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中药调控血脑屏障对Aβ的转运＊
阿尔茨海默病发病（Alzheimer’s Disease，AD）主要病理改变是脑组织中β-淀粉样蛋白（β-amyloid Protein，Aβ）的异常堆积所形成的淀粉样老年斑块（Senile Plaques，SP）。血脑屏障(Blood-brain Barrier，BBB)可以调控Aβ脑内的代谢，通过相关的转运体完成Aβ的跨血脑屏障转运。本文主要通过介绍血脑屏障晚期糖基化终产物受体（Receptor for Advanced Glycation End Products，RAGE）及低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（Low Density Lipoprotein Receptor-related Protein-1，LRP-1）这两个主要转运体来阐释Aβ的脑内堆积及其产生的炎性因子对神经元毒性的作用机理，由此进一步探讨利用中医药对血脑屏障RAGE与LRP-1两种转运蛋白的调节，减少Aβ脑内的异常沉积、缓解脑内炎症反应，保护脑神经元。
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亚慢性乳酸铝暴露对大鼠学习记忆和血脑脊液中Aβ转运的影响
目的 研究乳酸铝暴露对大鼠学习记忆和脑脊液内β-淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法 SD雄性大鼠80只随机分成溶剂对照组(蒸馏水)和低、中、高剂量铝染毒组(10、30、90 mg/kg乳酸铝),每组20只,灌胃染毒2个月.采用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力,免疫印迹(western-blot)法检测各组大鼠脉络丛中低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液和血浆中Aβ含量.结果 Morris水迷宫试验显示,在定位航行试验中,随训练时间的延长,各组的逃避潜伏期明显缩短且差异有统计学意义(P＜0.05);随染毒剂量的增高,逃避潜伏期延长且差异有统计学意义(P＜0.05);空间探索试验中,中、高剂量组目标区域停留时间分别为(11.52±1.56)、(10.43±5.27)s,比对照组[(15.81±3.01)s]和低剂量组[(13.91±2.17)s]明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05);穿越平台位置次数中、高剂量组分别为(2.64±1.39)、(1.50±0.76)次,明显少于对照组[(4.29±0.914)次]和低剂量组[(3.56±1.38)次],差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA法结果显示,与对照组[(203.46±74.36)pg/ml]比较,中、高剂量组大鼠脑脊液中的Aβ1-42含量[(320.35±84.82)、(327.68±67.51)pg/ml]明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);各组血浆中Aβ1-42含量差异无统计学意义(P＞0.05).各组大鼠脑脊液和血浆中的Aβ1-40含量差异亦无统计学意义(P＞0.05).Western-blot法显示,高剂量组LRP-1蛋白相对表达量(0.57±0.21)明显低于对照组(1.00±0.00)、低剂量组(0.79±0.15)和中剂量组(0.95±0.24),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 亚慢性铝暴露可使大鼠学习记忆能力下降,脑脊液中的Aβ蓄积可能与脉络丛中LRP-1蛋白表达下降有关,提示铝可能通过降低LPR-1蛋白表达影响Aβ转运致Aβ蓄积进而可能影响大鼠学习记忆能力.
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胰岛素治疗对糖尿病大鼠脑组织中Lrp-1与Aβ1-40表达的影响
目的 分析胰岛素治疗前后糖尿病大鼠脑组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白Lrp-1和Aβ1-40的表达.方法 将正常健康雄性鼠龄1个月Wistar大鼠60只随机分为4组,分别为正常对照组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组、糖尿病胰岛素未治疗组各15只.通过高脂高糖饮食和小剂量腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型后,在造模成功的糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组及糖尿病胰岛素未治疗组大鼠中每组随机取10只继续进行后续实验.应用免疫组化法对脑组织中Lrp-1与Aβ1-40的表达进行测定.结果 正常对照组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组、糖尿病胰岛素未治疗组大鼠脑组织均有Lrp-1及Aβ1-40的阳性表达,糖尿病组大鼠相比于正常对照组,在上述组织中的Lrp-1阳性表达血管数明显减少,Aβ1-40阳性表达血管数明显增加(P<0.05);而糖尿病胰岛素治疗组与糖尿病胰岛素未治疗组大鼠脑组织相比,Lrp-1的阳性表达则明显增加,Aβ1-40的阳性表达显著减少(P<0.05).结论 胰岛素治疗降低了糖尿病大鼠脑组织中Aβ1-40的表达量并提高了Lrp-1的表达.
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下调miR-205抑制皮质神经元的缺血性损伤
目的:探讨miR-205对皮质神经元缺氧/缺糖损伤的作用与其可能的作用机制.方法:大鼠大脑皮层神经细胞的分离培养和MAP2免疫荧光鉴定皮质神经元.缺氧/缺糖处理构建皮质神经元缺血性损伤模型.实时荧光定量PCR检测miR-205表达量.利用Lipofectamine2000转染miR-205 mimics,miR-205抑制剂或LRP-1 siRNA.试剂盒检测caspase-3活性.Annexin-Ⅴ fluorescein isothiocyanate conjugate and propidium iodide(Annexin-Ⅴ FITC/PI)方法检测细胞凋亡.MTT实验检测细胞生长活力.双荧光素酶报告基因检测miR-205与LRP-1的靶向调控关系.Western Blot检测LRP-1蛋白表达量.结果:MAP2鉴定为皮质神经元.皮质神经元缺氧/缺糖损伤下调miR-205表达量.细胞转染实验中,下调miR-205显著抑制损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,提高细胞生长活力;过表达miR-205则作用相反.对于miR-205的靶向基因LRP-I,过表达miR-205可显著抑制LRP-1,而抑制miR-205其作用则相反.同时抑制miR-205和LRP-1促进损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,降低细胞生长活力.结论:下调miR-205可以通过调控LRP-1抑制皮质神经元的缺血性损伤,为新生儿脑卒中的预防和治疗提供一定的理论基础.
