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LC-MS/MS分析银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的代谢产物
目的:研究银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的主要代谢产物及其代谢途径.方法:3名受试者静脉滴注银杏二萜内酯葡胺注射液后收集0～6h的尿样,分别按酸化和不酸化样品处理后,以液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对样品进行分析.采用ACE C18-AR色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),酸性HPLC条件流动相Ⅰ为乙腈-0.4％甲酸铵水溶液(pH3.2)梯度洗脱,中性HPLC条件流动相Ⅱ为乙腈-水梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1.通过比较空白尿样和给药后尿样的总离子流和提取离子流色谱图以及各个色谱峰的保留时间、准分子离子和二级碎片离子,分析银杏内酯A(GA),银杏内酯B(GB)和银杏内酯K(GK)在人体内可能的代谢产物.结果:除原型药外,共鉴定了12个代谢产物,其中GA相关的代谢产物有6个,包括5个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物;GB相关的有4个,包括1个Ⅰ相和3个Ⅱ相代谢产物;GK相关的有2个,包括1个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物.结论:GA在人体内主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯;GB主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯、葡萄糖醛酸苷或谷胱甘肽结合物;GK在人体内主要的代谢途径为甲基化葡萄糖醛酸结合反应.
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银杏叶内酯K对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨银杏叶内酯K(ginkgolide K,GNK)对大脑局灶性脑缺血再灌注(MCAO)损伤大鼠的保护作用.方法 采用栓线法大鼠缺血2 h再灌注22 h模型,探讨银杏内酯K对模型大鼠神经缺损症状、脑梗死百分比、脑组织含水率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及皮层神经元细胞内[Ca2+]I浓度、Bax蛋白,Bcl-2蛋白及caspase-3蛋白的影响.结果 与脑缺血再灌注组相比,GNK(4和8 mg·kg-1)组中大鼠神经缺损评分、脑含水率、脑梗死百分比显著降低(P＜O.01):脑组织丙二醛含量减少、S0D活性升高、[Ca2+];显著下降(P＜O.01),Bax和caspase-3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著提高.结论 银杏内酯K对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,本作用机制可能与银杏内酯K减少大鼠脑缺血再灌注后脑组织[Ca2+]I浓度、抗自由基损伤及其抑制Bax与Bcl-2蛋白表达比例及caspase-3蛋白表达有关.
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银杏内酯K的制备工艺研究
目的 优选银杏内酯K的制备工艺.方法 以银杏内酯B为原料,以银杏内酯B的收率为指标,考察投料比(银杏内酯∶二乙氨基三氟化硫)、反应溶剂用量比(银杏内酯∶二氯甲烷)、反应时间、反应温度,采用正交试验设计优选银杏内酯K的佳制备工艺条件,并采用波谱法鉴定其结构,高效液相色谱法测定其含量,色谱条件为:ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mmx4.6 mm,5μm);流动相:水-甲醇-异丙醇(60∶35∶5);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:220 nm.结果 银杏内酯K的佳制备工艺条件为投料比1∶4.5,反应溶剂用量比1∶30,反应时间20 min,反应温度4℃;所得目标化合物经Q-TOF-MS、1H-NMR、13C-NMR和二维核磁共振谱鉴定为银杏内酯K.结论 该制备工艺条件温和、制备周期短、操作简便、收率高,适合工业化生产.
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HPLC-ELSD法测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K
目的 建立测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的HPLC-ELSD法.方法 采用HPLC-ELSD法,Phenomenex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为四氢呋喃-甲醇-水,梯度洗脱；体积流量为1.0 mL/min;柱温为30℃；漂移管温度为105℃,氮气体积流量为3.0 L/min.结果 注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K分别在1.70～8.50 μg (r=0.999 7)、2.45～12.5 μg (r=0.999 8)、0.30～1.50 μg (r=0.999 7)、0.25～1.25 μg (r=0.999 7)呈良好的线性关系；平均回收率分别为101.03％、100.86％、100.78％、101.02％,RSD值分别为0.87％、0.29％、1.30％、1.34％.结论 该方法简便准确,重复性好,可用于注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的测定.
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银杏内酯K对脑缺血的保护作用
目的 研究银杏内酯K对脑缺血的保护作用.方法 采用小鼠常压耐缺氧实验,测定小鼠存活时间:小鼠双侧颈总动脉结扎引起急性不完全脑缺血模型,测定小鼠喘气时间、脑乳酸含量和碱性磷酸酶活性,观察组织形态学、脑指数和脑含水量的变化.结果 银杏内酯K能剂量依赖性地延长小鼠缺氧缺血的存活时间:延长喘气时间,减少乳酸含量,降低碱性磷酸酶活性,减小脑指数和脑含水量.病理学组织检查显示,银杏内酯K能改善脑缺血再灌注造成的小鼠神经细胞的损伤,减少组织坏死.结论 银杏内酯K对脑缺血有保护作用.
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银杏叶滴丸中3种萜内酯类化合物的HPLC-ELSD检测
目的:建立HPLC-ELSD法同时检测银杏叶滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量.方法:Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱;流动相:正丙醇∶四氢呋喃∶水=1∶30∶69;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃,蒸发光检测器的漂移管温度60℃,载气流量25 L/min.结果:5个批号银杏叶滴丸的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量分别为14.6 ～ 15.7 mg/g、7.9～9.1 mg/g和4.2～6.7 mg/g.结论:该实验建立的HPLC-ELSD方法同时检测为银杏叶滴丸的质量控制提供了参考.
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银杏内酯K晶型物质的制备与表征
目的:研究银杏内酯K的多晶型现象,确定银杏内酯K不同晶型物质的制备及鉴定方法,为银杏内酯K的纯化及晶型物质质量控制提供依据.方法:选用适当的溶剂,采用缓慢溶剂挥发法、快速溶剂去除法、反溶剂沉淀法及高温转晶法等多晶型筛查方法,发现并制备获得了7种不同的银杏内酯K溶剂合物、1种银杏内酯K的水合物及1种无溶剂合物;利用晶型物质常用表征方法如粉末X射线衍射法(PXRD)、差示扫描量热法(DSC),热重法(TG)及红外光谱法(IR)等检测方法对上述所获物质均进行了表征分析.结果:确定了银杏内酯K各晶型物质的组成;得到了各晶型物质的DSC、TG、PXRD及IR图谱,且各图谱间存在显著差异,因此使用DSC、PXRD及IR法可对各晶型物质进行鉴别.结论:发现并制备获得了7种不同的银杏内酯K溶剂合物,获得了新型银杏内酯K的固体存在状态,并实现了对不同固体存在状态的鉴别分析,为银杏内酯K晶型物质的开发及质量控制提供依据.
