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GSK -3β抑制剂对体外培养多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞睾酮分泌过多的影响
目的：探讨糖原合成酶激酶-3（GSK -3）抑制剂 SB216763改善多囊卵巢综合征（P-COS）患者卵巢颗粒细胞睾酮（T）分泌异常的作用机制。方法将行体外受精-胚胎移植（IVF - ET）治疗的20例不孕妇女按发病原因分为三组，其中不孕原因为输卵管及男方因素的非 PCOS 患者8例为对照组，PCOS 不孕患者12例平均分为 PCOS 组和 GSK -3β抑制剂组，每组6例。对照组及 PCOS组患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h，利用放射免疫法检测细胞上清液中的雌二醇（E2）、孕酮（P）、T 的水平。GSK -3β抑制剂组用浓度为5、10、25、50、100μmol/ L 的 GSK -3β抑制剂 SB216763对体外培养的 PCOS 患者卵巢颗粒细胞进行干预，后继续培养48 h，检测细胞上清液中的 E2、P、T 的水平。结果（1）PCOS 组与对照组患者相比其卵巢颗粒细胞中 T 分泌明显升高（P ﹤0.01），而 P 和 E2的表达变化不大（P ﹥0.05）。（2）GSK -3β抑制剂组 PCOS 患者卵巢颗粒细胞给予不同浓度的 GSK -3β抑制剂 SB216763作用后，与 PCOS 组相比，T 平明显下降（P ﹤0.05）。（3）GSK -3β抑制剂 SB216763浓度为5μmol/ L 时对 PCOS 患者卵巢颗粒细胞 T 分泌的抑制作用明显（P ﹤0.01）。结论 PCOS 患者卵巢颗粒细胞 T 分泌异常增高，GSK -3β抑制剂 SB216763能够抑制其 T 的过多分泌。
关键词： 多囊卵巢综合征 人卵巢颗粒细胞 糖原合成酶激酶-3抑制剂 睾酮 -
大气PM2.5对人卵巢颗粒细胞的毒性作用及氧化损伤研究
目的 研究大气PM2.5对人卵巢颗粒细胞的毒性作用.方法 人卵巢颗粒细胞体外培养48 h后,分别用100、200、300μg/ml PM2.5溶液染毒24h,检测细胞活力,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、雌二醇、孕酮、丙二醛(MDA)、caspase-3水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)含量.结果 随着PM2.5染毒浓度的增加,人卵巢颗粒细胞活力下降,细胞培养液中雌二醇和孕酮含量下降,300 μg/ml PM2.5染毒组培养液中LDH含量高于对照组和100 μg/ml PM2.5染毒组,300 μg/ml PM2.5染毒组caspase-3表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).300 μg/ml PM2.5染毒组细胞MDA含量、ROS含量均高于对照组,各浓度PM2.5染毒组SOD活力均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 PM2.5对人卵巢颗粒细胞的毒性作用随染毒浓度的升高而增加,同时可诱导细胞氧化损伤.
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补肾活血法复方解除雷公藤甲素抑制人卵巢颗粒细胞分泌功能的研究
目的 探讨雷公藤甲素对体外培养人卵巢颗粒细胞增殖的影响及补肾活血中药复方对此影响的解除作用.方法 M TT法检测雷公藤甲素6种不同浓度对人卵巢颗粒细胞原代培养细胞增殖的影响,并计算出细胞半数抑制浓度值(IC50);放免法分别检测颗粒细胞正常组(正常组)、雷公藤甲素抑制组(TL组)、中药含药血清组(TL+中药组)的雌二醇(E2)、孕酮(P)水平.结果 雷公藤甲素浓度≥1μg/mL时对人卵巢颗粒细胞的增殖有明显抑制作用,且呈剂量依耐性;当IC5o为5.33 μg/mL时,TL组的E2、P水平明显低于正常组(P均＜0.05),而TL+中药组E2、P水平均明显高于TL组(P均＜0.05).结论 雷公藤甲素能抑制体外培养的人卵巢颗粒细胞的分泌功能,补肾活血中药复方能解除其抑制作用,提高体外培养的人卵巢颗粒细胞的分泌功能.
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PPARγ和RXR激动剂抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和其mRNA的水平
目的探讨过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和维甲类X受体(RXR)激动剂对人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性的调节作用.方法测定人卵巢颗粒细胞(KGN)在PPARγ激动剂曲格列酮、吡格列酮和前列腺素J2以及RXR激动剂LG100268处理前后芳香化酶活性、雌酮(E1)的变化以及P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平.对P450arom启动子Ⅱ进行分析,以确定PPARγ和RXR是否直接抑制P450arom mRNA的转录.结果 (1)PPARγ激动剂和RXR激动剂均能显著抑制芳香化酶活性,两者结合使用抑制作用进一步增强并且使E1的生成减少;(2)芳香化酶活性的降低与P450arom mRNA水平下降有关;(3)PPARγ和RXR激动剂对1.0 kb长的P450arom启动子Ⅱ控制的荧光素酶蛋白无调节作用.结论 PPARγ和RXR激动剂对人卵巢颗粒细胞的芳香化酶活性和P450arom mRNA的水平有抑制作用.
关键词： 过氧化物酶体增殖体激活受体γ 维甲类X受体 芳香化酶 人卵巢颗粒细胞 -
双酚A干扰人卵巢颗粒细胞雌二醇生成的机制
目的:研究双酚A(BPA)对人卵巢颗粒细胞细胞色素P450芳香化酶(P450arom)和雌二醇(E2)表达的影响机制.方法:提取人卵巢颗粒细胞进行体外培养,细胞鉴定采用免疫细胞化学法,CCK-8增殖实验分析细胞体外增殖活力.予以不同浓度BPA(0,0.1,1,10,100 mg/L)或BPA+ PPAR-γ抑制剂GW9662 1μmol/L处理处理人卵巢颗粒细胞,ELISA法测定各组E2浓度,获取细胞沉淀,RT-PCR法测定P450arom mRNA表达.结果:人卵巢颗粒细胞体外培养第3-5天达增殖分裂高峰,FSHR免疫细胞化学鉴定显示阳性染色定位于细胞膜和细胞质,细胞纯度达95％以上,ELISA及RT-PCR结果显示当BPA浓度为0.1 mg/L时,P450arom mRNA及E2生成较空白对照组增加(P＜0.05),当BPA浓度为1,10,100 mg/L时,P450arom mRNA及E2生成逐渐减少(P＜0.05),加入GW9662后,P450arom mRNA及E2表达量较单独BPA处理组增高(P＜0.05).结论:BPA干扰人卵巢颗粒细胞E2的生成,该干扰可能通过PPAR-γ核受体途径进行.
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不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响
目的 比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法.方法 取体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞.比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响.结果 裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P＜0.005,P＜0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量多(P＜0.05),裂解法得到的存活细胞少(P＜0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96h均较培养24h有明显细胞增殖(P＜0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义.结论 裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法.
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多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达
目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系.方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异.结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MⅡ期21个、MⅠ期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MⅡ期中表达较MⅠ期、GV期增强,差异有显著性;而MⅠ期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MⅡ期、MⅠ期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中低.③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异.④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性.⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性.结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关.
