中、高剂量组、阳性药石杉碱甲组以及假手术组。采用腹腔内注射 D-半乳糖,并在右侧海马内注射Aβ25-35复制AD 模型。 Morris 水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力,应用脑双位点双通道同步微透析采样技术,联合运用高效液相-电化学法测定大鼠海马和皮质细胞外液中 NA、DA、5-HT 的含量。结果水迷宫结果显示,与假手术组相比, AD 模型组大鼠逃避潜伏期明显延长( P <0．05),停留在原平台象限时间明显缩短(P<0．05)；与模型组相比,ECH低、中、高剂量组均使大鼠学习记忆能力有不同程度的提高,ECH组逃避潜伏期明显缩短(P<0．05),停留在原平台象限时间明显延长( P<0．05)。同时,模型组较假手术组大脑皮质、海马中的 NA、DA、5-HT 明显降低( P <0．05)；ECH组较模型组脑内单胺类神经递质水平恢复至接近正常水平。结论 ECH可以改善AD大鼠学习记忆力,并且明显升高海马、皮质细胞外液中单胺类神经递质的含量,具有一定的抗AD作用。并且 ECH 中、高剂量组、阳性药石杉碱甲组在提高学习记忆能力方面作用优于ECH低剂量组。
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槟榔种子总酚类抗抑郁作用研究
目的:研究槟榔种子总酚类物质的抗抑郁作用并探讨其作用机制.方法:连续灌胃给药15d,采用小鼠悬尾、强迫游泳等抑郁模型,以小鼠行为绝望的不动时间作为指标,从动物学行为上考察槟榔种子总酚类抗抑郁活性;通过HPLC-ECD法测定小鼠脑组织中单胺类递质肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量.结果:与空白对照组比较,槟榔种子总酚类320、160 mg/kg均能显著减少小鼠悬尾和强迫游泳的不动时间,80 mg/kg无明显作用;槟榔种子总酚类320 mg/kg组与氟西汀组NE含量均显著增加,5-HT含量有所增加,DA以及E含量有所减少,但差异无统计学意义.结论:槟榔种子总酚类具有一定的抗抑郁作用.
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预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响
目的:研究预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量的影响,为明确FAE可能的抗抑郁机制提供理论依据.方法:设置溶剂对照组、艾司西酞普兰阳性对照组及FAE 25、50mg/kg处理组,成年雄性SD大鼠单次给予药物后1、2、3、5h及连续给药21 d(亚急性)后收集不同部位的组织样品;所采集样品均采用高效液相-电化学检测法(HPLC-ECD)测单胺类神经递质含量.结果:急性给予FAE后3h,前额皮层、海马的NA与5-HT、以及纹状体DA含量水平均升高;亚急性给予FAE后,其变化结果与急性给药3h后的结果相似,但升高程度更为显著.结论:FAE能显著提高前额皮层、海马、纹状体部位的单胺类神经递质的含量,提示FAE的抗抑郁作用与改变单胺类神经递质含量水平密切关系.
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HPLC-ECD法测定青蒿素溶解度及油水分配系数
目的：建立一种便捷灵敏的青蒿素含量测定方法，并测定其在不同溶剂中的溶解度及油水分配系数。方法均匀试验设计优化青蒿素的柱前衍生条件，采用HPLC-ECD法进行测定。结果优化的青蒿素柱前衍生条件为：1 mL青蒿素无水乙醇溶液与4 mL氢氧化钠0.01 mol·L-1于70℃水浴中反应50 min后，冷却至室温，再加入5 mL醋酸0.06 mol·L-1。青蒿素在0.0015~0.7500μg范围内线性关系良好。结论建立的柱前衍生HPLC-ECD法专属性强、灵敏度高，适用于青蒿素的测定。
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不同方法检测微囊藻毒素-LR致DNA氧化损伤
目的 观察微囊藻毒素-LR(MCLR)对人肝癌细胞HepG2的DNA氧化损伤效应.方法 应用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)和免疫酶染色法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平.结果 用HPLC-ECD法分析,低、中剂量组8-OHdG水平显略有增高趋势,高剂量组(100μmol/L)8-OHdG水平显著高于空白对照组;用免疫酶染色法分析,各剂量组8-OHdG染色强度明显高于空白对照组,处理剂量与8-OHdG水平之间呈现剂量-反应关系.结论 MCLR引起人肝癌细胞DNA氧化损伤,HPLC-ECD法与免疫酶染色法所测损伤的趋势一致.免疫酶染色法能够更灵敏地检测DNA氧化损伤,可应用于人类疾病研究与环境监测.
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BD总皂苷对营养性肥胖大鼠纹状体细胞外液中5-HT、5-HIAA含量的影响
目的:研究BD总皂苷对营养性肥胖大鼠纹状体细胞外液中单胺类神经递质含量的影响,探讨了BD总皂苷减肥调脂作用的可能机制.方法:灌胃6周后,定位至大鼠左侧纹状体,于第3天进行大鼠纹状体微透析试验,将微透析液分别注入高效液相-电化学系统,测定各组纹状体透析液中单胺类神经递质五羟色胺(5-HT)、五羟基吲哚乙酸(5-HIAA)的含量.结果:与肥胖模型组相比,BD总皂苷高剂量组、低剂量组和阳性对照组纹状体透析液中5-HT、5-HIAA的含量升高,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),说明BD总皂苷减肥作用可能与5-HT的含量升高有关.结论:BD总皂苷具有减肥和调节血脂作用,其作用可能与通过抑制5-HT、的再摄取而减少食物摄入有关.
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金银花药材的HPLC特征图谱研究
目的:建立金银花药材的HPLC特征图谱,为金银花药材的质量鉴定提供依据.方法:采用Phnomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.5%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,柱温40℃.检测器为紫外检测器和电化学检测器.结果:得到了分离度较好的HPLC-UV(238 nm)和HPLC-ECD(250 mV)2种特征图谱,两者具有良好的相关性和互补性.分别识别了17个和9个特征共有峰.结论:该方法稳定、准确、可靠,可用于金银花药材的质量控制.
