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总序香茶菜的组织培养与快繁研究
目的对总序香茶菜进行组织培养和离体快速繁殖.方法以总序香茶菜带芽茎段为外植体,在附加有不同种类和不同浓度激素的MS培养基上进行培养.结果佳芽诱导培养基:MS+BA 0.05～0.5 mg/L+NAA0.01～0.05 mg/L;佳芽增殖培养基:MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L(或IAA 0.01 mg/L);佳生根培养基:MS+NAA 0.1 mg/L+活性炭0.05%;佳愈伤组织诱导与生长培养基为:MS+2,4-D 1.0～2.0 mg/L+BA0.1～0.2 mg/L.结论成功建立了快速无性繁殖系.
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防风愈伤组织诱导及植株再生体系的建立
目的 建立防风Saposhnikovia divaricate再生体系.方法 研究不同外植体、温度、培养基、光照条件对诱导防风愈伤组织的影响,采用响应面试验设计,优化愈伤组织诱导及增殖的激素配比.结果 以防风的叶片为外植体,诱导愈伤组织适培养基为MS+ 6-BA 0.90 mg/L+2,4-D 1.05 mg/L+KT 0.96 mg/L,25℃恒温12 h/d光照培养;适增殖培养基为MS+6-BA 0.56 mg/L+2,4-D 0.48 mg/L+KT 0.40 mg/L,继代周期为35 d;诱导丛生芽适培养基为MS+NAA 0.6 mg/L+6-BA 1.0 mg/L;适生根培养基为MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.1 mg/L.结论 成功诱导防风愈伤组织并建立稳定高效的植株再生体系.
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石蒜悬浮细胞系的建立及其生物碱累积的研究
目的 研究由石蒜愈伤组织建立细胞悬浮培养体系的条件及其生物碱的累积.方法 以石蒜鳞茎为外植体进行愈伤组织的诱导,筛选出优质的愈伤组织进行悬浮培养,考察了激素、接种量、肌醇和条件培养对石蒜悬浮细胞系建立的影响,并利用HPLC检测石蒜悬浮细胞和培养基中生物碱的量.结果 石蒜悬浮细胞系培养的佳条件为:MS为基本液体培养基,添加2,4-D 0.5 mg/L+KT 0.1 mg/L,肌醇300 mg/L,接种量15％;对数期的培养基能明显缩短细胞系生长的延迟期;细胞系和培养基中加兰他敏分别是石蒜鳞茎中的4.18和0.69倍.结论 利用石蒜愈伤组织建立了较好的细胞悬浮培养体系,且石蒜悬浮细胞系是一种获取加兰他敏的较好途径.
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铁皮石斛根尖诱导丛生芽研究
目的探索铁皮石斛根尖再生丛生芽的适宜条件及类原球茎的起源.方法切取0.3～0.5 cm的根尖为外植体,以B5为基本培养基,附加不同种类和质量浓度的植物生长调节剂进行培养.结果诱导根尖形成了愈伤组织、类原球茎或直接转化成芽且获得再生植株.通过细胞学观察认为铁皮石斛的类原球茎是单细胞起源的体细胞胚.结论为铁皮石斛组织快繁建立新的体系.
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黄连的组培再生及遗传转化研究
目的 建立黄连的组培再生及遗传转化体系.方法 以黄连子叶和下胚轴为外植体,用不同的基本培养基添加不同种类及浓度的植物生长调节剂进行组培再生研究；利用基因枪转化法研究黄连胚性愈伤组织和遗传转化.结果 子叶和下胚轴在MS培养基上愈伤诱导率分别可达86.31％和54.34％;与MS培养基相比6,7-V培养基可获得更高的愈伤诱导率和增殖率；诱导愈伤组织适宜的激素组合为0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT;不同细胞分裂素培养的愈伤组织颜色和质地差异明显；0.5 mg/L KT+0.5 mg/L IAA与1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA组合可诱导出胚性愈伤组织,产生体细胞胚；无激素的6,7-V培养基可维持胚性愈伤组织的不断生长；含1 mg/L GA3+0.5 mg/L IBA的6,7-V培养基可使体细胞胚萌发成苗；转化后的胚性愈伤组织经3 mg/L除草剂Basta筛选,检测到β-葡萄糖苷酸酶(GUS)阳性,PCR检测再生植株膦丝菌素乙酰转移酶基因(bar)阳性.结论 建立并完善了黄连的组织培养再生体系,并在此基础上利用转基因技术获得了具有相关性状的植株,实现了黄连的遗传转化,为黄连性状的遗传改良奠定了基础.
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茉莉酸甲酯诱导的白木香cDNA文库的构建及初步鉴定
目的 通过构建茉莉酸甲酯(MeJA)处理的白木香cDNA文库,为揭示伤害诱导沉香倍半萜合成的分子机制奠定基础.方法 以MeJA处理的白木香愈伤组织为材料,以改造的pGADT为载体,利用SMART技术构建白木香全长cDNA文库.结果 构建的文库原始滴度为8.99×106 pfu/mL,阳性克隆子的比例为97％,插入片段的大小在500～3 000bp,平均大于1000bp.结论 构建的文库无论从库容量、克隆效率,还是全长率方面评价,均达到了高质量文库的要求.
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番红花组织培养及快速繁殖研究
目的 为番红花的快速繁殖提供依据.方法 添加不同种类及不同浓度的激素,对番红花进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导及球茎培养.结果 愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA;丛生芽诱导的适宜培养基为MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA;在光照条件下,丛生芽可分化出小球茎.结论 利用组织培养技术能够实现番红花快速繁殖.
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筛选草珊瑚黄酮高产细胞克隆系的研究
植物单细胞克隆的研究,国际上自20世纪70年代以后迅速发展.其原因是,一方面理论研究的需要,另一方面细胞工程的研究,特别是植物次级代谢工业化生产的兴起,推动了单细胞克隆研究的发展[1,2].笔者在江西省自然科学基金资助下,已研究报道了草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai愈伤组织启动诱导、悬浮细胞培养系统[3～5]和建立了一套适合草珊瑚细胞克隆的平板培养技术[6].
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老鸦瓣芽茎组织培养初步研究
目的 建立老鸦瓣芽茎愈伤组织诱导及丛生芽增殖体系.方法 以老鸦瓣冷藏芯芽产生的芽茎为外植体,MS为基本培养基,考察不同质量浓度6-BA、NAA对愈伤诱导、分化及丛生芽增殖的影响.结果 芽茎诱导愈伤的佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 2.0 mg/L,愈伤诱导率78.54％,诱导出的愈伤组织在原培养基上继代培养增殖后即可进行芽分化;愈伤分化不定芽佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L,芽诱导率为66.21％;丛生芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数2.48.结论 筛选出芽茎诱导愈伤、分化不定芽及丛生芽增殖的培养基,初步建立了老鸦瓣芽茎组织培养体系.
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HPLC测定银杏愈伤组织内酯A的研究
建立了一种可用于银杏离体细胞培养物中内酯A含量分析的RP-HPLC方法.样品经低浓度甲醇提取后,用中性或酸性氧化铝固相萃取柱纯化,用示差检测器检测,银杏内酯A的低检测限为0.012 μg,方法回收率为(96.0±2)%,RSD为3.1%.
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甘草组织培养的研究进展
甘草为我国常用的大宗药材之一,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用,素有“国老”、“十方九草”之誉,国内外用量很大.由于过度采挖,甘草野生资源遭到了严重破坏,而大部分栽培甘草存在品质退化和甘草酸量低等问题.为了很好地解决甘草资源可持续发展这一问题,很多研究者开展了甘草组织培养的研究.对甘草组织培养中外植体来源及预处理、愈伤组织诱导、再生植株诱导、快速繁殖研究、毛状根诱导以及组织培养物中活性成分6个方面结合实际工作进行了归纳与综述,以期为部分解决甘草的资源替代问题以及以组织培养为基础的基因与代谢工程研究提供理论及技术指导.
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喜树碱的生物合成途径及生物技术研究进展
喜树碱是从我国特有植物喜树中发现的一种具有抗癌活性的萜类吲哚生物碱,具有很好的药用价值.主要介绍喜树碱的合成器官、生物合成途径上已知的酶和基因,以及利用喜树愈伤组织和毛状根培养生产喜树碱的新进展.
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百合的组织培养
目的研究百合组培快繁的佳途径.方法在MS培养基上添加不同的激素配比;采用鳞叶不同部位作为外植体;改变培养方式.结果确定了外植体产生小鳞茎的佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+GA32.0mg/L;鳞叶的下部小块分化率高,为92.5%;小鳞茎叶脱分化形成愈伤组织后再分化可获得多而健壮的次级小鳞茎;次级小鳞茎采用液体振荡培养可快速增重.结论采用组织培养方式可进行百合的快速繁殖,使百合种球的工厂化生产成为可能.
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南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化
介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在MS-培养基上,附加不同种类和浓度配比的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较,其中当2,4-D 1.2 mg/L+6-BA 2.8 mg/L+NAA 3 mg/L或4 mg/L时,愈伤组织诱导率和生长量高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响.为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径.
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南方红豆杉愈伤组织培养的研究
对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及适培养基组成成分进行了探讨.结果表明,2,4-D比NAA更有利于愈伤组织的形成.培养基中添加适当浓度的CA、Phe和乙酸钠能促进南方红豆杉愈伤组织的生长和紫杉醇的积累.
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冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究
用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬凌草愈伤组织,并探讨了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响.结果表明:从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以MS+2,4-D1mg/L+NAA0.5mg/L培养基较好,愈伤组织诱导率高达96.80%.用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而以悬浮培养15～18d的单细胞为材料,接种密度为5×103个/毫升时,进行条件培养和看护培养,植板率达21.63%.本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬凌草素细胞株时参考.
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药用植物莪术的组织培养快速繁殖与植株再生的研究
通过茎尖培养实现了中药莪术试管苗的快速繁殖并从试管苗基部诱导出了愈伤组织.实验表明:以MS培养基为基本培养基,附加ZT 4.0 mg/L+IAA 0.5 ～1.0 mg/L适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D 1.0 mg/L + KT 4.0～6.0 m g/L 适于愈伤组织的诱导;附加 2,4-D 1.0～2.0 mg/L + KT 0.2～0.5 mg/L 适于愈伤组织的继代培养;附加 KT 4.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L 适于愈伤组织的分化.
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pH对红豆杉愈伤组织生长、PAL活性和紫杉醇含量的影响
目的研究不同pH值对东北红豆杉和南方红豆杉愈伤组织生长和紫杉醇含量的影响.方法采用不同pH值的B5培养基培养两种红豆杉愈伤组织,测定生长率、PAL活性和紫杉醇含量.结果不同红豆杉愈伤组织所需适pH值不同,而有利于愈伤组织生长的pH值均不利于PAL活性的提高和紫杉醇的积累.即:愈伤组织生长快时,PAL活性将下降,紫杉醇含量也减少.结论 pH值明显影响红豆杉愈伤组织的生长及次级代谢水平,从而影响了紫杉醇的合成与积累.
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正交设计在何首乌组织培养中的应用
用正交设计法考察了 4 种激素对何首乌嫩茎、叶诱导愈伤组织产生的影响.方差分析结果显示:2,4-D、IBA 作用极显著,6-BA作用显著,NAA 作用不显著,它们作用大小依次为:2,4-D＞IBA＞6-BA＞NAA,诱导何首乌愈伤组织产生的佳激素配比为:MS+2,4-D 1mg/L (以下单位同)+6-BA 1+IBA 0.5.
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三裂叶野葛茎段和叶柄培养成再生植株
三裂叶野葛的叶柄和茎段外植体在含有6-BA 1.0 mg/L 和 N AA 0.1 mg/L 的 MS 培养基上产生愈伤组织,愈伤诱导率分别为 100% 和 94%,并进一步分化出芽,芽再生率分别为 100% 和 33.3%.而在添加 6-BA 3.0 mg/L 和 NAA 1.0 mg /L 的 MS 培养基中叶柄和茎段外植体的愈伤诱导率分别为 100% 和 64.3%, 芽再生率分别为 57.1% 和 21.4%.芽长成嫩枝后转移至添加 0.1 mg/L NAA 的 MS 培养基后分化出根,形成小植株.再生植株的移栽成活率达90%.
